賽多利斯講座預(yù)告：抗體樣品的高通量糖型篩選

下周四下午三點，陳老濕將在線與大家分享Octet及GlyM糖基化試劑盒在抗體樣品的高通量糖型篩選中的應(yīng)用，掃描上圖右下角二維碼即可報名參與。

究竟如何在細胞株構(gòu)建階段就實現(xiàn)高通量的糖型篩選呢？今天我們就先來一睹為快吧！
 

單克隆抗體的糖基化位點和結(jié)構(gòu)[1]

單克隆抗體糖基化修飾多數(shù)為 N-連接的聚糖。IgG抗體一般在Fc段的Asn297有一個保守的N糖基化位點。其核心結(jié)構(gòu)是由 3 個甘露糖（Man）和2 個 N-乙酰葡糖胺（GlcNAc）分子組成的復(fù)雜“雙觸角型”五糖分子的結(jié)構(gòu)，并且不同的糖型可含有不同數(shù)量的其他分子，如巖藻糖（Fuc）、甘露糖、N-乙酰葡糖胺、半乳糖（Gal）、二等分 N-乙酰葡糖胺和唾液酸（Sia）。這些糖鏈的長度、分叉的方式、單糖的排列順序的差異造成了N-聚糖復(fù)雜多變的結(jié)構(gòu)。
 

單克隆抗體常見糖型
 

糖型種類及豐度都可能影響蛋白藥物的有效性、安全性和質(zhì)量穩(wěn)定性。比如唾液酸含量越高，IgG與Fc受體的親和力越低，從而導(dǎo)致ADCC（抗體依賴性的細胞介導(dǎo)的細胞毒作用）活性降低。融合蛋白中唾液酸含量越高，體內(nèi)清除速率越慢。高甘露糖型的單抗分子與 C1q 的親和力較低，其 CDC（補體依賴的細胞毒性作用） 活性也較低。高甘露糖型結(jié)構(gòu)在人體中容易引起免疫原性。因此糖基化被普遍認為是單抗藥物的關(guān)鍵質(zhì)量屬性（CQA）之一。
 

上游工藝中的糖型化檢測試劑盒
生產(chǎn)工藝中的細胞株、培養(yǎng)基、培養(yǎng)工藝都可能影響單抗產(chǎn)品的糖基化修飾水平。目前蛋白糖型的鑒定主要是LS-MS（液相質(zhì)譜）的方法，但是這個方法不適合粗樣品測試（比如細胞培養(yǎng)上清），通量也很低。為了解決這個痛點，賽多利斯專門開發(fā)了基于Octet^®互作儀的糖基化檢測試劑盒，可以在早期階段，比如CLD（細胞株篩選）的時候?qū)μ切退�平進行高通量檢測。
 

分別用Octet的傳感器檢測蛋白濃度（比如用Octet^®蛋白A（ProA）生物傳感器檢測IgG titer），根據(jù)濃度把所有樣品都調(diào)整在某個濃度下，然后用糖型化檢測試劑盒檢測糖基化水平，并與濃度信息一起分析來選取最佳克隆。

目前，賽多利斯已推出唾液酸（GlyS）檢測試劑盒和甘露糖（GlyM）檢測試劑盒，原理是將能特異性識別某種糖型的凝集素固化在傳感器上，然后與糖基化樣品結(jié)合，再通過信號放大的方法對糖基化水平進行排序。

下面分別是兩種試劑盒能夠識別的糖型：
 

甘露糖（GlyM）檢測試劑盒：可以識別高甘露糖型，雜合型和雙觸角復(fù)合型N聚糖
 

唾液酸（GlyS）檢測試劑盒：主要識別末端為唾液酸的糖基

1. 通量高，測試速度比較快，如果用8通道的儀器檢測96個樣品，只需要2個小時，而16通道和96通道則分別只需要70分鐘和半個小時；
2. 可以直接在粗樣品中對糖基化水平進行排序，目前市面上還沒有類似產(chǎn)品；
3. 全自動化檢測，重復(fù)性好；

• 對了，其他糖型試劑盒也正在路上...