背景
1989年研究人員首次發(fā)現(xiàn)駱駝和羊駝等駱駝科體內(nèi)會(huì)產(chǎn)生一種獨(dú)特的抗體:
天然缺失輕鏈的重鏈抗體(HcAb),該抗體不像人工改造的單鏈抗體片段(scFv)那樣容易相互沾粘,甚至聚集成塊。該抗體只包含一個(gè)重鏈可變區(qū)(VHH)和兩個(gè)常規(guī)的CH2與CH3區(qū),重要的是
單獨(dú)克隆并表達(dá)出來(lái)的VHH結(jié)構(gòu)具有與原重鏈抗體相當(dāng)?shù)慕Y(jié)構(gòu)穩(wěn)定性以及與抗原的結(jié)合活性,是目前已知的可結(jié)合目標(biāo)抗原的最小單位。VHH晶體為2.5nm,長(zhǎng)4nm,分子量只有15KDa,因此也被稱作納米抗體(Nanobody,Nb)。納米抗體作為一種新型抗體片段,沒(méi)有傳統(tǒng)抗體的輕重鏈,只保留了完整的抗原結(jié)合部位,
具有相對(duì)分子量小、特異性高、親和力強(qiáng)等特性,非常適合于替代傳統(tǒng)抗體。因此基于納米抗體開(kāi)發(fā)出的Nanoselector Agarose Kit展示出了更好的應(yīng)用前景。
Nanoselector Agarose Kit是HUABIO推出的新一代IP/CoIP試劑盒,通過(guò)將高親和力,高特異的納米抗體定點(diǎn)偶聯(lián)到瓊脂糖上,并搭配成套的各種緩沖液,
不但可以避開(kāi)傳統(tǒng)方法抗體輕重鏈的干擾,還能方便實(shí)驗(yàn)操作,節(jié)省時(shí)間。
GFP-Nanoselector Agarose是以駝源GFP納米抗體為配基的親和純化介質(zhì),其納米抗體體積更小親和力更高,高密度牢固地結(jié)合于agarose beads上,用于捕捉GFP蛋白。GFP-Nanoselector Agarose能高效且特異的識(shí)別GFP, mEGFP, superfolder GFP,CFP 和YFP 變體,但不與 mCherry, mRFP, dsRed, mTagBFP, mTagRFP 等交叉反應(yīng)。通過(guò)GFP-Nanoselector Agarose kit完成IP /Co-IP /ChIP實(shí)驗(yàn),
可以使免疫沉淀更簡(jiǎn)易,更便捷,更可靠,更專業(yè),并且無(wú)傳統(tǒng)抗體的輕鏈和重鏈干擾。
產(chǎn)品優(yōu)勢(shì)
極端穩(wěn)定
由于納米抗體結(jié)構(gòu)簡(jiǎn)單,GFP-Nanoselector Agarose有著
極高穩(wěn)定性。該產(chǎn)品在70℃仍保持穩(wěn)定;此外,除了在生理性濃度鹽離子溶液中工作,GFP-Nanoselector Agarose可以
耐受高鹽、酸堿等惡劣環(huán)境,還能
耐受3M鹽酸胍,8M尿素,0.1% SDS等。其展現(xiàn)出的高穩(wěn)定性為研究人員選擇不同的實(shí)驗(yàn)條件提供了更多的可能。
高親和力、高結(jié)合力
通過(guò)嚴(yán)格的yeast display高通量篩選,挑選出高親和力和高特異性的GFP納米抗體,
其親和力低于1pM。
GFP-Nanoselector Agarose的高親和力提高了檢測(cè)的靈敏度,
既能穩(wěn)定捕捉微量樣品中少量的GFP蛋白,也能完全捕捉高濃度樣品中的所有GFP蛋白。該產(chǎn)品極高的特異性保證了實(shí)驗(yàn)的精確性,極大的降低了非特異性結(jié)合,顯著降低實(shí)驗(yàn)各種背景干擾。
縮短孵化時(shí)間
由于納米抗體的高親和力的特性,GFP-Nanoselector Agarose能快速穩(wěn)定的結(jié)合GFP蛋白(
只需5-30min),且多次試驗(yàn)結(jié)果穩(wěn)定,可重復(fù)性強(qiáng)。這既能保持實(shí)驗(yàn)高效進(jìn)行,又能節(jié)省實(shí)驗(yàn)時(shí)間和成本。
無(wú)輕重鏈干擾
納米抗體結(jié)構(gòu)單一,沒(méi)有傳統(tǒng)抗體的輕重鏈,在實(shí)驗(yàn)環(huán)節(jié)的各種條件都不會(huì)輕易破壞抗體結(jié)構(gòu),使得洗脫產(chǎn)物沒(méi)有輕鏈重鏈的影響。無(wú)論是western blot 還是MS都不再有傳統(tǒng)輕重鏈的干擾,因此可以輕易地鑒定與GFP融合蛋白特異性結(jié)合的蛋白。
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