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人T淋巴細(xì)胞白血病細(xì)胞實驗,每一個步驟都要無菌操作。從開始的準(zhǔn)備工作,槍頭,EP管,PBS等的高壓;做實驗前紫外燈的照射,實驗人員佩戴口罩帽子穿超凈隔離服;所用試劑如果是很多人一起用,最好分裝,培養(yǎng)基最多一次配制一百到二百毫升,以免污染后浪費(fèi)。不放心試劑的可以用小的培養(yǎng)皿驗菌。剩下的就是操作的規(guī)范性了,如果 是剛開始做,在進(jìn)細(xì)胞間前應(yīng)該自己先把步驟捋一遍,保證心中有數(shù),不會手忙腳亂。操作時注意細(xì)節(jié),比如槍頭是否碰到不干凈的區(qū)域,立即換槍頭。不同細(xì)胞還要注意互相之間不能交叉的。
人T淋巴細(xì)胞白血病細(xì)胞產(chǎn)品概述:
細(xì)胞名稱 |
Jurkat, Clone E6-1(人T淋巴細(xì)胞白血病細(xì)胞) |
種屬 |
人 |
年齡(性別) |
男 |
組織來源 |
T淋巴細(xì)胞;急性T細(xì)胞白血病 |
生長特性 |
懸浮 |
細(xì)胞形態(tài) |
淋巴細(xì)胞樣 |
背景描述 |
Jurkat, Clone E6-1細(xì)胞是Jurkat-FHCRC細(xì)胞株(Jurkat細(xì)胞株的衍生)的一個克隆。Jurkat, Clone E6-1細(xì)胞來源于一個14歲男孩的外周血,經(jīng)佛波酯和外源凝集素或抗T3單克隆抗體(兩種類型的誘導(dǎo)都需要)誘導(dǎo)后可產(chǎn)生大量IL-2。 |
生長培養(yǎng)基 |
RPMI-1640+10% FBS+1% P/S |
培養(yǎng)條件 |
氣相:空氣,95%;CO2,5% 溫度:37℃ |
人T淋巴細(xì)胞白血病細(xì)胞保種心得:
首先,細(xì)胞采購的運(yùn)輸形式一般分為兩種,一種是直接寄送凍存細(xì)胞,一種是復(fù)蘇后寄送活細(xì)胞。前者是由液氮中取出細(xì)胞凍存管,采用干冰運(yùn)輸;后者是將細(xì)胞復(fù)蘇至T-25培養(yǎng)瓶中,采用常溫運(yùn)輸。兩者各有優(yōu)缺點,第一種方式的優(yōu)點是可以長途運(yùn)輸,因為細(xì)胞在干冰中相對穩(wěn)定,一般可以保證數(shù)周之內(nèi)不影響細(xì)胞活性,但缺點是運(yùn)輸成本高,且細(xì)胞復(fù)蘇是很復(fù)雜的過程,如果細(xì)胞復(fù)蘇后狀態(tài)不佳,則很難界定是來源的問題還是復(fù)蘇操作的問題;而第二種方式的優(yōu)點是細(xì)胞收到后可以直接通過觀察來大體了解細(xì)胞狀態(tài),并且對運(yùn)輸?shù)囊笙鄬^低,缺點則是只適合短途運(yùn)輸,因為即便運(yùn)輸時培養(yǎng)基中不添加血清,細(xì)胞還是會不斷增殖,當(dāng)細(xì)胞長滿后,細(xì)胞的狀態(tài)會隨時間的增加而不斷變差。綜上,如果是從國外大型細(xì)胞庫采購,一般采用第一種方法,既能適應(yīng)長途運(yùn)輸,且大型細(xì)胞庫的凍存細(xì)胞質(zhì)量普遍較好,在良好的操作下復(fù)蘇成活率很高;如果是從國內(nèi)細(xì)胞庫采購,則一般采用第二種方法,方便收到細(xì)胞時能較好掌握細(xì)胞狀態(tài),并且降低運(yùn)輸成本。
人T淋巴細(xì)胞白血病細(xì)胞分別針對兩種運(yùn)輸方式來談下對新細(xì)胞的處理過程:
