德國IKA推出蛋白質(zhì)免疫印跡套裝“姐妹花”工具包
瀏覽次數(shù):5206 發(fā)布日期:2017-1-4
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Western Blot所需要的工具包,就在這里
——德國IKA蛋白質(zhì)免疫印跡套裝“姐妹花”
自1979年發(fā)明以來,Western Blot(WB)已成為生命科學(xué)領(lǐng)域最常用的研究方法之一,它是一種公認(rèn)的、基于構(gòu)建抗體-蛋白質(zhì)復(fù)合物的蛋白質(zhì)檢測與分析技術(shù)。今天,請各位隨小編一探WB的奇妙世界,我們來一起分析它最讓我們“糾結(jié)”的操作點,并找出解決方法!
首先,一個經(jīng)典的WB流程長成這樣——
其次,我們在做WB時最常遇到的問題也是驚人的相似——樣品漂浮、蛋白條帶扭曲(無法準(zhǔn)確判斷蛋白分子量)、轉(zhuǎn)膜后看不到帶藍(lán)色或橙色的指示條帶、抗體孵育不均勻?qū)е缕毓舛炔町惡艽螅ㄒ廊皇菚绊懙降鞍妆磉_(dá)量的估算)。
這些問題其實都或多或少與樣品前處理有關(guān)。也就是說,我們完全可以通過優(yōu)化樣品處理手法,以及經(jīng)驗累積,來獲得完美的WB結(jié)果。
表1:Western Blot常見問題分析
常見問題 |
原因分析 |
解決方法 |
樣品漂浮 |
樣品中含有未除凈的溶劑或雜質(zhì),其密度比電泳緩沖液小 |
處理組織或菌體時,需充分分散或裂解,確保目的蛋白盡可能的釋放;
熱處理粗樣時,確保升溫迅速,并且金屬浴或水溫的實際溫度達(dá)到100℃(在海拔較高處水的沸騰不能確保溫度);
離心的轉(zhuǎn)速和時間足夠;
吸取上清液時盡量不要碰到中間層
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蛋白條帶扭曲 |
分離膠的濃度與蛋白分子量不對應(yīng);灌膠時間過長或過短,導(dǎo)致丙烯酰胺的交聯(lián)度不均勻 |
根據(jù)目的蛋白的分子量選擇正確的分離膠濃度;
制備分離膠與濃縮膠時,應(yīng)保證緩沖液母液的正確稀釋,以及各組分的充分混勻(僅用移液器吹吸是不夠的,最好可以迅速用磁力攪拌器進(jìn)行混勻)
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轉(zhuǎn)膜后沒有指示條帶 |
如果此時SDS-PAGE膠上也沒有指示劑,則表明轉(zhuǎn)膜時間過長,蛋白穿膜(此時就沒有再繼續(xù)做下去的必要了) |
注意控制轉(zhuǎn)膜時間;
電泳液反復(fù)使用也可能導(dǎo)致轉(zhuǎn)膜失敗 |
抗體孵育不均勻 |
孵育時振蕩搖床轉(zhuǎn)速過快,或是混勻直徑不夠,導(dǎo)致孵育不充分或不均勻 |
確保搖床可以在50 rpm穩(wěn)定運行;
選擇振蕩直徑在5~10 mm范圍內(nèi)的搖床
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德國IKA為您提供“姐妹花”版本的蛋白質(zhì)免疫印跡套裝,為廣大生命科學(xué)工作者提供最適合您操作習(xí)慣的產(chǎn)品組合:
表2中的產(chǎn)品簡介如下,德國品質(zhì),始終如一,值得您信賴——
* T10 標(biāo)準(zhǔn)型套裝:高速均質(zhì)機(jī),用于分散組織于緩沖液,可選配一次性分散頭,避免反復(fù)清潔導(dǎo)致的交叉污染
* DBH 1:金屬浴,用于迅速升溫的加熱反應(yīng),標(biāo)配PT 1000.60溫度傳感器,可準(zhǔn)確測量溫度并在大數(shù)顯屏上顯示,方便同時觀察設(shè)定溫度和實際溫度,帶有計時功能
* ICC basic eco 18:恒溫水浴,二元一體泵可確保極佳的升溫速率和溫度均一性,透明浴槽方便觀察,智能的高、低液位報警方便日常操作
* Vortex 2:渦旋振蕩
器,用于劇烈混勻,可選配多種夾具,持久耐用,并可在振蕩多個EP管、試管時解放您的雙手,機(jī)身堅固穩(wěn)定,避免移動產(chǎn)生撞擊風(fēng)險
* KS 260基本型:振蕩搖床,混勻直徑10 mm,實際工作轉(zhuǎn)速范圍50 – 500 rpm,在低轉(zhuǎn)速下可長時間穩(wěn)定運行,完全滿足生命科學(xué)實驗室的多種振蕩需求,可靈活選配多種夾具
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