第十二期CRISPR/Cas9基因靶向修飾技術(shù)南京學(xué)習(xí)班

 

2017年6月23-25日 周五-周日 (理論與實(shí)驗(yàn)相結(jié)合)

 

 

南京大學(xué)模式動(dòng)物研究所 遺傳學(xué)與發(fā)育生物學(xué)教授

學(xué)士（1983-1987年，南京大學(xué)）、碩士（1987-1990年，南京大學(xué)）、博士（1996-2001，普渡大學(xué)）

2001-2003年在杜克大學(xué)醫(yī)學(xué)中心進(jìn)行博士后訓(xùn)練

2003年全職加入南京大學(xué)模式動(dòng)物研究，2006年晉升為教授

 

往期學(xué)員評(píng)價(jià)   

                  

評(píng)價(jià)一：CRISPR/Cas9系統(tǒng)是一種新興的基因定點(diǎn)編輯技術(shù)，越來(lái)越被研究者所關(guān)注。在趙慶順教授理論結(jié)合實(shí)際、幽默接地氣的授課方式下，為期兩天半的培訓(xùn)輕松且充實(shí)，讓我從對(duì)CRISPR/Cas9技術(shù)的毫無(wú)所知，到對(duì)該技術(shù)原理及應(yīng)用有了的全面認(rèn)識(shí)；同時(shí)，結(jié)合開(kāi)展的實(shí)驗(yàn)環(huán)節(jié)，掌握了CRISPR序列的設(shè)計(jì)，基因組編輯工具的制備及向細(xì)胞內(nèi)遞送的方法；熟悉了利用CRISPR技術(shù)在動(dòng)植物中敲入和敲除的過(guò)程；了解了CRISPR/Cas9脫靶問(wèn)題解決方案。通過(guò)本次學(xué)習(xí)，受益匪淺！

 

評(píng)價(jià)二：有幸全程聆聽(tīng)趙教授的課，教授授課邏輯性非常強(qiáng)、條理清晰、講解生動(dòng)細(xì)致、內(nèi)容豐富。教授知識(shí)面很廣、知無(wú)不答言無(wú)不盡，絕對(duì)是個(gè)專業(yè)的研究學(xué)者。特別是對(duì)哪些技巧和注意哪些關(guān)鍵點(diǎn)講的非常實(shí)用。比較適合從事動(dòng)物植物細(xì)菌等微生物研究人員來(lái)學(xué)習(xí)。課程安排合理，由淺入深，適合不同人群，希望這個(gè)班能讓更多的科研人員獲益。

 

評(píng)價(jià)三：我是2016年在上海參加過(guò)趙教授的學(xué)習(xí)班，因我基礎(chǔ)比較差，在實(shí)際應(yīng)用過(guò)程中遇到了很多的問(wèn)題，非常感謝南京堯順禹生物科技有限公司工作人用耐心細(xì)致的課后服務(wù)。2017年2月主辦單位上�，|瑜生物科技有限公司謝老師告知我老學(xué)員可以終身免費(fèi)繼續(xù)學(xué)習(xí)，我又去了一次南京。真是每一次都有不同的收獲，感謝感謝再感謝，也�，|瑜公司越辦越好。

 

 

第一天上午9:00-12:00

 

1、基因功能研究的分子遺傳學(xué)技術(shù)簡(jiǎn)介      

2、基于NHEJ修復(fù)的基因敲除和基于HR修復(fù)的基因敲入 

3、ZFN和TALEN技術(shù)        

4、CRISPR/Cas9技術(shù)     

 

1、目標(biāo)基因結(jié)構(gòu)及功能的生物信息學(xué)分析  

2、CRISPR的設(shè)計(jì)原則   

3、CRISPR的在線設(shè)計(jì)（可自帶可無(wú)線上網(wǎng)之筆記本電腦或手機(jī)）

4、靶向編輯基因的基因型確認(rèn)及CRISPR的再設(shè)計(jì)

 

第一天下午13:00-17:00

 

1、基因組編輯工具之DNA表達(dá)元件的制備與遞送策略  

2、2、基因組編輯工具轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物制備及遞送策略  

3、3、基因編輯工具RNP的制備與遞送策略

 

1、CRISPR模板引物的準(zhǔn)備    

2、CRISPR模板的制備  

3、退火CRISPR模板與線性化CRISPR/Cas9 All-in-One載體的重組       

4、大腸桿菌的轉(zhuǎn)化              

5、攜帶基因組編輯工具的轉(zhuǎn)化子的涂板培養(yǎng)

