Hela（人宮頸癌細(xì)胞）

Hela（人宮頸癌細(xì)胞）實(shí)驗(yàn)，每一個(gè)步驟都要無菌操作。從開始的準(zhǔn)備工作，槍頭，EP管，PBS等的高壓；做實(shí)驗(yàn)前紫外燈的照射，實(shí)驗(yàn)人員佩戴口罩帽子穿超凈隔離服；所用試劑如果是很多人一起用，最好分裝，培養(yǎng)基最多一次配制一百到二百毫升，以免污染后浪費(fèi)。不放心試劑的可以用小的培養(yǎng)皿驗(yàn)菌。剩下的就是操作的規(guī)范性了，如果 是剛開始做，在進(jìn)細(xì)胞間前應(yīng)該自己先把步驟捋一遍，保證心中有數(shù)，不會(huì)手忙腳亂。操作時(shí)注意細(xì)節(jié)，比如槍頭是否碰到不干凈的區(qū)域，立即換槍頭。不同細(xì)胞還要注意互相之間不能交叉的。

Hela（人宮頸癌細(xì)胞）產(chǎn)品概述：

Hela（人宮頸癌細(xì)胞）保種心得：

首先，細(xì)胞采購(gòu)的運(yùn)輸形式一般分為兩種，一種是直接寄送凍存細(xì)胞，一種是復(fù)蘇后寄送活細(xì)胞。前者是由液氮中取出細(xì)胞凍存管，采用干冰運(yùn)輸；后者是將細(xì)胞復(fù)蘇至T-25培養(yǎng)瓶中，采用常溫運(yùn)輸。兩者各有優(yōu)缺點(diǎn)，第一種方式的優(yōu)點(diǎn)是可以長(zhǎng)途運(yùn)輸，因?yàn)榧?xì)胞在干冰中相對(duì)穩(wěn)定，一般可以保證數(shù)周之內(nèi)不影響細(xì)胞活性，但缺點(diǎn)是運(yùn)輸成本高，且細(xì)胞復(fù)蘇是很復(fù)雜的過程，如果細(xì)胞復(fù)蘇后狀態(tài)不佳，則很難界定是來源的問題還是復(fù)蘇操作的問題；而第二種方式的優(yōu)點(diǎn)是細(xì)胞收到后可以直接通過觀察來大體了解細(xì)胞狀態(tài)，并且對(duì)運(yùn)輸?shù)囊�求相�?duì)較低，缺點(diǎn)則是只適合短途運(yùn)輸，因?yàn)榧幢氵\(yùn)輸時(shí)培養(yǎng)基中不添加血清，細(xì)胞還是會(huì)不斷增殖，當(dāng)細(xì)胞長(zhǎng)滿后，細(xì)胞的狀態(tài)會(huì)隨時(shí)間的增加而不斷變差。綜上，如果是從國(guó)外大型細(xì)胞庫(kù)采購(gòu)，一般采用第一種方法，既能適應(yīng)長(zhǎng)途運(yùn)輸，且大型細(xì)胞庫(kù)的凍存細(xì)胞質(zhì)量普遍較好，在良好的操作下復(fù)蘇成活率很高；如果是從國(guó)內(nèi)細(xì)胞庫(kù)采購(gòu)，則一般采用第二種方法，方便收到細(xì)胞時(shí)能較好掌握細(xì)胞狀態(tài)，并且降低運(yùn)輸成本。