對于直接寄送凍存細(xì)胞的情況,首先要檢查的就是細(xì)胞收到后是否有足量剩余干冰,如果干冰不足,或是已經(jīng)沒有干冰,則細(xì)胞狀態(tài)可能會收到影響,建議盡快復(fù)蘇;如果有足量干冰,建議先轉(zhuǎn)移至-80℃冰箱過夜,于第二天按正常流程復(fù)蘇,即37℃水浴鍋中快速融解,低速離心后去除含DMSO的凍存液,換入適合細(xì)胞的新鮮培養(yǎng)基,輕柔吹勻后轉(zhuǎn)移至培養(yǎng)皿中,補(bǔ)足培養(yǎng)基;一般貼壁細(xì)胞在24h內(nèi)即可觀察到細(xì)胞貼壁,從而判斷細(xì)胞狀態(tài),懸浮細(xì)胞則復(fù)蘇后即可觀察細(xì)胞狀態(tài)。對于凍存時間較長的細(xì)胞,可能需要傳代1到2次后,細(xì)胞才會調(diào)整到正常狀態(tài),所以細(xì)胞復(fù)蘇后如果狀態(tài)不佳,不要灰心,仍要細(xì)心培養(yǎng)。
對于復(fù)蘇后寄送活細(xì)胞的情況,則細(xì)胞收到后要先檢查細(xì)胞瓶是否有破損,細(xì)胞瓶在運(yùn)輸中很有可能受到碰撞和擠壓,導(dǎo)致瓶體受損。如果發(fā)現(xiàn)細(xì)胞瓶受損,則需要盡快處理,該棄就棄。如果細(xì)胞瓶完好,則用酒精消毒瓶身,去除封口膜,然后置于37℃培養(yǎng)箱中靜置1-2h。待細(xì)胞穩(wěn)定后,觀察細(xì)胞狀態(tài),并及時記錄,因為很多國內(nèi)細(xì)胞庫都是可以反饋細(xì)胞狀態(tài)的,如果收到時細(xì)胞狀態(tài)不佳甚至污染,是可以要求重新寄送的。細(xì)胞如沒有異常,則盡快傳代并更換適合細(xì)胞的新鮮培養(yǎng)基。由于新細(xì)胞一般都是第一次接觸,細(xì)胞傳代過程中尤為需要注意胰酶消化時間,消化時間過短或過長都會影響細(xì)胞狀態(tài),甚至導(dǎo)致細(xì)胞死亡。我建議大家采用低濃度胰酶消化,消化時縮短放培養(yǎng)箱和觀察的間隔時間,以便盡可能找到合適的消化時間。
人T淋巴細(xì)胞白血病細(xì)胞本季度細(xì)胞銷售產(chǎn)品列表:
EC290 Changliver 人張氏肝細(xì)胞 人 1640 貼壁
EC291 MGC80-3 人胃癌細(xì)胞 人 1640 貼壁
EC292 HO8910 人卵巢癌細(xì)胞 人 1640或DMEM 貼壁
EC368 H22 小鼠肝癌細(xì)胞 小鼠 1640 懸浮
EC369 C33A 人宮頸癌細(xì)胞 人 EMEM 貼壁
EC315 KM-12-SM 人結(jié)腸癌肝轉(zhuǎn)移細(xì)胞 人 5A/DMEM 貼壁
EC293 KCL-22 人慢性髓樣白血病細(xì)胞 人 IMDM 懸浮
EC308 Het-1A 人食管上皮細(xì)胞 人 1640 貼壁
EC297 SU-DHL-4 人類B細(xì)胞淋巴瘤細(xì)胞 人 IMDM 懸浮
EC298 SNU-216 人胃癌細(xì)胞 人 DMEM 貼壁
EC370 SK-BR-3 人乳腺癌細(xì)胞 人 DMEM 貼壁
EC310 GP2-293 人胚腎上皮包裝細(xì)胞 人 DMDM 貼壁
EC311 NKT 自然殺傷T細(xì)胞 人 1640 懸浮
EC316 293FT 表達(dá)SV40T抗原人胚腎上皮細(xì)胞 人 DMEM 貼壁
EC315 293F 人胚腎上皮細(xì)胞 人 DMEM 貼壁+懸浮
EC317 FTC 133 人甲狀腺癌細(xì)胞 人 L15 貼壁
EC325 KTC-1 人甲狀腺癌細(xì)胞 人 F12K 貼壁
EC326 MH7A 關(guān)節(jié)炎成纖維細(xì)胞 人 DMDM 貼壁