BT474人乳腺癌細胞通用/穩(wěn)轉(zhuǎn)/LUC活體成像

規(guī)格：T12.5*2

產(chǎn)品描述：
種屬：人源
組織來源：乳腺
疾�。簩�(dǎo)管癌
年齡：60歲
性別：女
細胞類型：上皮樣細胞
生長特性：貼壁生長

培養(yǎng)方式：
該細胞系培養(yǎng)所用基本培養(yǎng)基為Dulbecco’s Modified Eagle’s Medium(DMEM)，配置完全培養(yǎng)基時需加入10%FBS.

生物安全等級：1級

拆包 & 存儲：
1. 請立即檢查包裝袋是否有破損或漏液
2. 請立即將細胞培養(yǎng)瓶從包裝盒中取出，并按照下方操作步驟進行培養(yǎng)傳代
注意：如為凍存管，請收到后立即解凍培養(yǎng)

培養(yǎng)瓶中細胞操作步驟：
對于貼壁培養(yǎng)的細胞，寄送前，我們會將培養(yǎng)基充滿整個培養(yǎng)瓶，以減少產(chǎn)品運輸過程中貼壁細胞的脫落。
1.收到細胞產(chǎn)品后，請注意觀察是否有污染。將培養(yǎng)瓶置于倒置顯微鏡下仔細檢查是否渾濁、是否細菌污染。因在運輸過程中存在顛簸，且有些細胞對溫度變化也很敏感，可能存在一些細胞脫落漂浮的情況，這些細胞仍是活細胞，請勿丟棄，可離心富集后傳代使用。
2.對于貼壁培養(yǎng)的細胞，在生物安全柜環(huán)境中，用真空泵去除培養(yǎng)瓶中的多余培養(yǎng)基，至剩余5-8mL左右，隨后將細胞置于含有5%CO2的37°C恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。如果細胞已經(jīng)長滿培養(yǎng)瓶，請立即傳代。
3.對于懸浮培養(yǎng)的細胞，在生物安全柜環(huán)境中，轉(zhuǎn)移培養(yǎng)瓶中的細胞至離心管中，離心200×g/5-10min，去除上清后，用5mL培養(yǎng)基吹散細胞，轉(zhuǎn)移至新的培養(yǎng)瓶中，隨后置于含有5%CO2的37°C恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。

凍存細胞操作步驟：
注意：為保存細胞的高存活率，請收到產(chǎn)品后，立即解凍培養(yǎng)。
1.將凍存管置于37°C水浴中來回晃動，迅速解凍。為避免污染，確保凍存管口置于水面之上。解凍需迅速，大約2分鐘。
2. 一旦凍存管中液體融化后，立即取出，采用 70%酒精噴拭凍存管表面。從此步開始，后續(xù)操作須在生物安全柜中完成。
3.將凍存管中的液體轉(zhuǎn)移到含有5mL完全培養(yǎng)基的離心管中， 離心200×g/5-10min，用真空泵去除含有凍存液的上清。
4. 用完全培養(yǎng)基重新懸浮細胞并轉(zhuǎn)移到新的培養(yǎng)瓶中。為保證細胞復(fù)蘇的存活率，請將培養(yǎng)基在37°C水浴預(yù)熱后使用。
5. 將細胞置于含有5%CO2的37°C恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。

貼壁細胞傳代培養(yǎng)：
1. 吸取并棄掉培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)基。
2. 加入1.0 mL0.25（w/v）Trypsin-0.53mM EDTA溶液，并置于37°C培養(yǎng)箱中孵育，直至細胞從壁上脫落分離。此過程大約需要3至5分鐘（此處為12.5 cm2培養(yǎng)瓶所用體積，可根據(jù)實際情況增減用量）
3. 加入2mL完全培養(yǎng)基中和胰蛋白酶，并輕輕吹打?qū)⒓毎麖呐囵B(yǎng)瓶表面吹落，并使細胞分散。
4. 離心200xg/5min，去除上清后，取適量的培養(yǎng)基將細胞重懸,取適量懸液置于新的培養(yǎng)瓶中，并加入新鮮細胞完全培養(yǎng)基至總體積為4mL。
5. 將細胞置于含有5%CO2的37°C恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。
傳代比例：建議 1:2至1:3
培養(yǎng)基換液: 每隔2 至 3 天。