KMY0906EB病毒轉(zhuǎn)化的人B淋巴細(xì)胞

KMY0906EB病毒轉(zhuǎn)化的人B淋巴細(xì)胞在進(jìn)行細(xì)胞傳代培養(yǎng)的時(shí)候，胰蛋白酶作用的時(shí)間是在1～3分鐘，由于我有好幾個(gè)培養(yǎng)瓶（4個(gè)以上）的細(xì)胞都需要進(jìn)行傳代操作，那么就胰酶消化這一步而言，我是該一個(gè)培養(yǎng)瓶一個(gè)培養(yǎng)瓶這么分開(kāi)做，還是可以幾個(gè)同時(shí)做呢？同時(shí)做我怕后來(lái)操作的培養(yǎng)瓶中的細(xì)胞消化過(guò)度�。∫粋�(gè)一個(gè)的做會(huì)不會(huì)又太費(fèi)時(shí)呢？

培養(yǎng)基 RPMI1640(w/oHepes)15%NBS
生長(zhǎng)特性 懸浮生長(zhǎng)

1、一個(gè)一個(gè)做！防止污染，和消化細(xì)胞時(shí)間的不均勻。

2、原則上，為了避免細(xì)胞系之間的污染，應(yīng)該一個(gè)一個(gè)的做。但是如果你能保證無(wú)菌操作的原則，KMY0906EB病毒轉(zhuǎn)化的人B淋巴細(xì)胞也能把握好各種貼壁細(xì)胞系消化的時(shí)間，是可以同時(shí)做，這樣效率高。建議你剛開(kāi)始一個(gè)一個(gè)的做，熟練以后根據(jù)具體情況決定如何做。

3、4個(gè)可以同時(shí)做，時(shí)間到了用移液槍給4個(gè)瓶加含血清的培養(yǎng)基終止就行。

4、新手的話強(qiáng)烈建議一個(gè)一個(gè)處理細(xì)胞，特別是消化，除非你養(yǎng)的細(xì)胞對(duì)消化都不敏感，不然很容易消化過(guò)度或者不到位。另外同時(shí)處理多個(gè)細(xì)胞容易出現(xiàn)細(xì)胞間交叉污染，一旦污染基本沒(méi)救，比細(xì)菌污染還要麻煩。

5、剛開(kāi)始還是一個(gè)一個(gè)來(lái)，KMY0906EB病毒轉(zhuǎn)化的人B淋巴細(xì)胞消化的時(shí)間與細(xì)胞的來(lái)源有很大關(guān)系，貼壁性強(qiáng)的細(xì)胞，需要消化的時(shí)間較長(zhǎng)。一般除了貼壁性強(qiáng)的癌細(xì)胞外，細(xì)胞消化時(shí)間1-3min，還有胰蛋白酶的濃度有關(guān)系，濃度高的消化時(shí)間要短一些，不然會(huì)消化過(guò)了，對(duì)于細(xì)胞的生長(zhǎng)不好。你可以在分散打入胰蛋白酶時(shí)，輕晃培養(yǎng)瓶，在顯微鏡下看見(jiàn)細(xì)胞開(kāi)始變亮，皺縮，卷邊的時(shí)候就加入培養(yǎng)液或者血清終止消化。

失敗的關(guān)鍵原因還是細(xì)胞復(fù)蘇的時(shí)候沒(méi)有迅速解凍的緣故，最后一次成功是因?yàn)樽⒁獾竭@個(gè)問(wèn)題。細(xì)胞的復(fù)蘇及凍存遵循慢凍速融原則，如果KMY0906EB病毒轉(zhuǎn)化的人B淋巴細(xì)胞取出后沒(méi)有在盡可能短的時(shí)間里解凍的話細(xì)胞內(nèi)部會(huì)產(chǎn)生很多冰晶對(duì)細(xì)胞就有致命的損失了。另外，細(xì)胞的確應(yīng)該是在液氮條件下保存，如果液氮可以保存1-2年的細(xì)胞，放-80度保存恐怕不到三個(gè)月就不行了，并且狀態(tài)會(huì)很差。ZYC3379    人腎癌細(xì)胞    A498-EGFP-puro    形態(tài)：貼壁，懸浮均有；上皮細(xì)胞樣    培養(yǎng)條件：MEM/F12 +10% FBS 
ZYC3380    小鼠成纖維細(xì)胞    L929-EGFP-puro    形態(tài)：貼壁，懸浮均有；上皮細(xì)胞樣    培養(yǎng)條件：MEM/F12 +10% FBS 
ZYC3381    人胃癌細(xì)胞    BGC-823-EGFP-puro    形態(tài)：貼壁，懸浮均有；上皮細(xì)胞樣    培養(yǎng)條件：MEM/F12 +10% FBS 
ZYC3382    小鼠肝癌細(xì)胞    Hepa1-6-EGFP（CMV-GFP慢病毒構(gòu)建穩(wěn)定株）    形態(tài)：貼壁，懸浮均有；上皮細(xì)胞樣    培養(yǎng)條件：MEM/F12 +10% FBS 
ZYC3383    小鼠骨髓基質(zhì)細(xì)胞    P9-EGFP-puro    形態(tài)：貼壁，懸浮均有；上皮細(xì)胞樣    培養(yǎng)條件：MEM/F12 +10% FBS 
ZYC3384    小鼠Lewis肺癌細(xì)胞    LLC-RFP-puro    形態(tài)：貼壁，懸浮均有；上皮細(xì)胞樣    培養(yǎng)條件：MEM/F12 +10% FBS 
ZYC3385    人胚肺成纖維細(xì)胞    MRC-5-EGFP+puro    形態(tài)：貼壁，懸浮均有；上皮細(xì)胞樣    培養(yǎng)條件：MEM/F12 +10% FBS