細小病毒B19 PCR檢測試劑盒

產(chǎn)品名稱：細小病毒B19 PCR檢測試劑盒
產(chǎn)品分類：PCR檢測試劑盒
產(chǎn)品編號：BH11525P
產(chǎn)品規(guī)格：50T
本試劑盒不但準(zhǔn)確、快速、靈敏，還具有以下特點：
1.  即開即用，用戶只需要提供樣品 DNA 模板，操作簡單。
2.  預(yù)期的 PCR 產(chǎn)物長度為 494 bp。
3.  本產(chǎn)品只適用于科研，不能用于臨床診斷。

細小病毒B19 PCR檢測試劑盒規(guī)格及成分
即用型指標(biāo)Mix 3.0（1.5 mL）
專一性引物對    （100 μL）
陽性對照        （50 μL）    
超純水          （1 mL）
說明書：         1 份
運輸保存：低溫運輸，-20℃保存，保存期限一年。
使用方法    
1 實驗所需器材與試劑
1.1 器材
1）PCR儀
2）PCR反應(yīng)管
3）電泳儀及水平電泳槽
4）高速離心機
5）微量移液器及移液器吸頭
1.2 試劑
1）瓊脂糖
2）EB（溴化乙錠）
3）去離子水或雙蒸水
注意事項   
5.1使用本試劑前請仔細閱讀本說明書全文。
5.2 操作時應(yīng)盡量少說話，因口腔中也含有支原體，可能引起樣品污染，而造成假陽性；整個檢測過程中，反應(yīng)體系的配制、樣本處理及加樣、PCR擴增應(yīng)分區(qū)域進行，以避免交叉污染。 5.3 實驗時，試劑盒組分中的試劑使用前應(yīng)充分融化并混勻（混勻時禁止激烈振蕩，只需要進行上下倒置多次進行混勻）。
5.4 反應(yīng)管中加好所有的試劑后，應(yīng)盡快上PCR儀進行擴增，以免形成過多的二聚體。
5.5細胞培養(yǎng)物中含有青霉素和鏈霉素等抗生物素不會影響本品的檢測結(jié)果。如果用戶需要進一步提高檢測靈敏度，建議細胞在不含青霉素和鏈霉鏈等抗生素中進行培養(yǎng)2-3天后送樣檢測。
乳糖發(fā)酵培養(yǎng)基 Lactosefermentation medium 3.0g /100mL，20袋/盒
獐牙菜苷Swqrosidq1412-86-HPLC≥98%;20mg/vial
氧化芍藥苷;輕基芍藥苷 Oxypaeoniflorin 39011-91-1 20mg HPLC≥98% 用于含量測定
供鑒別用異山梨酯190043-201001常溫，避光100mg
瓜子金皂苷己 Polygalasaponin F 882664-74-6 20mg HPLC≥98% 用于含量測定
右旋糖酐分子量(套) Dexan molecular weight(set) 0.2g
蔓荊子皇速VitqxifolicHucngSuHPLC≥98%，20mg/vial
雪上一枝蒿甲素 Bullatine A 1354-84-3 20mg HPLC≥98% 用于含量測定
對照品4'羥基本乙酸140736-200501尿多酸肽HPLC含量
輔酶Q10 Coenzyme Q10 303-98-0 20mg HPLC≥98% 用于含量測定
豨薟Siegesbeckia orientalis ent-14,16-Epoxy-8-pimarene-3,15-diol Ent-14,16-環(huán)氧基-8-海松烯-3,15-二醇 1188281-98-2 C20H32O3 ≥95%
東莨菪苷Scopolin20mg/支
大魚藤樹Derris robusta (-)-Variabilin (6aS,11aS)-3,9-二甲氧基-6H-本并并(3,2-c)(1)本并-6a(11aH)-醇 370102-93-5 C17H16O5 安洛酸(5944
中藥對照
BrucellaSelectiveMedium
SABOURUD 2% dextrose broth 沙氏 2%右旋糖肉湯 1.08339.0500 MERCK默克 incubation media SABOURUD 2% dextrose broth 沙氏 2%右旋糖肉湯 1.08339.0500 MERCK默克
血平板(成品培養(yǎng)基) 20個/盒 用于營養(yǎng)要求較高的細菌的培養(yǎng)及溶血試驗
硫乙醇酸鹽流體培養(yǎng)基300ml/袋*藥品，生物制品無菌試驗，用于需氧菌、厭氧菌的培養(yǎng)