 

第二天上午9:00-12:00

 

1、體外法    

2、2、體內(nèi)法   

3、2.1 插入缺失（Indel）突變檢測(cè)的基本策略 

4、2.2 基于胚胎反應(yīng)器的活性驗(yàn)證方法 

5、2.3 基于細(xì)胞系的活性驗(yàn)證方法

 

基因組編輯工具之CRISPR/Cas9 All-in-One重組子的快速驗(yàn)證法（PCR法） 

 

1、基因組DNA模板制備    

2、2、目標(biāo)基因的基因組DNA片段的PCR擴(kuò)增

 

第二天下午13:00-17:00

 

1、創(chuàng)建基因組編輯細(xì)胞系的基本過(guò)程   

2、基因敲入的供體DNA的設(shè)計(jì)原則及基因敲入供體設(shè)計(jì)實(shí)例

3、表達(dá)CRISPR的All-in-One表達(dá)質(zhì)粒（和供體）導(dǎo)入細(xì)胞系的方法   

4、陽(yáng)性細(xì)胞克隆篩選   

5、靶向突變的基因型鑒定及基因組編輯細(xì)胞系的建立  

6、敲入基因和敲除基因（無(wú)效等位基因）的確認(rèn)  

7、建立基因組編輯細(xì)胞系的優(yōu)選策略

 

1、創(chuàng)建基因組編輯動(dòng)物突變體的基本過(guò)程   

2、sgRNA/Cas9 mRNA（和供體）共顯微注射入受精卵中建立初建者 

3、初建者體細(xì)胞攜帶靶向突變等位基因的確認(rèn)   

4、基因敲除/敲入動(dòng)物（F1）的鑒定 

5、基因敲除/敲入動(dòng)物品系（F2）的建立 

6、敲除/敲入基因的確認(rèn)  

7、建立基因敲除或敲入突變體動(dòng)物的優(yōu)選策略

 

1、創(chuàng)建基因組編輯植物突變體的基本過(guò)程 

2、雙元載體的轉(zhuǎn)染

3、基因敲除/敲入植物（F1）鑒定

 

1、CRISPR/Cas9 All-in-One重組子的PCR產(chǎn)物電泳檢測(cè)結(jié)果點(diǎn)評(píng) 

2、基因組編輯等位基因的基因型鑒定電泳檢測(cè)結(jié)果的點(diǎn)評(píng) 

3、測(cè)序是驗(yàn)證基因組編輯結(jié)果的金標(biāo)準(zhǔn) 

 

第三天上午9:00-12:00（12:00以后課程結(jié)束）

 

1、脫靶的產(chǎn)生原因   

2、2、脫靶檢測(cè)  

3、3、解決脫靶問(wèn)題的方法 

4、4、脫靶問(wèn)題對(duì)不同領(lǐng)域研究者的意義

 

1、dCas9的特征簡(jiǎn)介  

2、運(yùn)用CRISPR技術(shù)調(diào)控基因在細(xì)胞中表達(dá)的基本實(shí)驗(yàn)過(guò)程   

3、CRISPR技術(shù)的轉(zhuǎn)錄抑制 

4、CRISPR技術(shù)的轉(zhuǎn)錄活化

 

1、 新型基因組編輯技術(shù)的發(fā)展（堿基編輯）  

2、基因組編輯技術(shù)的應(yīng)用 

3、基因組編輯技術(shù)對(duì)未來(lái)社會(huì)的革命性的影響   

4、基因組編輯技術(shù)的倫理學(xué)問(wèn)題

 

【主辦單位】 上�，|瑜生物科技有限公司

【時(shí)間地點(diǎn)】 2017年6月23-25日   南京市 江北新區(qū) 浦口經(jīng)濟(jì)開(kāi)發(fā)區(qū)低碳谷

【住    宿】 為了便于接送、統(tǒng)一指定南京龍華大酒店，住宿自理

 標(biāo)準(zhǔn)間（含早）280元/人  合住140元/人 南京浦口區(qū)江浦街道龍華路2號(hào)近南京工業(yè)大學(xué)浦口校區(qū)

【收費(fèi)標(biāo)準(zhǔn)】 3300元/人 (不含住宿費(fèi))  授課期間發(fā)放紙質(zhì)邀請(qǐng)函（蓋章） 按交費(fèi)先后順序確定名額及座位，注冊(cè)費(fèi)包含教材、午餐等費(fèi)用。 

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