大多數(shù)的細(xì)胞計(jì)數(shù)儀都是基于染料，以臺(tái)盼藍(lán)為主，其是最主要和應(yīng)用最廣的一種染料，還有一種是熒光染料，以吖啶橙（AO）和碘化丙啶（PI）為主。除了基于染料的方法外，還有庫(kù)爾特細(xì)胞計(jì)數(shù)方法。下面，我們就一一撥開(kāi)這些技術(shù)的面紗：

【臺(tái)盼藍(lán)染色計(jì)數(shù)】

臺(tái)盼藍(lán)是使用最廣的細(xì)胞活性染料，常用于檢測(cè)細(xì)胞濃度與死活?；罴?xì)胞有完整的細(xì)胞膜，臺(tái)盼藍(lán)無(wú)法進(jìn)入細(xì)胞內(nèi)部，因此活細(xì)胞不會(huì)被染色，而死細(xì)胞細(xì)胞膜破裂，臺(tái)盼藍(lán)可進(jìn)入細(xì)胞內(nèi)部并將其染成藍(lán)色。細(xì)胞經(jīng)過(guò)臺(tái)盼藍(lán)處理后，再通過(guò)顯微鏡下觀察或采用成像拍照技術(shù)，就可以對(duì)細(xì)胞進(jìn)行計(jì)數(shù)和活率分析。目前，根據(jù)細(xì)胞染色、測(cè)試和分析的方式，分為手動(dòng)、半自動(dòng)和全自動(dòng)三類(lèi)。

手動(dòng)細(xì)胞計(jì)數(shù)和活率分析

手動(dòng)計(jì)數(shù)是傳統(tǒng)的計(jì)數(shù)方法，也是我們細(xì)胞工作者歷歷在目的“練眼力神法”。操作者使用臺(tái)盼藍(lán)將細(xì)胞進(jìn)行染色處理，孵育1-3分鐘后，通過(guò)移液器或滴管將其加入血球計(jì)數(shù)板的計(jì)數(shù)區(qū)，為防止產(chǎn)生氣泡，必須一次性充滿計(jì)數(shù)區(qū)，然后在顯微鏡下靠眼力人工數(shù)取標(biāo)準(zhǔn)方格中的細(xì)胞數(shù)和活死細(xì)胞數(shù)，再根據(jù)稀釋倍數(shù)和所取的樣品體積，計(jì)算出總的細(xì)胞濃度和細(xì)胞活率。由于手動(dòng)計(jì)數(shù)費(fèi)時(shí)費(fèi)力，且不同操作者之間的計(jì)數(shù)重復(fù)性誤差較大，即使是同一操作者也會(huì)出現(xiàn)重復(fù)性差的計(jì)數(shù)結(jié)果，使得結(jié)果的可靠性和準(zhǔn)確性無(wú)法保證，因此，現(xiàn)在很多細(xì)胞工作者紛紛轉(zhuǎn)向全自動(dòng)的儀器設(shè)備，以獲得穩(wěn)定準(zhǔn)確的結(jié)果，并真真正正的解放人力。

半自動(dòng)細(xì)胞計(jì)數(shù)和活率分析

半自動(dòng)計(jì)數(shù)是在臺(tái)盼藍(lán)染色的基礎(chǔ)上，采用相機(jī)拍照進(jìn)行分析的方法。其前期樣品制備的工作和手動(dòng)計(jì)數(shù)方法相同，人工臺(tái)盼藍(lán)染色、孵育后，通過(guò)移液器將細(xì)胞樣品加入到波片計(jì)數(shù)板上，再把波片計(jì)數(shù)板插入到半自動(dòng)分析儀的檢測(cè)區(qū)，手動(dòng)調(diào)整半自動(dòng)分析儀上的旋鈕，主觀選擇染色較好且清晰的拍照區(qū)域，最多選取3-4個(gè)區(qū)域進(jìn)行拍照，再通過(guò)軟件進(jìn)行拍照控制和拍照后的數(shù)據(jù)分析。從過(guò)程上來(lái)看，半自動(dòng)計(jì)數(shù)方法只是把數(shù)取細(xì)胞和計(jì)算濃度與活率設(shè)定為自動(dòng)，其它操作、包括拍照區(qū)域的選擇都是人工操作，且統(tǒng)計(jì)意義較小，因此，從根本上來(lái)講，其并沒(méi)有解決和實(shí)現(xiàn)一致性的計(jì)數(shù)和活率分析。

