Incucyte® Exofluor細(xì)胞外囊泡快速標(biāo)記試劑盒上市

瀏覽次數(shù)：2601　發(fā)布日期：2024-5-27　來源：賽多利斯實(shí)驗(yàn)室

細(xì)胞外囊泡(EV, Extracelluar Vesicle)是當(dāng)今細(xì)胞生物學(xué)和新診療療法的熱點(diǎn)研究領(lǐng)域。EV根據(jù)直徑大小和生物生成過程分為多種類型，其中大多數(shù)尺寸較小的EV被稱為外泌體(Exosome)。國家發(fā)改委于2022年印發(fā)的《“十四五”生物經(jīng)濟(jì)發(fā)展規(guī)劃》將“外泌體治療產(chǎn)品”首次納入國家經(jīng)濟(jì)發(fā)展規(guī)劃，2023年在“囊泡”和“外泌體”方向的國自然金額累計(jì)近1.5億元，立項(xiàng)近390項(xiàng)，超過前兩年立項(xiàng)數(shù)^[1]。

截止至目前，EV和外泌體在國內(nèi)外的研究熱潮不減^[2]，在產(chǎn)業(yè)端也受到醫(yī)藥、生物技術(shù)、體外診斷產(chǎn)品研發(fā)生產(chǎn)企業(yè)的爭相投資。

圖1. PubMed檢索外泌體相關(guān)研究論文發(fā)表數(shù)量

圖2. PubMed檢索Extracelluar Vesicle相關(guān)研究論文發(fā)表數(shù)量

活細(xì)胞攝取實(shí)驗(yàn)EV樣本制備的挑戰(zhàn)

在EV研究的初步階段，往往需要從干細(xì)胞等活細(xì)胞培養(yǎng)基，或血液、尿液和唾液等體液中分離出足夠量和高純度的EV。傳統(tǒng)的分離技術(shù)有沉淀法(P)、超速離心(UF)、體積排阻色譜法(SEC)、免疫親和捕獲(IAC)。這些方法往往耗時(shí)耗力，有時(shí)因?qū)嶒?yàn)者操作原因?qū)е翬V得率和純度都不甚理想。

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賽多利斯EV分離純化標(biāo)記新方案

為應(yīng)對EV分離和純化的挑戰(zhàn)，賽多利斯推出了一種創(chuàng)新的Incucyte® Exofluor細(xì)胞外囊泡（綠色）標(biāo)記試劑盒。這款試劑盒結(jié)合了超濾法和膜過濾技術(shù)，能夠均一化EV尺寸并適應(yīng)未來的規(guī)模化生產(chǎn)。它提供了一個簡化且快速的操作流程，特別優(yōu)化了針對外泌體囊泡顆粒的分離。接下來讓我們一起來詳細(xì)了解一下吧。

Incucyte® Exofluor細(xì)胞外囊泡（綠色）快速標(biāo)記試劑盒

輕松3步的活細(xì)胞攝取實(shí)驗(yàn)EV樣品快速制備
Step 1

EV熒光標(biāo)記30分鐘
將EV熒光染料與各種來源EV和外泌體的懸液混合孵育

Step 2

超濾去除游離熒光染料5分鐘
在賽多利斯Vivaspin® 2 超濾柱中去除游離的EV染料

Step 3

過濾去除非EV雜質(zhì)
已去除游離的EV染料的EV懸液裝入注射器，通過賽多利斯Minisart® (0.22 μm) 過濾器來同時(shí)完成滅菌并去除殘留的EV聚集體

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圖3. Incucyte® Exofluor細(xì)胞外囊泡(綠色)標(biāo)記試劑盒簡便的操作流程

通過將從以上3步法簡便快速獲得的熒光標(biāo)記EV和外泌體， Incucyte® 實(shí)時(shí)活細(xì)胞成像分析系統(tǒng)與Cell-by-Cell Analysis 和Basic Analyzer軟件模塊配合使用，為您的EV和外泌體活細(xì)胞攝入量化成像研究賦能諸多實(shí)驗(yàn)結(jié)果準(zhǔn)確性提升和新發(fā)現(xiàn)的洞察便利：