Hela（人宮頸癌細(xì)胞）分別針對(duì)兩種運(yùn)輸方式來談下對(duì)新細(xì)胞的處理過程：

對(duì)于直接寄送凍存細(xì)胞的情況，首先要檢查的就是細(xì)胞收到后是否有足量剩余干冰，如果干冰不足，或是已經(jīng)沒有干冰，則細(xì)胞狀態(tài)可能會(huì)收到影響，建議盡快復(fù)蘇；如果有足量干冰，建議先轉(zhuǎn)移至-80℃冰箱過夜，于第二天按正常流程復(fù)蘇，即37℃水浴鍋中快速融解，低速離心后去除含DMSO的凍存液，換入適合細(xì)胞的新鮮培養(yǎng)基，輕柔吹勻后轉(zhuǎn)移至培養(yǎng)皿中，補(bǔ)足培養(yǎng)基；一般貼壁細(xì)胞在24h內(nèi)即可觀察到細(xì)胞貼壁，從而判斷細(xì)胞狀態(tài)，懸浮細(xì)胞則復(fù)蘇后即可觀察細(xì)胞狀態(tài)。對(duì)于凍存時(shí)間較長(zhǎng)的細(xì)胞，可能需要傳代1到2次后，細(xì)胞才會(huì)調(diào)整到正常狀態(tài)，所以細(xì)胞復(fù)蘇后如果狀態(tài)不佳，不要灰心，仍要細(xì)心培養(yǎng)。

對(duì)于復(fù)蘇后寄送活細(xì)胞的情況，則細(xì)胞收到后要先檢查細(xì)胞瓶是否有破損，細(xì)胞瓶在運(yùn)輸中很有可能受到碰撞和擠壓，導(dǎo)致瓶體受損。如果發(fā)現(xiàn)細(xì)胞瓶受損，則需要盡快處理，該棄就棄。如果細(xì)胞瓶完好，則用酒精消毒瓶身，去除封口膜，然后置于37℃培養(yǎng)箱中靜置1-2h。待細(xì)胞穩(wěn)定后，觀察細(xì)胞狀態(tài)，并及時(shí)記錄，因?yàn)楹芏鄧?guó)內(nèi)細(xì)胞庫(kù)都是可以反饋細(xì)胞狀態(tài)的，如果收到時(shí)細(xì)胞狀態(tài)不佳甚至污染，是可以要求重新寄送的。細(xì)胞如沒有異常，則盡快傳代并更換適合細(xì)胞的新鮮培養(yǎng)基。由于新細(xì)胞一般都是第一次接觸，細(xì)胞傳代過程中尤為需要注意胰酶消化時(shí)間，消化時(shí)間過短或過長(zhǎng)都會(huì)影響細(xì)胞狀態(tài)，甚至導(dǎo)致細(xì)胞死亡。我建議大家采用低濃度胰酶消化，消化時(shí)縮短放培養(yǎng)箱和觀察的間隔時(shí)間，以便盡可能找到合適的消化時(shí)間。

Hela（人宮頸癌細(xì)胞）本季度細(xì)胞銷售產(chǎn)品列表：

EC294    6F-EECM                
EC289    BEL-7402    人肝癌細(xì)胞    人    1640或DMEM    貼壁
EC290    EChangliver    人張氏肝細(xì)胞    人    1640    貼壁
EC291    MGEC80-3    人胃癌細(xì)胞    人    1640    貼壁
EC292    HO8910    人卵巢癌細(xì)胞    人    1640或DMEM    貼壁
EC368    H22    小鼠肝癌細(xì)胞    小鼠    1640    懸浮
EC369    EC33A    人宮頸癌細(xì)胞    人    EMEM    貼壁
EC315    KM-12-SM    人結(jié)腸癌肝轉(zhuǎn)移細(xì)胞    人    5A/DMEM    貼壁
EC293    KECL-22    人慢性髓樣白血病細(xì)胞    人    IMDM    懸浮
EC308    Het-1A    人食管上皮細(xì)胞    人    1640    貼壁
EC297    SU-DHL-4     人類B細(xì)胞淋巴瘤細(xì)胞    人    IMDM    懸浮
EC298    SNU-216    人胃癌細(xì)胞    人    DMEM    貼壁
EC370    SK-BR-3    人乳腺癌細(xì)胞    人    DMEM    貼壁
EC310    GP2-293    人胚腎上皮包裝細(xì)胞    人    DMDM    貼壁
EC311    NKT    自然殺傷T細(xì)胞    人    1640    懸浮
EC316    293FT     表達(dá)SV40T抗原人胚腎上皮細(xì)胞    人    DMEM    貼壁
EC315    293F    人胚腎上皮細(xì)胞    人    DMEM    貼壁+懸浮
EC317    FTEC 133    人甲狀腺癌細(xì)胞    人    L15    貼壁