BMG酶標(biāo)儀發(fā)布植物活細(xì)胞ATP高通量實(shí)時(shí)監(jiān)測(cè)解決方案

ATP作為重要的能量物質(zhì)，其代謝生化機(jī)制早已被研究地清清楚楚，然而植物活細(xì)胞內(nèi)ATP實(shí)時(shí)動(dòng)態(tài)變化情況還有大量未知信息。雖然已有多種ATP感應(yīng)蛋白用于動(dòng)物細(xì)胞ATP動(dòng)態(tài)實(shí)時(shí)檢測(cè)，然而植物活細(xì)胞內(nèi)ATP的動(dòng)態(tài)實(shí)時(shí)監(jiān)測(cè)，一直很少有穩(wěn)定可靠方法。

近日，Valentina De Co等人采用新型ATP感應(yīng)蛋白ATeam1.03-nD/nA，建立了一種基于熒光能量共振轉(zhuǎn)移（FRET）的方法，創(chuàng)造性地應(yīng)用于實(shí)時(shí)監(jiān)測(cè)植物活細(xì)胞ATP。ATeam1.03-nD/nA可在植物活細(xì)胞內(nèi)穩(wěn)定表達(dá)，蛋白結(jié)構(gòu)中間表達(dá)有ATP合成酶 Ɛ 亞基，一端表達(dá)CFP熒光集團(tuán)，一端表達(dá)Venus熒光集團(tuán)。當(dāng)有ATP結(jié)合時(shí)，ATeam1.03-nD/nA結(jié)構(gòu)發(fā)生改變，CFP與Venus距離變得更近，產(chǎn)生更加明顯的熒光能量共振轉(zhuǎn)移，獲得更高的Venus/CFP熒光信號(hào)比值（圖1）。通過(guò)實(shí)時(shí)監(jiān)測(cè)該熒光信號(hào)比值，即可實(shí)時(shí)動(dòng)態(tài)檢測(cè)植物活細(xì)胞ATP含量（圖2）。

Valentina De Co等人開(kāi)發(fā)的這種創(chuàng)新性應(yīng)用方案，為植物活細(xì)胞ATP動(dòng)態(tài)實(shí)時(shí)監(jiān)測(cè)提供了最佳檢測(cè)工具，將大大推動(dòng)植物細(xì)胞ATP動(dòng)態(tài)變化機(jī)制研究。其方案所用BMG CLARIOstar多功能酶標(biāo)儀擁有專利的線性漸變?yōu)V光片光柵技術(shù)（可檢測(cè)任意波長(zhǎng)熒光，8-100nm任意帶寬，滿足任意檢測(cè)要求），專為細(xì)胞檢測(cè)設(shè)計(jì)的頂讀和底讀選項(xiàng)，高精度頂讀和底讀自動(dòng)聚焦，高精度孔閾掃描，多色熒光動(dòng)力學(xué)檢測(cè)設(shè)計(jì)，以及精密靈活的氣體控制設(shè)計(jì)（氧氣和二氧化碳濃度（0.1-20%），單/雙控制），為活細(xì)胞ATP等能量代謝指標(biāo)分析提供了最佳選擇。

圖1，ATP感應(yīng)蛋白ATeam1.03-nD/n ATP結(jié)合效應(yīng)示意圖

圖2，擬南芥種子，在不同外界氧氣條件下ATP含量動(dòng)態(tài)實(shí)時(shí)監(jiān)測(cè)

正常大氣環(huán)境下，ATP含量維持穩(wěn)定不變（灰色曲線），Venus/CFP熒光信號(hào)比值維持穩(wěn)定。低氧條件下，ATP產(chǎn)量下降，Venus/CFP熒光信號(hào)比值下降（黑色和紅色曲線）。

參考資料

1、Imamura, Hiromi, et al. "Visualization of ATP levels inside single living cells with fluorescence resonance energy transfer-based genetically encoded indicators." Proceedings of the National Academy of Sciences 106.37 (2009): 15651-15656.

2、De Col, Valentina, et al. "ATP sensing in living plant cells reveals tissue gradients and stress dynamics of energy physiology." Elife 6 (2017).

想了解更多BMG多功能酶標(biāo)儀的應(yīng)用，在伯齊官方公眾號(hào)（微信號(hào)：Bio-Gene）輸入BMG酶標(biāo)儀相關(guān)的關(guān)鍵詞（不用輸入序號(hào)）：1、細(xì)胞代謝；2、鈣流；3、朊病毒；4、HTS； 5、FRET和BRET；6、BMG；7、儀器操作; 8、蛋白聚集

香港伯齊科技有限公司
Bio-Gene Technology Ltd.
廣州伯齊生物科技有限公司
400 600 9639
www.bio-gene.com.cn
marketing@bio-gene.com.cn
香港 北京 上海 廣州 成都 武漢 濟(jì)南