石蠟切片DNA分離＋高質(zhì)純化完全試劑盒

石蠟切片DNA分離＋高質(zhì)純化完全試劑盒產(chǎn)品說明書

主要用途

石蠟切片DNA分離＋高質(zhì)純化完全試劑是一種旨在使用標(biāo)準(zhǔn)化的化學(xué)方法，包括石蠟分離、蘇木素伊紅染色、無熱性酶消解、鹽析法等完整步驟，從存檔中的石蠟包埋切片中溶解和純化DNA。在標(biāo)準(zhǔn)分離法的基礎(chǔ)上，進(jìn)行二度親和純化，最大限度地去除各種抑制劑和雜質(zhì)等非核酸類物質(zhì)，使其適合PCR擴(kuò)增的權(quán)威而經(jīng)典的技術(shù)方法。該技術(shù)經(jīng)過精心研制、成功實(shí)驗(yàn)證明的。其適用于固著在福爾馬林或非交聯(lián)固著劑的各種動(dòng)物組織。用于后續(xù)的雜交、克隆、酶切、PCR分析等。產(chǎn)品即到即用，性能穩(wěn)定，萃取產(chǎn)量和純化程度高。

 

技術(shù)背景

 

動(dòng)物組織通過福爾馬林或其它非交聯(lián)的固著劑固化后包埋在石蠟中長期保存歸檔。在需要時(shí)，可以進(jìn)行組織免疫化學(xué)分析。通過一系列生物化學(xué)處理，隨時(shí)隨地便可獲得純化的DNA樣品。針對(duì)標(biāo)準(zhǔn)處理無法有效地去除頑固干擾因子的情況下，運(yùn)用特殊親和技術(shù)，達(dá)到高度純化的效果。

 

產(chǎn)品內(nèi)容

 

脫蠟液A   250毫升

脫蠟液B   100毫升

脫蠟液C   100毫升

脫蠟液D 100毫升

脫蠟液E   100毫升

染色液A      50毫升

染色液B   250毫升

染色液C      50毫升

染色液D    50毫升

染色液E      50毫升

染色液F    100毫升

染色液G    100毫升

染色液H   100毫升

酶解液（Reagent A）    40毫升

萃取液（Reagent B）    40毫升

濃縮液（Reagent C）    10毫升

沉淀液（Reagent D）  80毫升

清理液（Reagent E） 100毫升

 緩沖液（Reagent F）      5毫升

親和液（Reagent G） 2.5毫升

產(chǎn)品說明書     1份

 

 

保存方式

 

保存酶解液（Reagent A）和萃取液（Reagent B）在－20℃冰箱里；保存濃縮液（Reagent C）、沉淀液（Reagent D）、清理液（Reagent E）、緩沖液（Reagent F）和親和液（Reagent G）在4℃冰箱里；其余的保存在室溫下。有效保證6月

 

用戶自備

 

小型染色缸：用于石蠟切片的脫蠟和染色操作

1.5毫升離心管：用于樣品操作的容器

渦旋震蕩儀：用于樣品混勻

微型臺(tái)式離心機(jī)：用于樣品離心收集

恒溫水浴或干式恒溫儀：用于樣品恒溫孵育

 

實(shí)驗(yàn)步驟

 

• 脫蠟處理

 

• 選擇10片大小為1 X 1厘米、厚為6微米的石蠟切片
• 按下表依次放進(jìn)小型染色缸里室溫下孵育

染色缸	孵育時(shí)間
脫蠟液A	15分鐘
脫蠟液A	15分鐘
脫蠟液A	15分鐘
脫蠟液B	3分鐘
脫蠟液C	3分鐘
脫蠟液D	3分鐘
脫蠟液E	3分鐘

二． （選擇步驟）蘇木素伊紅染色（H & E染色）

按下表依次放進(jìn)小型染色缸里室溫下孵育

染色缸	孵育時(shí)間
染色液A	3分鐘
染色液B	10秒
染色液B	10秒
染色液C	3分鐘
染色液B	15秒
染色液B	15秒
染色液D	15秒
切片晾干
染色液E	1分鐘
染色液B	5秒
染色液B	5秒
染色液F	15秒
染色液F	15秒
染色液G	1分鐘
染色液G	1分鐘
染色液H	15秒
染色液H	15秒