全自動(dòng)細(xì)胞計(jì)數(shù)和活率分析

全自動(dòng)計(jì)數(shù)是真正意義上的全自動(dòng)細(xì)胞測(cè)試，包括臺(tái)盼藍(lán)染色、上樣、拍照、測(cè)試、分析和數(shù)據(jù)記錄，以貝克曼庫(kù)爾特公司生產(chǎn)的Vi-CELL XR為典型代表。操作者僅需將待測(cè)細(xì)胞放入樣品盤(pán)，全自動(dòng)分析儀Vi-CELL XR便會(huì)自動(dòng)執(zhí)行臺(tái)盼藍(lán)染色，并將染色后的細(xì)胞樣品抽取至流動(dòng)池，通過(guò)視頻捕獲技術(shù)進(jìn)行相機(jī)拍照，可連續(xù)拍攝多達(dá)100張的圖像信息，統(tǒng)計(jì)量是其它方法的15-30倍。拍照后，應(yīng)用全自動(dòng)的測(cè)試分析，采用同一參數(shù)分析相同的樣品，保證了細(xì)胞計(jì)數(shù)和活率分析更加標(biāo)準(zhǔn)和規(guī)范，測(cè)試結(jié)果也更準(zhǔn)確。測(cè)試后，各項(xiàng)測(cè)試數(shù)據(jù)自動(dòng)以word、excel、PDF等多種格式保存，實(shí)現(xiàn)了數(shù)據(jù)記錄的準(zhǔn)確無(wú)差。為了滿足GMP和FDA 21 CFR Part 11的要求，所有測(cè)試數(shù)據(jù)均以數(shù)據(jù)庫(kù)格式保存，擁有完整的電子記錄和電子簽名功能。為了監(jiān)測(cè)細(xì)胞在不同培養(yǎng)條件下的生長(zhǎng)狀態(tài)，Vi-CELL XR可自動(dòng)地跟蹤培養(yǎng)細(xì)胞的各種狀態(tài)參數(shù)，同時(shí)根據(jù)需要制作細(xì)胞生長(zhǎng)曲線。為了滿足對(duì)高通量測(cè)試的需求，Vi-CELL XR可連續(xù)進(jìn)行樣品的測(cè)試，12位的全自動(dòng)樣品盤(pán)可連續(xù)旋轉(zhuǎn)運(yùn)行，實(shí)現(xiàn)不間斷的樣品測(cè)試，真正實(shí)現(xiàn)了無(wú)人為干擾，完全無(wú)差別的自動(dòng)化準(zhǔn)確分析。

【熒光染色計(jì)數(shù)】

目前應(yīng)用熒光染色法進(jìn)行細(xì)胞計(jì)數(shù)和活率分析是另一種半自動(dòng)細(xì)胞計(jì)數(shù)法，只不過(guò)其采用的染料由臺(tái)盼藍(lán)更換成了熒光染料，多為碘化丙啶（PI）和吖啶橙（AO）雙染料。PI是一種DNA結(jié)合性染料，無(wú)膜通透性，不能透過(guò)活細(xì)胞膜，因此只能染死細(xì)胞，熒光顯微鏡下觀察為紅色熒光。而AO具有膜通透性，能透過(guò)細(xì)胞膜，使核DNA和RNA染色，產(chǎn)生綠色或黃綠色均勻熒光。因此，通過(guò)產(chǎn)生的熒光差異，采用拍照技術(shù)，便可實(shí)現(xiàn)細(xì)胞計(jì)數(shù)和活率的分析。

正如在臺(tái)盼藍(lán)染色計(jì)數(shù)中對(duì)半自動(dòng)細(xì)胞計(jì)數(shù)和活率分析的描述，操作者需要對(duì)細(xì)胞進(jìn)行熒光染料處理，目前常用的方式有兩種，一種是雙熒光染料一次性采樣裝置，使用此采樣裝置將待測(cè)細(xì)胞吸入，然后插入到半自動(dòng)分析儀的檢測(cè)區(qū)，另一種是將熒光染色處理后的細(xì)胞用移液器加入到波片計(jì)數(shù)板上，然后將計(jì)數(shù)板插入到檢測(cè)區(qū)，再通過(guò)手動(dòng)調(diào)整拍照位置進(jìn)行拍照并進(jìn)行數(shù)據(jù)分析。

【庫(kù)爾特細(xì)胞計(jì)數(shù)】

庫(kù)爾特計(jì)數(shù)是采用庫(kù)爾特原理（又名電阻法）進(jìn)行細(xì)胞計(jì)數(shù)的方法，細(xì)胞通過(guò)置于電解液中且內(nèi)外裝有電極的小孔管，置換掉同等體積的電解液，從而引起小孔管內(nèi)外電極間電阻的變化，形成電壓脈沖，脈沖個(gè)數(shù)反映的是通過(guò)小孔管的細(xì)胞的個(gè)數(shù)，脈沖的高度反映的是通過(guò)小孔管的細(xì)胞的大小，只要有一個(gè)細(xì)胞通過(guò)小孔管，就會(huì)形成特定的脈沖，因此，通過(guò)記錄脈沖個(gè)數(shù)和高度，便可實(shí)現(xiàn)準(zhǔn)確的細(xì)胞計(jì)數(shù)和粒度分析。庫(kù)爾特計(jì)數(shù)器也是標(biāo)準(zhǔn)的血細(xì)胞計(jì)數(shù)方法，作為細(xì)胞計(jì)數(shù)來(lái)說(shuō)，是行業(yè)內(nèi)最準(zhǔn)確的細(xì)胞計(jì)數(shù)器。但鑒于其原理，庫(kù)爾特計(jì)數(shù)器并不能直接給出細(xì)胞的活率信息，但庫(kù)爾特計(jì)數(shù)器的分辨率為納米級(jí)，因此，可以根據(jù)活死細(xì)胞間的體積差異，在一定程度上間接獲知細(xì)胞活率信息。