腦-心浸萃液態(tài)培養(yǎng)基 250g 用于糞鏈球菌的增菌培養(yǎng)
李氏菌選擇性培養(yǎng)基基礎(chǔ)(MMA)250g用于單增李氏菌選擇性分離(SN標(biāo)準(zhǔn))
YM瓊脂 YM Agar 用于霉菌,酵母菌及耐酸菌的分離培養(yǎng)
需氣菌厭氣菌培養(yǎng)基 Thioglycollate Medium 250克 用于培養(yǎng)需氧菌、微需氧菌和厭氧菌
解脲支原體肉湯基礎(chǔ)250g/瓶用于解脲支原體培養(yǎng)，使用前須向培養(yǎng)基中添加尿素、小牛血清及抑菌劑incubationmedia解脲支原體肉湯基礎(chǔ)250g/瓶用于解脲支原體培養(yǎng)，使用前須向培養(yǎng)基中添加尿素、小牛血清及抑菌劑
EC肉湯(含小導(dǎo)管) 9ml*20支/包 用于糞大腸菌群的測定
用方法
一、樣品 DNA 的制備
用自選方法提取細菌樣品 DNA。注意：DNA 純化方法是決定檢測靈敏度的關(guān)鍵因素。如果不能很好純化樣品 DNA，后面的 PCR 再靈敏也不能提高整體檢測靈敏度。
二、制備 stn 標(biāo)準(zhǔn)曲線（以 10-10E6 這 6 個 10 倍稀釋度為例。由于標(biāo)準(zhǔn)品濃度非常高，因此下列稀釋操作一定要在獨立的區(qū)域進行，千萬不能污染樣品或本試劑盒的其他成分）。為增加產(chǎn)品穩(wěn)定性和避免擴散傳染性病原，本產(chǎn)品不提供活體病毒做陽性對照，只提供沒有傳染性的、可以直接使用的 DNA 片段作為陽性對照。
1.標(biāo)記 6 個離心管，分別為 6，5，4，3，2 和 1 號。
2.用帶芯槍頭分別加入 45 μL 超純水（最好用帶芯槍頭，下同）。
3.先將本試劑盒提供的陽性對照用 TE 緩沖液或超純水 10 倍梯度稀釋到10E7 拷貝/μL（注：請不要將本試劑盒提供的標(biāo)準(zhǔn)品一次性稀釋至 10E7拷貝/μL，建議每次稀釋 10 倍，梯度稀釋至 10E7 拷貝/μL）。
細小病毒B19 PCR檢測試劑盒1.在 6 號管中加入 5  μL 10E7 拷貝/μL  的陽性對照(上步稀釋所得)，充分震蕩 1 分鐘，得 10E6 拷貝/μL 的陽性對照。
2.換槍頭，從 6 號管中取 5 μL 溶液到 5 號管中，充分震蕩 1 分鐘，得 10E5 拷貝/μL 的陽性對照。
3.換槍頭，從 5 號管中取 5 μL 溶液到 4 號管中，重復(fù)上面的操作直到得到 6 個稀釋度的陽性對照。
4.NC 管中不加任何陽性對照。
5.從 1-6 號管中分別取 5  μL 和待測樣品一起進行定量 PCR（見下步），每個樣品做 3 次重復(fù)。PCR 后得到每個陽性對照稀釋樣品的熒光 PCR Ct 值， 并以之為縱軸，以濃度的對數(shù)值為橫軸，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。 
一．PCR 檢測（20 μL 體系）
1.在 PCR 管中加入下列成分（待測樣品需要做三次重復(fù)，下表只列出一次） 
注:僅 ABI7500、7700 和 7900 儀器需要使用 ROX 作為對照，其他熒光 PCR 儀器（如 iCycler IQ、MJ Option、MJ Chromo4、MX3000、MX4000、RotorGene 3000、RotorGene 6000 和 LightCycler480）不需要使用 ROX。
建議 PCR 反應(yīng)參數(shù)（具體 PCR 參數(shù)可以根據(jù)儀器不同而自行優(yōu)化）
3. 數(shù)據(jù)采集
按所用儀器推薦的流程進行。本產(chǎn)品中所含的熒光染料在不結(jié)合DNA 時，最大吸收光譜在 471 nm，結(jié)合 DNA 時的最大吸收光譜在 500 nm， 最大發(fā)射光譜在 530 nm。
四、數(shù)據(jù)處理
以 stn 陽性對照濃度的 log 值為橫軸，以 Ct 值為縱軸，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。再以待測樣品濃度的 log 為橫軸，以 Ct 值為縱軸，通過待測樣品的 Ct 值計算出樣品 DNA 的濃度。