1 可攝入細(xì)胞類型廣泛：標(biāo)記純化的EV和外泌體適用于常用攝取實(shí)驗(yàn)細(xì)胞類型

圖4. 賽多利斯EV標(biāo)記試劑盒標(biāo)記的EV和外泌體可以在多種常用攝取細(xì)胞類型和培養(yǎng)基條件下被細(xì)胞正常攝取。用EV標(biāo)記的A549細(xì)胞來源外泌體處理后24小時(shí)拍攝圖像顯示，與對照組相比細(xì)胞形態(tài)沒有變化。僅染料處理組提示游離染料不會觸發(fā)細(xì)胞攝取。賽多利斯Exofluor細(xì)胞外囊泡快速標(biāo)記試劑盒染料通過與EV和外泌體牢固結(jié)合，均勻地標(biāo)記小型 EV(如外泌體)的質(zhì)膜。與 EV 不可逆結(jié)合并且可去除游離染料，雙管齊下地降低了攝取前或攝取期間染料非特異地附著到其他質(zhì)膜上的風(fēng)險(xiǎn)。

2 兼容不同EV上游處理方法：不同細(xì)胞來源和純化方法(UF, SEC, TFF/IEX色譜法)獲得的EV和外泌體經(jīng)本試劑盒處理后都可被正常攝入細(xì)胞

圖5. Incucyte® 成像結(jié)果顯示A549人肺腺癌細(xì)胞系受體細(xì)胞攝取了采用Incucyte® Exofor-Green 標(biāo)記的各種EV（處理后24 小時(shí)）。使用超濾和SEC 方法 (HansaBioMed) 提取A549 來源外泌體，并以2 μg/ 孔用量加入到不同細(xì)胞系培養(yǎng)孔中進(jìn)行處理。使用人血漿來源的外泌體(Abcam，超濾提取法)，濃度為 4 μg/ 孔。使用 TFF/IEX 色譜法提取間充質(zhì)干細(xì)胞和 HEK293T 來源的 EV (賽多利斯)，并分別以 1.5 × 10⁷和 8.3 × 10⁷顆粒 / 孔用量加入到不同細(xì)胞系培養(yǎng)孔中進(jìn)行處理。

3 不干擾細(xì)胞的“真正”攝入：標(biāo)記后的EV細(xì)胞攝入呈濃度依賴性，不干擾細(xì)胞生長，并可證明是通過細(xì)胞攝取內(nèi)吞途徑而非非特異性細(xì)胞滲入

圖6. 使用TFF/IEX 色譜法純化來自HEK293T 細(xì)胞的EV，并使用Incucyte® Exofluor Green EV 標(biāo)記試劑盒進(jìn)行標(biāo)記，然后添加到A549 受體細(xì)胞中。在2天內(nèi)每2 小時(shí)采集一次相差和綠色熒光圖像，并使用Incucyte® Cell-by-Cell 軟件分析模塊進(jìn)行分析。
1. 將標(biāo)記的EV 滴定約40 倍（42×10⁷和1×10⁷ 顆粒/ 孔），并使用平均綠色熒光均值強(qiáng)度來評估EV 攝取情況�？梢院芎糜^察到熒光強(qiáng)度顯示出的濃度依賴性變化

2. 明場細(xì)胞計(jì)數(shù)分析表明（Phase Object Count, 標(biāo)準(zhǔn)化為t=0），在所有測試的不同濃度的標(biāo)記EV 下，細(xì)胞增殖沒有發(fā)生變化
3. 將A549 細(xì)胞接種后培養(yǎng)過夜，然后在無外泌體的培養(yǎng)基中用細(xì)胞內(nèi)吞抑制試劑Dynasore（0.01 至100 μM）處理。使用Dynasore 處理后，立即加入用Incucyte® Exofor Green 標(biāo)記的Hansa A549 來源外泌體（2 μg/ 孔）。細(xì)胞攝取外泌體受到抑制的抑制劑濃度梯度依賴性作用（IC50=2.72 μM）反映在綠色熒光的強(qiáng)度中（圖中展示了24 小時(shí)監(jiān)測數(shù)據(jù)）

如果您正在從事EV和外泌體在腫瘤學(xué)、干細(xì)胞發(fā)育生物學(xué)、細(xì)胞代謝、精準(zhǔn)醫(yī)學(xué)等基礎(chǔ)研究，或者正在開展前沿小分子藥物、抗體和基因細(xì)胞治療等生物藥新療法的研發(fā)，需要表征細(xì)胞內(nèi)EV攝取行為的同時(shí)評估宿主細(xì)胞數(shù)量形態(tài)的變化，或更好地了解EV攝入和有效載荷對生物功能的影響，那么賽多利斯EV標(biāo)記試劑盒將是您理想的選擇！

《Incucyte® 活細(xì)胞成像分析系統(tǒng)細(xì)胞外囊泡分析方案》

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-參考文獻(xiàn)-

[1] 1.55億！2023年外泌體相關(guān)國家自然科學(xué)基金盤點(diǎn)(blog.sciencenet.cn)
[2] PubMed (https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/)

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E-mail：info.cn@sartorius.com

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