保存和應(yīng)用:客戶(hù)可以根據(jù)自己的需求選擇新鮮或者凍存的原代細(xì)胞,如是新鮮原代細(xì)胞,客戶(hù)收到細(xì)胞后應(yīng)立即將其放入CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱內(nèi)靜置后2-3h,再進(jìn)行后續(xù)的實(shí)驗(yàn)操作。如是凍存細(xì)胞,客戶(hù)收到細(xì)胞后應(yīng)立即將其放入液氮、-80℃冰箱或立即進(jìn)行復(fù)蘇。該細(xì)胞只可用于科研,不得用于臨床應(yīng)用。
大鼠關(guān)節(jié)軟骨細(xì)胞圖片【培養(yǎng)指南】
對(duì)于貼壁細(xì)胞,傳代可參考以下方法:
1. 棄去培養(yǎng)上清,用不含鈣、鎂離子的PBS潤(rùn)洗細(xì)胞1-2次。
2. 加2ml消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培養(yǎng)瓶中,置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘,然后在顯微鏡下觀察Ⅱ型肺泡上皮細(xì)胞|細(xì)胞消化情況,若細(xì)胞大部分變圓并脫落,迅速拿回操作臺(tái),輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化。
3. 按6-8ml/瓶補(bǔ)加培養(yǎng)基,輕輕打勻后吸出,在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。
4. 將細(xì)胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
對(duì)于懸浮細(xì)胞,傳代可參考以下方法:
方法一:收集細(xì)胞,1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻,將細(xì)胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
方法二:可選擇半數(shù)換液方式,棄去半數(shù)培養(yǎng)基后,將剩余細(xì)胞懸起,將細(xì)胞懸液按1:2到1:3的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
大鼠關(guān)節(jié)軟骨細(xì)胞圖片【細(xì)胞凍存】
待細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)良好時(shí),可進(jìn)行293/HEK-293細(xì)胞|細(xì)胞凍存。貼壁細(xì)胞凍存時(shí),棄去培養(yǎng)基后加入少量胰酶,細(xì)胞變圓脫落后,加入約1ml含血清的培養(yǎng)基后加入凍存管中,再添加10%DMSO后進(jìn)行凍存。懸浮細(xì)胞凍存時(shí),應(yīng)將細(xì)胞收集,1000RPM條件下離心4分鐘,少量保存上清液(防止細(xì)胞吸走),加入部分新鮮培養(yǎng)基,加入到凍存管中,在凍存管中加入10%DMSO后進(jìn)行凍存。
【復(fù)蘇的原則】
快速融化:必須將凍存在-196℃液氮中的細(xì)胞快速融化至37℃,使細(xì)胞外凍存時(shí)的冰晶迅速融化,避免冰晶緩慢融化時(shí)進(jìn)入細(xì)胞形成再結(jié)晶,對(duì)細(xì)胞造成損害。復(fù)旦細(xì)胞庫(kù)全國(guó)各地均可發(fā)貨,全國(guó)統(tǒng)一價(jià)格,本公司出售的所有細(xì)胞僅供科研使用。
A522-97-4四氫小檗堿品牌 庫(kù)存 45
524-12-9蟛蜞菊內(nèi)酯規(guī)格 庫(kù)存 46
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澳洲茄邊減Solamargine0318-30-320mg 飲料乙酰舒泛(acesulfameK)含量高效液相色譜法大鼠關(guān)節(jié)軟骨細(xì)胞圖片定量檢測(cè)試劑盒20次
AGAROSEBROADRANGETRIALKIT瓊脂糖試用裝(寬范圍DN段用)1 KitCOLD
604-32-0本膽固醇酯Cholesteryl benzoate
1,4-dixy7noxy-2-nepxtxelenecarboxylic acid metxyl ester 77060-74-3
甲基-а-D-半乳... Methyl α-D-glucopyranoside , ≥98.0% 97-30-3 25G 多肽試劑
人參皂甙Rg2,英文名或英文縮寫(xiě):Ginsenoside Rg2,級(jí)別:BR,規(guī)格:25克
硬脂基基錄化,英文名或英文縮寫(xiě):OTAC,級(jí)別:色譜用,36~50目,規(guī)格:5克
4430-25-5四溴酚藍(lán)Tetrabromopxenol Blue
2,5-diamino-3,4-Thiopxenedicarbonitnile 17989-89-8
甲基丙烯酸月桂酯(L... Lauryl methacrylate,96% 142-90-5 25ML 通用試劑
N-芴氧羰;-D-蛋安醋(流安醋) Nc
硬脂酸shēng huà shì jì容量:1克
109-92-2基etxyl vinyl
4-metxoxythiopxene-3-carboxamide 65369-29-1
1,4-二苯 1,4-Diiodobenzene,≥98.0% 624-38-4 5G 表面活性劑
抗生速培養(yǎng)基8號(hào) Nc
細(xì)胞培養(yǎng)方法:
1、細(xì)胞傳代:細(xì)胞密度達(dá)到80-90%時(shí)即可傳代
①棄去培養(yǎng)上清,用PBS或生理鹽水清洗1-2次;
②加入2ml0.25%胰酶(T25瓶),使胰酶覆蓋整個(gè)瓶或皿,蓋好放入培養(yǎng)箱消化;
③1-2min后,顯微鏡下觀察細(xì)胞,若大部分細(xì)胞回縮且有少量細(xì)胞脫落,輕輕吹打下確認(rèn)消化情況后加入完全培養(yǎng)基終止消化;若細(xì)胞還是貼壁,放回培養(yǎng)箱繼續(xù)消化至可以輕輕吹打下為止;
④將細(xì)胞懸液1000RPM左右條件下離心4min,棄上清;
⑤用新鮮培養(yǎng)基重懸后加入培養(yǎng)瓶或皿中,T25培養(yǎng)瓶加6-8ml培養(yǎng)基;
⑥懸浮細(xì)胞直接離心收集,細(xì)胞沉淀重懸后分到新培養(yǎng)瓶中。
2、細(xì)胞復(fù)蘇:
①將凍存管在37℃溫水中快速搖晃融化,時(shí)間1min左右,加入4-5ml培養(yǎng)基混勻。
②在1000RPM左右條件下離心4min,棄上清,加1-2ml培養(yǎng)基吹勻,將細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中,補(bǔ)加適量培養(yǎng)基。
3、大鼠關(guān)節(jié)軟骨細(xì)胞圖片細(xì)胞凍存:待細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)良好時(shí)進(jìn)行細(xì)胞凍存保種
①棄去培養(yǎng)上清,用PBS或生理鹽水清洗1-2次,加入1mL 0.25%胰蛋白酶(T25瓶)
②1-2min后,顯微鏡下觀察細(xì)胞,大部分細(xì)胞回縮且有少量細(xì)胞脫落,輕輕吹打下確認(rèn)消化情況后加入完全培養(yǎng)基終止消化;
③將細(xì)胞懸液1000RPM左右條件下離心4min,棄上清,加1ml凍存液重懸細(xì)胞;
④將凍存管放入程序降溫盒,放入-80℃冰箱,4小時(shí)后將凍存管轉(zhuǎn)入液氮罐儲(chǔ)存。