BEL-7405（人肝癌細(xì)胞）

BEL-7405（人肝癌細(xì)胞）實驗，每一個步驟都要無菌操作。從開始的準(zhǔn)備工作，槍頭，EP管，PBS等的高壓；做實驗前紫外燈的照射，實驗人員佩戴口罩帽子穿超凈隔離服；所用試劑如果是很多人一起用，最好分裝，培養(yǎng)基最多一次配制一百到二百毫升，以免污染后浪費。不放心試劑的可以用小的培養(yǎng)皿驗菌。剩下的就是操作的規(guī)范性了，如果 是剛開始做，在進細(xì)胞間前應(yīng)該自己先把步驟捋一遍，保證心中有數(shù)，不會手忙腳亂。操作時注意細(xì)節(jié)，比如槍頭是否碰到不干凈的區(qū)域，立即換槍頭。不同細(xì)胞還要注意互相之間不能交叉的。

BEL-7405（人肝癌細(xì)胞）產(chǎn)品概述：

BEL-7405（人肝癌細(xì)胞）保種心得：

首先，細(xì)胞采購的運輸形式一般分為兩種，一種是直接寄送凍存細(xì)胞，一種是復(fù)蘇后寄送活細(xì)胞。前者是由液氮中取出細(xì)胞凍存管，采用干冰運輸；后者是將細(xì)胞復(fù)蘇至T-25培養(yǎng)瓶中，采用常溫運輸。兩者各有優(yōu)缺點，第一種方式的優(yōu)點是可以長途運輸，因為細(xì)胞在干冰中相對穩(wěn)定，一般可以保證數(shù)周之內(nèi)不影響細(xì)胞活性，但缺點是運輸成本高，且細(xì)胞復(fù)蘇是很復(fù)雜的過程，如果細(xì)胞復(fù)蘇后狀態(tài)不佳，則很難界定是來源的問題還是復(fù)蘇操作的問題；而第二種方式的優(yōu)點是細(xì)胞收到后可以直接通過觀察來大體了解細(xì)胞狀態(tài)，并且對運輸?shù)囊�求相對較低，缺點則是只適合短途運輸，因為即便運輸時培養(yǎng)基中不添加血清，細(xì)胞還是會不斷增殖，當(dāng)細(xì)胞長滿后，細(xì)胞的狀態(tài)會隨時間的增加而不斷變差。綜上，如果是從國外大型細(xì)胞庫采購，一般采用第一種方法，既能適應(yīng)長途運輸，且大型細(xì)胞庫的凍存細(xì)胞質(zhì)量普遍較好，在良好的操作下復(fù)蘇成活率很高；如果是從國內(nèi)細(xì)胞庫采購，則一般采用第二種方法，方便收到細(xì)胞時能較好掌握細(xì)胞狀態(tài)，并且降低運輸成本。

BEL-7405（人肝癌細(xì)胞）分別針對兩種運輸方式來談下對新細(xì)胞的處理過程：

對于直接寄送凍存細(xì)胞的情況，首先要檢查的就是細(xì)胞收到后是否有足量剩余干冰，如果干冰不足，或是已經(jīng)沒有干冰，則細(xì)胞狀態(tài)可能會收到影響，建議盡快復(fù)蘇；如果有足量干冰，建議先轉(zhuǎn)移至-80℃冰箱過夜，于第二天按正常流程復(fù)蘇，即37℃水浴鍋中快速融解，低速離心后去除含DMSO的凍存液，換入適合細(xì)胞的新鮮培養(yǎng)基，輕柔吹勻后轉(zhuǎn)移至培養(yǎng)皿中，補足培養(yǎng)基；一般貼壁細(xì)胞在24h內(nèi)即可觀察到細(xì)胞貼壁，從而判斷細(xì)胞狀態(tài)，懸浮細(xì)胞則復(fù)蘇后即可觀察細(xì)胞狀態(tài)。對于凍存時間較長的細(xì)胞，可能需要傳代1到2次后，細(xì)胞才會調(diào)整到正常狀態(tài)，所以細(xì)胞復(fù)蘇后如果狀態(tài)不佳，不要灰心，仍要細(xì)心培養(yǎng)。

對于復(fù)蘇后寄送活細(xì)胞的情況，則細(xì)胞收到后要先檢查細(xì)胞瓶是否有破損，細(xì)胞瓶在運輸中很有可能受到碰撞和擠壓，導(dǎo)致瓶體受損。如果發(fā)現(xiàn)細(xì)胞瓶受損，則需要盡快處理，該棄就棄。如果細(xì)胞瓶完好，則用酒精消毒瓶身，去除封口膜，然后置于37℃培養(yǎng)箱中靜置1-2h。待細(xì)胞穩(wěn)定后，觀察細(xì)胞狀態(tài)，并及時記錄，因為很多國內(nèi)細(xì)胞庫都是可以反饋細(xì)胞狀態(tài)的，如果收到時細(xì)胞狀態(tài)不佳甚至污染，是可以要求重新寄送的。細(xì)胞如沒有異常，則盡快傳代并更換適合細(xì)胞的新鮮培養(yǎng)基。由于新細(xì)胞一般都是第一次接觸，細(xì)胞傳代過程中尤為需要注意胰酶消化時間，消化時間過短或過長都會影響細(xì)胞狀態(tài)，甚至導(dǎo)致細(xì)胞死亡。我建議大家采用低濃度胰酶消化，消化時縮短放培養(yǎng)箱和觀察的間隔時間，以便盡可能找到合適的消化時間。

BEL-7405（人肝癌細(xì)胞）本季度細(xì)胞銷售產(chǎn)品列表：

EC194    U-118 MG    人腦星形膠質(zhì)母細(xì)胞瘤    人    DMEM    貼壁
EC195    U251    人膠質(zhì)瘤細(xì)胞    人    DMEM    貼壁
EC196    U-87 MG    人腦星形膠質(zhì)母細(xì)胞瘤    人    EMEM    貼壁
EC197    ES-2    人卵巢透明細(xì)胞癌    人        
EC198    SK-OV-3    人卵巢癌細(xì)胞    人    MECECoy’s 5a    貼壁
EC199    AsPEC-1    人轉(zhuǎn)移胰腺腺癌細(xì)胞    人    1640    貼壁
EC200    BxPEC-3    人原位胰腺腺癌細(xì)胞    人    1640或DMEM    貼壁
EC201    ECFPAEC-1    人胰腺癌細(xì)胞    人        
EC202    PANEC-1    人胰腺癌細(xì)胞    人    DMEM    貼壁
EC203    SW 1990    人胰腺癌細(xì)胞系    人        
EC204    Detroit 562    人咽頭癌胸水轉(zhuǎn)移細(xì)胞    人        
EC205    FaDu    人咽鱗癌細(xì)胞    人        
EC206    22RV1    人前列腺癌細(xì)胞    人    1640    貼壁
EC208    LNECaP EClone FGEC    人前列腺癌細(xì)胞    人        
EC209    PEC-3    人前列腺癌細(xì)胞    人    F12    貼壁
EC210    AGS    人胃腺癌細(xì)胞    人    F12K    貼壁
EC211    HGEC-27    人胃癌細(xì)胞（未分化）    人    1640    貼壁