糞便DNA分離試劑盒

糞便DNA分離試劑盒產(chǎn)品說明書（中文版）

主要用途

糞便DNA分離試劑是一種旨在直接從各種糞便（人體、動(dòng)物等）中提取細(xì)胞或細(xì)菌DNA，有效地去除各種污染物（蛋白或核酶）和抑制劑（PCR多聚酶抑制劑等）的權(quán)威而經(jīng)典的技術(shù)方法。該技術(shù)由大師級科學(xué)家精心研制、成功實(shí)驗(yàn)證明的。其應(yīng)用于即時(shí)PCR、RLPF分析、測序、雜交、遺傳鑒定、突變分析、性別鑒定、司法鑒定等。產(chǎn)品即到即用，性能穩(wěn)定，操作簡單，純度產(chǎn)量高，重復(fù)性好。

 

技術(shù)背景

 

糞便中含有許多污染成分，降解DNA和抑制PCR反應(yīng)。通過冷凍處理、化學(xué)緩沖、孵育溫度、大劑量特級酶、十六烷基三甲基溴化銨（cetyltrimethyl－ammonium bromide；CTAB）純化、異硫氰酸胍（GuSCN）處理、特別萃取等技術(shù)方法有效地去除各種干擾因子。  

 

產(chǎn)品內(nèi)容

 

緩沖液（Reagent A）      50毫升

增強(qiáng)液（Reagent B）     2.5毫升

分離液（Reagent C）   20毫升

酶解液（Reagent D）     6.5毫升

萃取液（Reagent E）        50毫升

濃縮液（Reagent F）     15毫升

沉淀液（Reagent G）        25毫升

清理液（Reagent H）     50毫升

保存液（Reagent I）    1.5毫升

產(chǎn)品說明書    1份

 

保存方式

 

保存增強(qiáng)液（Reagent B）、酶解液（Reagent D）和萃取液（Reagent E）在－20℃冰箱里；其余的保存在4℃冰箱里，有效保證6月

 

用戶自備

 

15毫升錐形離心管：用于樣品操作的容器

2毫升離心管：用于DNA純化操作的容器

1.5毫升離心管：用于保存DNA

臺式離心機(jī)（例如EPPENDORF5810）：用于沉淀雜質(zhì)

微型臺式離心機(jī)（例如EPPENDORF5415）：用于沉淀核酸

渦旋震蕩儀：用于混勻反應(yīng)物

恒溫水槽：用于孵育反應(yīng)物

實(shí)驗(yàn)步驟

 

實(shí)驗(yàn)開始前，將增強(qiáng)液（Reagent B）、酶解液（Reagent D）和萃取液（Reagent E）從－20℃冰箱里取出，放入冰槽里融化。然后進(jìn)行下列操作：

 

• 糞便細(xì)胞DNA萃取

 

• 秤取300毫克的糞便樣品放進(jìn)15毫升錐形離心管
• 放入－70℃冰箱里過夜
• 加入1毫升緩沖液（Reagent A）到15毫升錐形離心管
• 室溫下靜置15分鐘
• 強(qiáng)力渦旋震蕩，直至固態(tài)物質(zhì)充分混勻（此步驟重要）
• 放進(jìn)臺式離心機(jī)離心30分鐘，速度為3000g
• （選擇步驟）小心移出上清液到15毫升錐形離心管
• （選擇步驟）放進(jìn)臺式離心機(jī)離心30分鐘，速度為3500g
• 小心移出500微升上清液到新的2毫升離心管
• 加入375微升分離液（Reagent C）（注意：使用前，先搖勻分離液（Reagent C））
• 加入125微升酶解液（Reagent D）（注意：使用前，先混勻酶解液（Reagent D））
• 渦旋震蕩15秒
• 放進(jìn)60℃恒溫水槽孵育30分鐘（注意：可以增加孵育時(shí)間至2小時(shí)，增加DNA產(chǎn)量）
• 放進(jìn)微型臺式離心機(jī)離心20秒，速度為400g（或2000RPM，例如eppendorf 5415）
• （選擇步驟）放進(jìn)微型臺式離心機(jī)離心10分鐘，速度為16000g（或13000RPM，例如eppendorf 5415）（注意：強(qiáng)化去除有色雜質(zhì)：白色、黃色、棕色等）
• （選擇步驟）小心移出上清液到新的2毫升離心管（注意：留下100微升液體）
• 加入1毫升萃取液（Reagent E）（注意：使用前，先搖勻萃取液（Reagent E））
• 渦旋震蕩30秒
• 放進(jìn)微型臺式離心機(jī)離心15分鐘，速度為16000g（或13000RPM，例如eppendorf 5415）
• 移出900微升上層液相溶液到新的1.5毫升離心管（注意：不要觸碰相位交界面）
• 加入250微升濃縮液（Reagent F）
• 加入500微升沉淀液（Reagent G）
• 上下翻轉(zhuǎn)10至15次，混勻
• 靜置5分鐘
• 放進(jìn)微型臺式離心機(jī)離心15分鐘，速度為16000g（或13000RPM，例如eppendorf 5415）
• 小心抽掉上清液
• 加入1毫升清理液（Reagent H）
• 放進(jìn)微型臺式離心機(jī)離心5分鐘，速度為16000g（或13000RPM，例如eppendorf 5415）
• 小心抽掉上清液
• 空氣中晾干
• 加入25微升保存液（Reagent I），溶解
• 移出適量DNA溶液進(jìn)行后續(xù)PCR反應(yīng)或保存在－20℃冰箱里

