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NCI-H2227(人小細胞肺癌細胞)實驗,每一個步驟都要無菌操作。從開始的準備工作,槍頭,EP管,PBS等的高壓;做實驗前紫外燈的照射,實驗人員佩戴口罩帽子穿超凈隔離服;所用試劑如果是很多人一起用,最好分裝,培養(yǎng)基最多一次配制一百到二百毫升,以免污染后浪費。不放心試劑的可以用小的培養(yǎng)皿驗菌。剩下的就是操作的規(guī)范性了,如果 是剛開始做,在進細胞間前應該自己先把步驟捋一遍,保證心中有數(shù),不會手忙腳亂。操作時注意細節(jié),比如槍頭是否碰到不干凈的區(qū)域,立即換槍頭。不同細胞還要注意互相之間不能交叉的。
NCI-H2227(人小細胞肺癌細胞)產(chǎn)品概述:
細胞名稱 |
NCI-H2227(人小細胞肺癌細胞) |
種屬 |
人 |
年齡(性別) |
男;54歲 |
組織來源 |
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生長特性 |
貼壁/懸浮 |
細胞形態(tài) |
上皮細胞樣 |
背景描述 |
NCI-H2227細胞是于1989年8月從一名54歲白人男性小細胞肺癌皮膚轉移灶中分離得到的。 |
生長培養(yǎng)基 |
DMEM/F12+5μg/ml Insulin+0.01mg/ml Transferrin+30nM Sodium Selenite+10nM Hydrocortisone+10nM β-estradiol+2mM L-glutamine(for final conc. of 4.5mM)+5% FBS+1% P/S |
培養(yǎng)條件 |
氣相:空氣,95%;CO2,5% 溫度:37℃ |
NCI-H2227(人小細胞肺癌細胞)保種心得:
首先,細胞采購的運輸形式一般分為兩種,一種是直接寄送凍存細胞,一種是復蘇后寄送活細胞。前者是由液氮中取出細胞凍存管,采用干冰運輸;后者是將細胞復蘇至T-25培養(yǎng)瓶中,采用常溫運輸。兩者各有優(yōu)缺點,第一種方式的優(yōu)點是可以長途運輸,因為細胞在干冰中相對穩(wěn)定,一般可以保證數(shù)周之內不影響細胞活性,但缺點是運輸成本高,且細胞復蘇是很復雜的過程,如果細胞復蘇后狀態(tài)不佳,則很難界定是來源的問題還是復蘇操作的問題;而第二種方式的優(yōu)點是細胞收到后可以直接通過觀察來大體了解細胞狀態(tài),并且對運輸?shù)囊笙鄬^低,缺點則是只適合短途運輸,因為即便運輸時培養(yǎng)基中不添加血清,細胞還是會不斷增殖,當細胞長滿后,細胞的狀態(tài)會隨時間的增加而不斷變差。綜上,如果是從國外大型細胞庫采購,一般采用第一種方法,既能適應長途運輸,且大型細胞庫的凍存細胞質量普遍較好,在良好的操作下復蘇成活率很高;如果是從國內細胞庫采購,則一般采用第二種方法,方便收到細胞時能較好掌握細胞狀態(tài),并且降低運輸成本。
NCI-H2227(人小細胞肺癌細胞)分別針對兩種運輸方式來談下對新細胞的處理過程:
對于直接寄送凍存細胞的情況,首先要檢查的就是細胞收到后是否有足量剩余干冰,如果干冰不足,或是已經(jīng)沒有干冰,則細胞狀態(tài)可能會收到影響,建議盡快復蘇;如果有足量干冰,建議先轉移至-80℃冰箱過夜,于第二天按正常流程復蘇,即37℃水浴鍋中快速融解,低速離心后去除含DMSO的凍存液,換入適合細胞的新鮮培養(yǎng)基,輕柔吹勻后轉移至培養(yǎng)皿中,補足培養(yǎng)基;一般貼壁細胞在24h內即可觀察到細胞貼壁,從而判斷細胞狀態(tài),懸浮細胞則復蘇后即可觀察細胞狀態(tài)。對于凍存時間較長的細胞,可能需要傳代1到2次后,細胞才會調整到正常狀態(tài),所以細胞復蘇后如果狀態(tài)不佳,不要灰心,仍要細心培養(yǎng)。
對于復蘇后寄送活細胞的情況,則細胞收到后要先檢查細胞瓶是否有破損,細胞瓶在運輸中很有可能受到碰撞和擠壓,導致瓶體受損。如果發(fā)現(xiàn)細胞瓶受損,則需要盡快處理,該棄就棄。如果細胞瓶完好,則用酒精消毒瓶身,去除封口膜,然后置于37℃培養(yǎng)箱中靜置1-2h。待細胞穩(wěn)定后,觀察細胞狀態(tài),并及時記錄,因為很多國內細胞庫都是可以反饋細胞狀態(tài)的,如果收到時細胞狀態(tài)不佳甚至污染,是可以要求重新寄送的。細胞如沒有異常,則盡快傳代并更換適合細胞的新鮮培養(yǎng)基。由于新細胞一般都是第一次接觸,細胞傳代過程中尤為需要注意胰酶消化時間,消化時間過短或過長都會影響細胞狀態(tài),甚至導致細胞死亡。我建議大家采用低濃度胰酶消化,消化時縮短放培養(yǎng)箱和觀察的間隔時間,以便盡可能找到合適的消化時間。
NCI-H2227(人小細胞肺癌細胞)本季度細胞銷售產(chǎn)品列表:
EC671 CPA 47 牛肺血管內皮細胞 牛 DMEM 貼壁
EC626 NTera-2 人卵巢畸胎瘤細胞 人 DMEM 貼壁
EC672 NEC8 人畸胎瘤細胞 人 McCoy’s 5a 貼壁
EC673 NCCIT 人畸胎瘤細胞 人 EMEM 貼壁
EC627 HSAS3 人皮膚成纖維細胞 人 DMEM 貼壁
EC628 OCI-LY10 彌漫大B細胞淋巴瘤細胞 人 1640 懸浮
EC674 kasumi-1 人急性髓系白血病細胞 人 IMDM 懸浮
EC629 LA795 小鼠肺腺癌細胞 小鼠 DMEM 貼壁+懸浮
EC630 MMVECs 小鼠心肌微血管內皮細胞 小鼠 DMEM 貼壁
EC760 OV2008 人卵巢癌細胞 人 1640 貼壁
EC631 JKT-1 人精原瘤細胞 人 DMEM 貼壁
EC761 Pan02 人胰腺癌細胞 人 1640 貼壁
EC675 NRK-49F 大鼠腎正常成纖維細胞 大鼠 EMEM 貼壁
EC632 JG 小鼠腎小球旁細胞 小鼠 DMEM 貼壁
EC641 SK-N-AS 人神經(jīng)母細胞瘤細胞 人 DMEM 貼壁
EC676 Mahlavu 人肝癌細胞 人 1640 貼壁
EC677 95C 人肺巨細胞癌細胞(低轉移) 人 1640 貼壁
EC678 RS4;11 急性B淋巴細胞白血病細胞 人 1640 懸浮
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