CHO/dhFr-倉鼠卵巢細胞,二氫葉酸還原酶缺陷

CHO/dhFr-倉鼠卵巢細胞,二氫葉酸還原酶缺陷在進行細胞傳代培養(yǎng)的時候，胰蛋白酶作用的時間是在1～3分鐘，由于我有好幾個培養(yǎng)瓶（4個以上）的細胞都需要進行傳代操作，那么就胰酶消化這一步而言，我是該一個培養(yǎng)瓶一個培養(yǎng)瓶這么分開做，還是可以幾個同時做呢？同時做我怕后來操作的培養(yǎng)瓶中的細胞消化過度�。∫粋�一個的做會不會又太費時呢？

培養(yǎng)基 IMDM培養(yǎng)基(GIBCO,貨號12200036)，90%；優(yōu)質(zhì)胎牛血清，10%；添加0.1mM次黃嘌呤，0.016mM胸腺嘧啶，100nM氨甲喋呤。 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37攝氏度。
生長特性 貼壁生長

1、一個一個做！防止污染，和消化細胞時間的不均勻。

2、原則上，為了避免細胞系之間的污染，應該一個一個的做。但是如果你能保證無菌操作的原則，CHO/dhFr-倉鼠卵巢細胞,二氫葉酸還原酶缺陷也能把握好各種貼壁細胞系消化的時間，是可以同時做，這樣效率高。建議你剛開始一個一個的做，熟練以后根據(jù)具體情況決定如何做。

3、4個可以同時做，時間到了用移液槍給4個瓶加含血清的培養(yǎng)基終止就行。

4、新手的話強烈建議一個一個處理細胞，特別是消化，除非你養(yǎng)的細胞對消化都不敏感，不然很容易消化過度或者不到位。另外同時處理多個細胞容易出現(xiàn)細胞間交叉污染，一旦污染基本沒救，比細菌污染還要麻煩。

5、剛開始還是一個一個來，CHO/dhFr-倉鼠卵巢細胞,二氫葉酸還原酶缺陷消化的時間與細胞的來源有很大關系，貼壁性強的細胞，需要消化的時間較長。一般除了貼壁性強的癌細胞外，細胞消化時間1-3min，還有胰蛋白酶的濃度有關系，濃度高的消化時間要短一些，不然會消化過了，對于細胞的生長不好。你可以在分散打入胰蛋白酶時，輕晃培養(yǎng)瓶，在顯微鏡下看見細胞開始變亮，皺縮，卷邊的時候就加入培養(yǎng)液或者血清終止消化。

失敗的關鍵原因還是細胞復蘇的時候沒有迅速解凍的緣故，最后一次成功是因為注意到這個問題。細胞的復蘇及凍存遵循慢凍速融原則，如果CHO/dhFr-倉鼠卵巢細胞,二氫葉酸還原酶缺陷取出后沒有在盡可能短的時間里解凍的話細胞內(nèi)部會產(chǎn)生很多冰晶對細胞就有致命的損失了。另外，細胞的確應該是在液氮條件下保存，如果液氮可以保存1-2年的細胞，放-80度保存恐怕不到三個月就不行了，并且狀態(tài)會很差。HBZY-1    大鼠細胞株    泌尿系統(tǒng)    5x10^5    大鼠腎小球系膜細胞
NRK    大鼠細胞株    泌尿系統(tǒng)    5x10^5    正常大鼠腎細胞
PC-12    大鼠細胞株    泌尿系統(tǒng)    5x10^5    大鼠腎上腺嗜鉻細胞瘤細胞
PC-12    大鼠細胞株    泌尿系統(tǒng)    5x10^5    大鼠腎上腺嗜鉻細胞瘤細胞(低分化)
C6    大鼠細胞株    腦和神經(jīng)系統(tǒng)    5x10^5    大鼠腦膠質(zhì)瘤細胞
RSC96    大鼠細胞株    腦和神經(jīng)系統(tǒng)    5x10^5    大鼠雪旺細胞
BRL    大鼠細胞株    消化系統(tǒng)    5x10^5    大鼠肝細胞
H-4-Ⅱ-E    大鼠細胞株    消化系統(tǒng)    5x10^5    大鼠肝細胞瘤
WB-F344    大鼠細胞株    消化系統(tǒng)    5x10^5    大鼠肝上皮樣干細胞
H9c2    大鼠細胞株    循環(huán)系統(tǒng)    5x10^5    大鼠心肌細胞
USMC    大鼠細胞株    循環(huán)系統(tǒng)    5x10^5    大鼠血管平滑肌細胞
cos-1    其他    泌尿系統(tǒng)    5x10^5    非洲綠猴腎細胞
MA104    其他    泌尿系統(tǒng)    5x10^5    羅猴胎腎細胞
vero    其他    泌尿系統(tǒng)    5x10^5    非洲綠猴腎細胞
CHO    其他    生殖系統(tǒng)    5x10^5    倉鼠卵巢細胞
CHO-K1    其他    生殖系統(tǒng)    5x10^5    倉鼠卵巢細胞亞株
DH82    其他    血液、淋巴系統(tǒng)    5x10^5    狗腎惡性組織細胞增生癥細胞
PIEC    其他    血液、淋巴系統(tǒng)    5x10^5    豬髖動脈內(nèi)皮細胞
CCC-SMC-1    其他    循環(huán)系統(tǒng)    5x10^5    兔主動脈平滑肌細胞
A-204    人源化細胞株    骨、關節(jié)、肌肉、皮膚系統(tǒng)    5x10^5    人橫紋肌肉瘤細胞
A-375    人源化細胞株    骨、關節(jié)、肌肉、皮膚系統(tǒng)    5x10^5    人惡性黑色素瘤細胞
A-431    人源化細胞株    骨、關節(jié)、肌肉、皮膚系統(tǒng)    5x10^5    人皮膚鱗癌細胞
A875    人源化細胞株    骨、關節(jié)、肌肉、皮膚系統(tǒng)    5x10^5    人黑色素瘤細胞
FLS    人源化細胞株    骨、關節(jié)、肌肉、皮膚系統(tǒng)    5x10^5    成纖維樣滑膜細胞
HaCaT    人源化細胞株    骨、關節(jié)、肌肉、皮膚系統(tǒng)    5x10^5    人永生化表皮細胞
hFOB 1.19    人源化細胞株    骨、關節(jié)、肌肉、皮膚系統(tǒng)    5x10^5    SV40 轉(zhuǎn)染人成骨細胞