 

三．樣品脫蠟處理

 

• （選擇步驟）用黑色的SHARPIE標(biāo)記筆涂在載玻片上確定取下的組織樣品
• 用刀片刮下（被涂抹的）組織樣品
• 放進(jìn)1.5毫升離心管
• 加入400微升脫蠟液A到1.5毫升離心管
• 渦旋震蕩15秒
• 在室溫下靜置10分鐘
• 放進(jìn)微型臺(tái)式離心機(jī)離心2分鐘，速度為16000g（或13000RPM，例如eppendorf 5415）
• 小心抽掉上清液（為筆墨顏色）

四．蛋白消解處理

1． 放進(jìn)58℃恒溫水槽或干式恒溫儀里孵育30分鐘

2． 加入400微升酶解液（Reagent A）

3． 充分混勻后，放進(jìn)58℃恒溫水槽或干式恒溫儀里繼續(xù)孵育16小時(shí)

4． 放進(jìn)PCR級(jí)的沸點(diǎn)水杯里，煮沸10分鐘

5． 在室溫下靜置至少15分鐘

五． 核酸萃取處理

• 加入400微升萃取液（Reagent B）
• 渦旋震蕩儀上強(qiáng)烈震蕩30秒
• 放進(jìn)微型臺(tái)式離心機(jī)離心4分鐘，速度為16000g（或13000RPM，例如eppendorf 5415）
• 移出上層液相溶液到新的1.5毫升離心管，留下25微升相位交界面的溶液

 

• 核酸沉淀處理

 

• 加入100微升濃縮液（Reagent C）到離心管
• 加入800微升沉淀液（Reagent D）
• 在渦旋震蕩儀上強(qiáng)力震蕩30秒，充分混勻
• 放進(jìn)微型臺(tái)式離心機(jī)離心15分鐘，速度為16000g（或13000RPM，例如eppendorf 5415）
• 小心抽掉上清液
• 加入1毫升清理液（Reagent E）
• 放進(jìn)微型臺(tái)式離心機(jī)離心5分鐘，速度為16000g（或13000RPM，例如eppendorf 5415）
• 小心抽掉上清液
• 空氣中晾干沉淀顆粒群
• 加入25微升緩沖液（Reagent F）
• 溶解后，加入25微升親和液（Reagent G）（注意：使用前，先搖勻沉淀的親和液（Reagent G））
• 用手指輕彈充分混勻
• 放進(jìn)56℃恒溫水槽或干式恒溫儀孵育30分鐘，期間用手指輕彈混勻一次
• 放進(jìn)微型臺(tái)式離心機(jī)離心5分鐘，速度為16000g（或13000RPM，例如eppendorf 5415）
• 移出40微升上清液到新的1.5毫升離心管
• 放進(jìn)－20℃冰箱長期保存或移出4微升進(jìn)行50微升PCR反應(yīng)

 

注意事項(xiàng)

 

• 本產(chǎn)品為100次操作（包括全套脫蠟和染色處理）
• 操作時(shí)須戴手套，以防核酶污染
• 本產(chǎn)品可以擴(kuò)增出1kb的DNA片斷
• 本產(chǎn)品從去石蠟、染色到獲取DNA步驟完整到位 
• DNA質(zhì)量取決于石蠟切片里組織保存的質(zhì)量
• 高質(zhì)純化確保去除各種固著劑成分和其它干擾雜質(zhì)
• 本公司提供系列核酸萃取試劑產(chǎn)品

 

質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)

• 本產(chǎn)品經(jīng)鑒定性能穩(wěn)定
• 本產(chǎn)品經(jīng)鑒定萃取產(chǎn)量和純化程度高
• 本產(chǎn)品經(jīng)鑒定適宜于固著劑處理的石蠟切片