KMY0905EB病毒轉(zhuǎn)化的人B淋巴細(xì)胞

KMY0905EB病毒轉(zhuǎn)化的人B淋巴細(xì)胞在進(jìn)行細(xì)胞傳代培養(yǎng)的時候，胰蛋白酶作用的時間是在1～3分鐘，由于我有好幾個培養(yǎng)瓶（4個以上）的細(xì)胞都需要進(jìn)行傳代操作，那么就胰酶消化這一步而言，我是該一個培養(yǎng)瓶一個培養(yǎng)瓶這么分開做，還是可以幾個同時做呢？同時做我怕后來操作的培養(yǎng)瓶中的細(xì)胞消化過度��！一個一個的做會不會又太費(fèi)時呢？

培養(yǎng)基 RPMI1640(w/oHepes)15%NBS
生長特性 懸浮生長

1、一個一個做！防止污染，和消化細(xì)胞時間的不均勻。

2、原則上，為了避免細(xì)胞系之間的污染，應(yīng)該一個一個的做。但是如果你能保證無菌操作的原則，KMY0905EB病毒轉(zhuǎn)化的人B淋巴細(xì)胞也能把握好各種貼壁細(xì)胞系消化的時間，是可以同時做，這樣效率高。建議你剛開始一個一個的做，熟練以后根據(jù)具體情況決定如何做。

3、4個可以同時做，時間到了用移液槍給4個瓶加含血清的培養(yǎng)基終止就行。

4、新手的話強(qiáng)烈建議一個一個處理細(xì)胞，特別是消化，除非你養(yǎng)的細(xì)胞對消化都不敏感，不然很容易消化過度或者不到位。另外同時處理多個細(xì)胞容易出現(xiàn)細(xì)胞間交叉污染，一旦污染基本沒救，比細(xì)菌污染還要麻煩。

5、剛開始還是一個一個來，KMY0905EB病毒轉(zhuǎn)化的人B淋巴細(xì)胞消化的時間與細(xì)胞的來源有很大關(guān)系，貼壁性強(qiáng)的細(xì)胞，需要消化的時間較長。一般除了貼壁性強(qiáng)的癌細(xì)胞外，細(xì)胞消化時間1-3min，還有胰蛋白酶的濃度有關(guān)系，濃度高的消化時間要短一些，不然會消化過了，對于細(xì)胞的生長不好。你可以在分散打入胰蛋白酶時，輕晃培養(yǎng)瓶，在顯微鏡下看見細(xì)胞開始變亮，皺縮，卷邊的時候就加入培養(yǎng)液或者血清終止消化。

失敗的關(guān)鍵原因還是細(xì)胞復(fù)蘇的時候沒有迅速解凍的緣故，最后一次成功是因為注意到這個問題。細(xì)胞的復(fù)蘇及凍存遵循慢凍速融原則，如果KMY0905EB病毒轉(zhuǎn)化的人B淋巴細(xì)胞取出后沒有在盡可能短的時間里解凍的話細(xì)胞內(nèi)部會產(chǎn)生很多冰晶對細(xì)胞就有致命的損失了。另外，細(xì)胞的確應(yīng)該是在液氮條件下保存，如果液氮可以保存1-2年的細(xì)胞，放-80度保存恐怕不到三個月就不行了，并且狀態(tài)會很差。ZYC3406    人皮膚成纖維細(xì)胞    HSF    形態(tài)：貼壁，懸浮均有；上皮細(xì)胞樣    培養(yǎng)條件：MEM/F12 +10% FBS 
ZYC3407    大鼠腎小球系膜細(xì)胞    hbzy-1    形態(tài)：貼壁，懸浮均有；上皮細(xì)胞樣    培養(yǎng)條件：MEM/F12 +10% FBS 
ZYC3408    卵巢癌細(xì)胞    TOV-21G    形態(tài)：貼壁，懸浮均有；上皮細(xì)胞樣    培養(yǎng)條件：MEM/F12 +10% FBS 
ZYC3409    大鼠成骨細(xì)胞    ROS1728    形態(tài)：貼壁，懸浮均有；上皮細(xì)胞樣    培養(yǎng)條件：MEM/F12 +10% FBS 
ZYC3410    人膀胱移行細(xì)胞癌     BIU-87    形態(tài)：貼壁，懸浮均有；上皮細(xì)胞樣    培養(yǎng)條件：MEM/F12 +10% FBS 
ZYC3411    大鼠肝細(xì)胞瘤細(xì)胞    H-4-II-E    形態(tài)：貼壁，懸浮均有；上皮細(xì)胞樣    培養(yǎng)條件：MEM/F12 +10% FBS 
ZYC3412        H2EL    形態(tài)：貼壁，懸浮均有；上皮細(xì)胞樣    培養(yǎng)條件：MEM/F12 +10% FBS 
ZYC3413    人食管癌細(xì)胞    KYSE150    形態(tài)：貼壁，懸浮均有；上皮細(xì)胞樣    培養(yǎng)條件：MEM/F12 +10% FBS 
ZYC3414    人腎皮質(zhì)近曲小管上皮細(xì)胞    HK-2    形態(tài)：貼壁，懸浮均有；上皮細(xì)胞樣    培養(yǎng)條件：MEM/F12 +10% FBS