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RNeasy Protect Cell Mini Kit
英文名稱:總訪問:902
國產(chǎn)/進口:進口半年訪問:23
產(chǎn)地/品牌:QIAGEN產(chǎn)品類別:其他生物試劑
規(guī)       格:74624 最后更新:2018-4-17
貨       號:
CAS   號:
參考報價:4180
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  • 公司簡介

從細胞中穩(wěn)定并純化總RNA

  • 立即穩(wěn)定分選或培養(yǎng)細胞的RNA
  • 無需去除培養(yǎng)液即可穩(wěn)定細胞
  • 無需干冰即可保存或運輸細胞
  • 可在–20ºC或–80ºC下長期保存細胞
  • 只需數(shù)分鐘,即可得到高品質(zhì)RNA

RNeasy Protect Cell Mini Kit中含有RNAprotect Cell Reagent,可穩(wěn)定分選細胞或培養(yǎng)細胞中的RNA和DNA,細胞可在室溫下便利的運輸。穩(wěn)定的細胞可在30°C(1天)、15–25°C(7天)或 2–8°C(四周)儲存或運輸。RNeasy Protect Cell Mini Kit提供RNeasy Plus Mini Kit,可用于純化總RNA。裂解穩(wěn)定的細胞后,使用gDNA去除柱高效去除基因組DNA。之后使用RNeasy離心柱純化高品質(zhì)RNA。純化過程可在QIAcube全自動核酸純化儀上實現(xiàn)自動化。

性能

在進行基因表達分析實驗時,如需在不同實驗室間運輸細胞,RNeasy Protect Cell Mini Kit是理想選擇(參見表1)。

表1. 從RNAprotect Cell Reagent中保存10天的白細胞中純化的RNA產(chǎn)量更高*
分析結(jié)果 RNAprotect Cell Reagent RNAlater Reagent
使用RNeasy技術(shù)得到的RNA產(chǎn)量(µg) 10 3.5
Real-time RT-PCR of abl (CT value) 25 26
* 白細胞由Ficoll梯度法制備。數(shù)據(jù)由法國Pascale Cornillet-Lefebvre, Hôpital Robert Debré, Reims提供.

RNAprotect Cell Reagent中的細胞可在30ºC運輸或儲存1天,在室溫(15–25ºC)下7天,在2–8ºC長達4周,在–20ºC或–80ºC長期儲存(參見表2及Effective inhibition of PMA inductionMore reliable quantification of CD83 transcript")。

表2. 在室溫下儲存Jurka 的完整RNA
細胞儲存條件 純化RNA的RIN值*
30ºC (1 天) 9.8
25ºC (7 天) 9.7
2–8ºC (28 天) 10
–20ºC (28 天) 9.8
–80ºC (28 天) 9.8
* 使用Agilent 2100 Bioanalyzer評估RNA的完整性,得到的RIN值的范圍為1RNA完全降解)至10RNA百分之百完整)
原理

RNeasy Protect Cell Mini Kit提供RNA保護和分離的完整解決方案,在一個試劑盒中完成從樣本收集到RNA純化的整個過程。經(jīng)驗證的RNeasy硅膠膜技術(shù)與具有RNA穩(wěn)定特性的RNAprotect Cell Reagent相結(jié)合,可純化得到高品質(zhì)、完整的RNA。分選或培養(yǎng)的細胞與RNAprotect Cell Reagent混合,可立即穩(wěn)定細胞內(nèi)的RNA,確保下游的基因表達分析結(jié)果可靠。RNAprotect Cell Reagent可直接加入到細胞培養(yǎng)基或緩沖液中,不需洗滌或處理細胞(如胰酶處理);蛘,RNAprotect Cell Reagent可加入到細胞沉淀中。樣本經(jīng)穩(wěn)定后,RNeasy技術(shù)整合了異硫氰酸胍的嚴謹性與硅膠膜純化的速度及純度,簡化了總RNA的分離過程。

操作流程
分選或培養(yǎng)細胞與RNAprotect Cell Reagent混合可立即穩(wěn)定細胞中的RNA。RNA穩(wěn)定后,使用RNeasy Plus Mini Kit純化總RNA(參見RNeasy Protect Cell procedure)。離心RNAprotect Cell Reagent中的細胞,在Buffer RLT Plus中裂解并勻漿細胞沉淀。將裂解液通過gDNA去除柱,快速、高效去除基因組DNA。在裂解液中加入乙醇,然后使其通過RNeasy離心柱。離心后,總RNA結(jié)合在RNeasy離心柱膜上。污染物被高效洗去,在30–50 µl 不含RNase的純水中洗脫得到高品質(zhì)總RNA。純化DNA或RNA及DNA需要另外購買QIAGEN DNA純化試劑盒。更多細節(jié)可參考RNAprotect Cell Reagent Handbook。
應(yīng)用

RNAprotect Cell Reagent中保存的細胞可在室溫下運輸,無需在液氮中冷凍細胞沉淀,也無需干冰運輸冷凍的細胞沉淀。RNeasy Protect Cell Mini Kit純化得到的RNA非常適用于對低量DNA污染敏感的下游應(yīng)用,如:定量real-time RT-PCR。

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