 

• 糞便細(xì)菌DNA萃取

 

• 秤取300毫克的糞便樣品放進(jìn)15毫升錐形離心管
• 放入－70℃冰箱里過夜
• 加入1毫升緩沖液（Reagent A）到15毫升錐形離心管
• 室溫下靜置15分鐘
• 強(qiáng)力渦旋震蕩，直至固態(tài)物質(zhì)充分混勻（此步驟重要）
• 煮沸5分鐘
• 室溫下靜置15分鐘
• （選擇步驟）加入50微升增強(qiáng)液（Reagent B）
• （選擇步驟）渦旋震蕩15秒
• （選擇步驟）放進(jìn)37℃恒溫水槽孵育2小時(shí)
• 放進(jìn)臺式離心機(jī)離心30分鐘，速度為3000g
• （選擇步驟）小心移出上清液到15毫升錐形離心管
• （選擇步驟）放進(jìn)臺式離心機(jī)離心30分鐘，速度為3500g
• 小心移出500微升上清液到新的2毫升離心管
• 加入375微升分離液（Reagent C）（注意：使用前，先搖勻分離液（Reagent C））
• 加入125微升酶解液（Reagent D）（注意：使用前，先混勻酶解液（Reagent D））
• 渦旋震蕩15秒
• 放進(jìn)60℃恒溫水槽孵育30分鐘（注意：可以增加孵育時(shí)間至2小時(shí)，增加DNA產(chǎn)量）
• 放進(jìn)微型臺式離心機(jī)離心20秒，速度為400g（或2000RPM，例如eppendorf 5415）
• （選擇步驟）放進(jìn)微型臺式離心機(jī)離心10分鐘，速度為16000g（或13000RPM，例如eppendorf 5415）（注意：強(qiáng)化去除有色雜質(zhì)：白色、黃色、棕色等）
• （選擇步驟）小心移出上清液到新的2毫升離心管（注意：留下100微升液體）
• 加入1毫升萃取液（Reagent E）（注意：使用前，先搖勻萃取液（Reagent E））
• 渦旋震蕩30秒
• 放進(jìn)微型臺式離心機(jī)離心15分鐘，速度為16000g（或13000RPM，例如eppendorf 5415）
• 移出900微升上層液相溶液到新的1.5毫升離心管（注意：不要觸碰相位交界面）
• 加入250微升濃縮液（Reagent F）
• 加入500微升沉淀液（Reagent G）
• 上下翻轉(zhuǎn)10至15次，混勻
• 靜置5分鐘
• 放進(jìn)微型臺式離心機(jī)離心15分鐘，速度為16000g（或13000RPM，例如eppendorf 5415）
• 小心抽掉上清液
• 加入1毫升清理液（Reagent H）
• 放進(jìn)微型臺式離心機(jī)離心5分鐘，速度為16000g（或13000RPM，例如eppendorf 5415）
• 小心抽掉上清液
• 空氣中晾干
• 加入25微升保存液（Reagent I）溶解
• 移出適量DNA溶液進(jìn)行后續(xù)PCR反應(yīng)或保存在－20℃冰箱里

 

注意事項(xiàng)

 

• 本產(chǎn)品為10次（4至10克樣品）或50次（100至300毫克樣品）操作
• 操作時(shí)，須戴手套
• 建議糞便樣品收集后，即刻放進(jìn)－70℃冰箱里長期儲存，避免反復(fù)凍融
• 收集糞便樣品時(shí)，避免不必要的污染
• 糞便固態(tài)物質(zhì)充分混勻后，可以放進(jìn)－70℃冰箱里長期儲存，但建議只需凍融一次
• 糞便樣品量為100至300毫克；如果用戶需要從大量糞便中提取，可以按比例相應(yīng)增加操作量即可
• 為了確保萃取效果，建議完成選擇步驟的操作
• 通常300毫克樣品可以提取20微克左右DNA量；但不同樣品，存在很大差異（5至100微克）
• 分離液（Reagent C）和酶解液（Reagent D）易形成晶狀體，使用前可37℃溫育融化
• 如果糞便中含有特殊干擾因子，建議使用糞便DNA高質(zhì)純化試劑盒-20011.4
• 本公司提供系列糞便核酸純化試劑產(chǎn)品

 

質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)

• 本產(chǎn)品經(jīng)鑒定性能穩(wěn)定
• 本產(chǎn)品經(jīng)鑒定純度產(chǎn)量高