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Tecan Infinite 酶標(biāo)儀助力中藥活性成分的研究

瀏覽次數(shù):11247 發(fā)布日期:2018-5-23  來(lái)源:本站 本站原創(chuàng),轉(zhuǎn)載請(qǐng)注明出處

中醫(yī)和草藥,與針灸、按摩、運(yùn)動(dòng)及食養(yǎng)一起,為治療許多病癥提供了替代方案。盡管有超過(guò)2,500年的知識(shí)傳承和經(jīng)驗(yàn),這些草藥的作用方式卻鮮為人所知。目前,浙江大學(xué)藥學(xué)院正通過(guò)現(xiàn)代的實(shí)驗(yàn)技術(shù)來(lái)識(shí)別這些藥物背后繁雜的活性成分,以及成分之間的協(xié)同作用。

 

許多現(xiàn)代藥物,從阿司匹林、可待因到化療藥物紫杉醇(Taxol®),都是從天然原料中提取的。實(shí)際上,從1981至今,接近50%的經(jīng)過(guò)臨床驗(yàn)證的藥物都是直接或間接從天然產(chǎn)物中提取而來(lái)(1)。隨著小分子藥物研發(fā)管線的低迷,許多公司開(kāi)始轉(zhuǎn)向植物藥產(chǎn)品,作為新的原料藥的來(lái)源。而問(wèn)題在于,只有非常少的中藥經(jīng)過(guò)研究,得以識(shí)別其中的有效成分。

浙江大學(xué)藥學(xué)院正在分析超過(guò)300種中藥,致力于揭示傳統(tǒng)醫(yī)藥的秘密。王毅教授解釋道:“我們最主要的挑戰(zhàn),就是幾乎所有的草藥提取物都具有非常復(fù)雜的化學(xué)組成。利用色譜分離后,經(jīng)常會(huì)得到成百甚至上千種成分,這使得確認(rèn)有效成分,或有效的成分組合非常困難。對(duì)此,我們先分離出粗提物,再把這些粗提物按照大小、親水性等進(jìn)一步分離成單個(gè)組分。在過(guò)去的10年里,我們已經(jīng)建立了超過(guò)30,000種組分的成分庫(kù)。我們用它對(duì)細(xì)胞或者特定的分子靶標(biāo)進(jìn)行篩選。”

 

“我們使用了Infinite F200多功能酶標(biāo)儀進(jìn)行了大量的篩選實(shí)驗(yàn),包括一些細(xì)胞毒性實(shí)驗(yàn)來(lái)識(shí)別抗腫瘤和抗氧化成分。Infinite酶標(biāo)儀的使用非常簡(jiǎn)便,并且配有自動(dòng)加樣模塊,這讓我們可以快速的篩選大量的成分。近期,為了擴(kuò)展篩選的通量,我們又購(gòu)置了配備光柵的Infinite M1000,幫助我們實(shí)現(xiàn)更加靈敏、更加靈活的新應(yīng)用。”
“Infinite M1000可以按照需要選擇波長(zhǎng)。我們?cè)O(shè)計(jì)了幾種熒光探針,能夠報(bào)告特定酶活性的上調(diào)或者下調(diào)。舉個(gè)例子,我們成功地設(shè)計(jì)了一個(gè)針對(duì)去乙;(sirtuin)1活性的探針。去乙;副徽J(rèn)為是一類在細(xì)胞內(nèi)起調(diào)控作用的蛋白,而這種蛋白過(guò)去是無(wú)法利用光譜方法檢測(cè)的。我們使用這個(gè)探針測(cè)試了近200種可能對(duì)去乙;赣屑せ罨蛞种谱饔玫膫溥x成分,并找到了13種有效成分。相比隨機(jī)篩選來(lái)說(shuō),命中率相當(dāng)?shù)母!?BR>
王教授繼續(xù)說(shuō)道:"許多中藥似乎是依賴多項(xiàng)成分之間的協(xié)同作用,而非依靠單一組分。盡管我們已經(jīng)找到許多有效的單一組分,但是大多數(shù)情況下,它們的藥效比相似的、國(guó)際上已經(jīng)注冊(cè)的小分子藥物要弱一些。反過(guò)來(lái),一些組分的協(xié)同作用,能夠產(chǎn)生更大的細(xì)胞反應(yīng)。研究藥物的協(xié)同作用,需要準(zhǔn)確無(wú)誤地將微量的多種藥物以復(fù)雜的組合移入微孔板,人工操作是非常困難的。幸運(yùn)的是,作為訪問(wèn)學(xué)者在美國(guó)波士頓的麻省總醫(yī)院工作期間,我得以使用D300皮升級(jí)超微量加樣器進(jìn)行抗癌藥物的篩選。這真的是一種非常強(qiáng)大的藥物篩選工具,它的數(shù)位分配技術(shù)能夠?qū)w積極小的成分進(jìn)行非常準(zhǔn)確的分配。所以當(dāng)我一回到中國(guó),它就成為了我首先想要購(gòu)置的儀器。
 
Tecan D300e 超微量數(shù)碼加樣儀

“D300最大的優(yōu)勢(shì)是它能夠根據(jù)設(shè)定,自動(dòng)計(jì)算每一種組分在每一個(gè)孔內(nèi)的移液體積,并準(zhǔn)確進(jìn)行分配。它的準(zhǔn)確性和重現(xiàn)性非常好,特別是對(duì)于非常敏感的細(xì)胞活性實(shí)驗(yàn),它能夠得到非常漂亮的量效關(guān)系曲線,來(lái)幫助我們選擇最好的藥物成分配比。”
 
1) Newman, DJ, Cragg, GM. Natural products as sources of new drugs over the 30 years from 1981 to 2010. J Nat Prod, 2012, 75(3), 311-35.
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