增強型HRP-AEC底物顯色試劑盒

增強型HRP-AEC底物顯色試劑盒產(chǎn)品說明書（中文版）

主要用途

YIJI 增強型HRP-AEC底物顯色試劑是一種旨在通過過氧化物酶的催化，底物3-氨基-9-乙基咔唑氧化形成紅色不溶性產(chǎn)物，并結(jié)合金屬元素強化，以此鑒定過氧化物酶活性，進而確定目標分子表達的權(quán)威而經(jīng)典的技術(shù)方法。其適用于辣根過氧化酶標記蛋白的免疫學檢測包括蛋白質(zhì)西方雜交和免疫化學，以及原位雜交染色等。產(chǎn)品即到即用，性能穩(wěn)定，操作便捷，敏感度高，顯色清晰，重復性好。

 

技術(shù)背景

 

3-氨基-9-乙基咔唑（3-amino-9-ethylcarbazole；AEC）是過氧化物酶（Peroxidase）的生色底物，其分子式為C14H14N2，分子量為210.3。在過氧化物酶的催化下，電子供體AEC底物在過氧化氫氧化下，失去電子而呈現(xiàn)出顏色變化和沉積，進一步與鎳、銅、銀或鈷元素的結(jié)合，形成穩(wěn)定性紅色不溶性產(chǎn)物，但溶解于有機溶劑中。被用于檢測過氧化物酶的活性，靈敏度高，特異性好。

 

產(chǎn)品內(nèi)容

 

YIJI染色液（Reagent A） 毫升

YIJI稀釋液（Reagent B） 毫升

YIJI反應液（Reagent C）    毫升

YIJI強化液（Reagent D）    毫升

產(chǎn)品說明書     1份

 

保存方式

 

保存在4℃冰箱里；YIJI染色液（Reagent A），避免光照；有效保證6月

 

用戶自備

 

無離子水：用于清洗樣品

PBS緩沖溶液：用于清洗樣品

蘇木素復染試劑盒（YJ80050）：用于常規(guī)染色后復染

15毫升錐形離心管：用于染色工作液配制的容器

平式搖蕩儀：用于孵育和混勻反應

2.2毫升離心管：用于染色工作液配制的容器

光學顯微鏡：用于染色后觀察分析

 

 

 

 

 

實驗步驟

 

• 免疫印跡染色

 

實驗開始前，移取xx微升YIJI染色液（Reagent A）到15毫升錐形離心管，加入xx毫升YIJI稀釋液（Reagent B），混勻后，加入xx微升YIJI反應液（Reagent C），混勻后，標記為YIJI染色工作液，避免光照。然后進行下列操作。

 

• 準備好含有待測蛋白的固相膜（5 X 8 cm²）：包括電泳、轉(zhuǎn)印、封阻、一抗（或生物素）處理、辣根過氧化酶（HRP）標記的二抗（或鏈霉親和素）處理、清洗等步驟
• 加入xx毫升室溫預熱的YIJI染色工作液，鋪滿整個固相膜表面
• 置于平式搖蕩儀上，在室溫下孵育5至10分鐘，或直至紅色沉淀出現(xiàn)；避免光照
• （選擇步驟）移去YIJI染色工作液
• （選擇步驟）加入xx毫升室溫預熱的YIJI強化液（Reagent D），鋪滿整個固相膜表面
• （選擇步驟）置于平式搖蕩儀上，在室溫下孵育30至60分鐘，或直至紅色明顯加深；避免光照
• 用鑷子夾起固相膜，放進無離子水里清洗
• 空氣中晾干
• 數(shù)碼相機拍照記錄

 

• 免疫化學染色

 

實驗開始前，移取xx微升YIJI染色液（Reagent A）到2.2毫升離心管，加入xx毫升YIJI稀釋液（Reagent B），混勻后，加入xx微升YIJI反應液（Reagent C），充分混勻，標記為YIJI染色工作液，置于暗室。然后進行下列操作：

 

• 準備好含有待測蛋白的組織切片：包括固著、封阻、一抗（或生物素）處理、辣根過氧化酶（HRP）標記的二抗（或鏈霉親和素）處理、清洗等步驟
• 室溫下，小心加上xx微升的YIJI染色工作液，鋪滿整個切片樣品表面
• 室溫下孵育5至30分鐘，或直至樣本出現(xiàn)紅色
• 小心移去切片上的YIJI染色工作液
• （選擇步驟）加入xx微升室溫預熱的YIJI強化液（Reagent D），鋪滿整個切片樣品表面
• （選擇步驟）室溫下孵育30至60分鐘，或直至紅色明顯加深；避免光照
• 室溫下，小心將切片置入50毫升用戶自備的PBS緩沖溶液中浸泡5秒
• 小心移去切片上的PBS緩沖溶液
• （選擇步驟）進行蘇木素復染（注意：建議使用YIJI蘇木素復染試劑盒－YJ80050）
• 放上蓋玻片或封片
• 即刻在一般光學顯微鏡下觀察：陽性呈現(xiàn)紅色

 

注意事項

 

• 本產(chǎn)品為10次（10毫升/次）或1000次（100微升/次）操作
• 可用于1000 cm²免疫印跡膜片：建議5毫升用于1張5 X 8 cm²膜片 
• 可用于1000片1 cm X 1 cm大小的組織切片
• 用戶可以根據(jù)需求，調(diào)整試劑用量
• 操作時，須戴手套
• 染色時間根據(jù)情況調(diào)整，不宜過長，以免造成過度顯色
• 如果封閉欠佳，易造成背景顏色過深
• YIJI染色工作液新鮮配制，不宜超過1小時；如果發(fā)現(xiàn)沉淀，不宜使用
• 固相膜染色后數(shù)小時將會褪色，不能永久存在
• 本產(chǎn)品只能用于辣根過氧化酶（HRP）標記的雜交和沉淀反應
• 染色后可用蘇木素復染，增強對比度；建議使用YIJI蘇木素復染試劑盒－YJ80050
• 染色后不能使用乙醇等有機溶劑清洗
• 本公司提供系列組化染色試劑

 

質(zhì)量標準

 

• 本產(chǎn)品經(jīng)鑒定性能穩(wěn)定
• 本產(chǎn)品經(jīng)鑒定顯色清晰