賽默飛世爾參與推出禽流感快速高通量檢測(cè)新技術(shù)

賽默飛世爾公司產(chǎn)品KingFisher系列自動(dòng)化磁珠提取純化儀器，聯(lián)合Invitrogen公司Ambion病毒RNA提取試劑盒，將傳統(tǒng)方法的禽流感檢測(cè)由21天縮短至4小時(shí)左右。此技術(shù)經(jīng)過(guò)美國(guó)國(guó)家獸醫(yī)服務(wù)實(shí)驗(yàn)室(NVSL)驗(yàn)證，是美國(guó)農(nóng)業(yè)部認(rèn)可的禽流感檢測(cè)的分子生物學(xué)方法。該技術(shù)已由賽默飛世爾公司引進(jìn)中國(guó)，將對(duì)促進(jìn)我國(guó)禽產(chǎn)品的出口創(chuàng)匯、降低成本和疫情早期診斷具有重大意義。

禽流感快速高通量檢測(cè)新技術(shù)是基于分子生物學(xué)的方法，在病毒感染的初期即可快速確診病毒的存在。該方法包括兩大主要步驟。第一步，聯(lián)合使用賽默飛世爾公司的KingFisher自動(dòng)化磁珠提取純化儀器，及Invitrogen公司的Ambion病毒RNA提取試劑盒，進(jìn)行自動(dòng)化的病毒RNA提取。該步驟需要約30分鐘。第二步，實(shí)時(shí)定量RT-PCR檢測(cè)病毒RNA。該步驟需要約3小時(shí)。整體方法經(jīng)過(guò)優(yōu)化，并經(jīng)過(guò)超過(guò)200,000禽類咽喉拭子樣品的檢測(cè)驗(yàn)證。

這項(xiàng)技術(shù)可以用于從生物體液和無(wú)細(xì)胞樣品中，如血清、血漿、口腔拭子和細(xì)胞培養(yǎng)液中，提取病毒RNA。從無(wú)細(xì)胞樣品中分離純化RNA比從組織和培養(yǎng)細(xì)胞中分離純化RNA更具挑戰(zhàn)性。這是因?yàn)榈偷牟《镜味�、大的操作體積和樣品的復(fù)雜性，且操作步驟必須適合實(shí)時(shí)定量RT-PCR。使用自動(dòng)化磁珠提取方法可滿足上述各項(xiàng)要求，賽默飛世爾公司的KingFisher專利磁珠提取技術(shù)，不需有機(jī)溶劑或RNA沉淀步驟，消除了基于濾膜的方法經(jīng)常碰到的問題，如濾膜堵塞、大的洗脫體積和不穩(wěn)定的產(chǎn)率。而結(jié)合后續(xù)的實(shí)時(shí)定量RT-PCR，可儀檢測(cè)到低至10拷貝的病毒RNA，極大提高了禽流感病毒檢測(cè)的靈敏度。

禽流感快速高通量檢測(cè)新技術(shù)比較傳統(tǒng)方法的優(yōu)勢(shì)

• 靈敏度極高，可從100-400ul樣品中分離到少至10拷貝的病毒RNA
• 對(duì)于96個(gè)樣品，整個(gè)磁珠提取純化過(guò)程不超過(guò)30分鐘，整個(gè)禽流感檢測(cè)過(guò)程不超過(guò)4個(gè)小時(shí)
• 用于低病毒濃度時(shí)尤其理想
• 線性純化效率低至50轉(zhuǎn)錄子
• 經(jīng)美國(guó)國(guó)家獸醫(yī)服務(wù)實(shí)驗(yàn)室(NVSL)認(rèn)證可用于AI/ND病毒

線性純化效率可低至10拷貝的轉(zhuǎn)錄子

用MagMAX病毒RNA提取試劑盒，可以從血漿和血清中定量純化病毒RNA，線性范圍大于約5個(gè)數(shù)量級(jí)。這可由血漿、血清和水樣品的試驗(yàn)體系中，以系列稀釋的RNA作對(duì)照。

圖一 病毒RNA提取效率

圖一的定量RT-PCR結(jié)果說(shuō)明RNA的純化率在很大的病毒濃度的范圍內(nèi)均為線性，含少至10個(gè)拷貝的轉(zhuǎn)錄子的樣品也可被純化。

基于磁珠的純化技術(shù)的好處

磁珠用于從細(xì)胞中純化RNA和從無(wú)細(xì)胞樣品中純化病毒RNA有許多好處。RNA產(chǎn)率更穩(wěn)定，不僅是實(shí)驗(yàn)到實(shí)驗(yàn)間的差異極小，而且是大范圍的樣品尺寸所得到的RNA產(chǎn)率也很穩(wěn)定。磁珠技術(shù)消除了因細(xì)胞聚集而產(chǎn)生濾膜堵塞的情況，因?yàn)楦咝У拇胖榻Y(jié)合僅需很小體積的磁珠，所以結(jié)合的RNA用20-50ul的不含核酸酶的水就可以洗脫。這使得磁珠純化技術(shù)對(duì)于從大體積、稀釋樣品中濃縮RNA極其有用。

圖二 賽默飛世爾公司KingFisher Flex自動(dòng)化磁珠提取純化儀

KingFisher(圖二)專利的磁珠提取純化技術(shù)，用轉(zhuǎn)移磁珠代替了轉(zhuǎn)移溶液，因此具有更高的提取純化效率和產(chǎn)率。

關(guān)于賽默飛世爾科技(Thermo Fisher Scientific)

賽默飛世爾科技 (Thermo Fisher Scientific)(紐約證交所代碼：TMO)是全球科學(xué)服務(wù)領(lǐng)域的領(lǐng)導(dǎo)者，致力于幫助客戶使世界更健康、更清潔、更安全。公司年銷售額超過(guò)100億美元，擁有員工約33,000人，在全球范圍內(nèi)服務(wù)超過(guò)350,000家客戶。主要客戶類型包括：醫(yī)藥和生物公司，醫(yī)院和臨床診斷實(shí)驗(yàn)室，大學(xué)、科研院所和政府機(jī)構(gòu)，以及環(huán)境與工業(yè)過(guò)程控制裝備制造商等。公司借助于Thermo Scientific和Fisher Scientific這兩個(gè)主要的品牌，幫助客戶解決在分析化學(xué)領(lǐng)域從常規(guī)的測(cè)試到復(fù)雜的研發(fā)項(xiàng)目中所遇到的各種挑戰(zhàn)。Thermo Scientific能夠?yàn)榭蛻籼峁┮徽�套包括高端分析儀器、實(shí)驗(yàn)室裝備、軟件、服務(wù)、耗材和試劑在內(nèi)的實(shí)驗(yàn)室綜合解決方案。Fisher Scientific為衛(wèi)生保健，科學(xué)研究，以及安全和教育領(lǐng)域的客戶提供一系列的實(shí)驗(yàn)室裝備、化學(xué)藥品以及其他用品和服務(wù)。賽默飛世爾科技將努力為客戶提供最為便捷的采購(gòu)方案，為科研的飛速發(fā)展不斷地改進(jìn)工藝技術(shù)，提升客戶價(jià)值，幫助股東提高收益，為員工創(chuàng)造良好的發(fā)展空間。欲獲取更多信息，請(qǐng)瀏覽公司的網(wǎng)站：