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凝膠遷移或電泳遷移率(EMSA)對(duì)外服務(wù)
同位素P32標(biāo)記探針/生物素/熒光素標(biāo)記/進(jìn)行檢測(cè)
服務(wù)類別:分子與細(xì)胞總訪問:8849
最后更新:2024-5-17半年訪問:99
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凝膠遷移或電泳遷移率(EMSA

實(shí)驗(yàn)技術(shù)對(duì)外服務(wù)

凝膠遷移或電泳遷移(EMSA)原理:

凝膠遷移或電泳遷移率實(shí)驗(yàn)(EMSA)是一種研究DNA結(jié)合蛋白和其相關(guān)的DNA結(jié)合序列相互作用的技術(shù),可用于定性和定量分析。這一技術(shù)最初用于研究DNA結(jié)合蛋白,目前已用于研究RNA結(jié)合蛋白和特定的RNA序列的相互作用。通常將純化的蛋白和細(xì)胞粗提液和32P同位素標(biāo)記的DNA或RNA探針一同保溫,在非變性的聚丙烯凝膠電泳上,分離復(fù)合物和非結(jié)合的探針。DNA-復(fù)合物或RNA-復(fù)合物比非結(jié)合的探針移動(dòng)得慢。同位素標(biāo)記的探針依研究的結(jié)合蛋白的不同,可是雙鏈或者是單鏈。當(dāng)檢測(cè)如轉(zhuǎn)錄調(diào)控因子一類的DNA結(jié)合蛋白,可用純化蛋白,部分純化蛋白,或核細(xì)胞抽提液。在檢測(cè)RNA結(jié)合蛋白時(shí),依據(jù)目的RNA結(jié)合蛋白的位置,可用純化或部分純化的蛋白,也可用核或胞質(zhì)細(xì)胞抽提液。競(jìng)爭(zhēng)實(shí)驗(yàn)中采用含蛋白結(jié)合序列的DNA或RNA片段和寡核苷酸片段(特異),和其它非相關(guān)的片段(非特異),來確定DNA或RNA結(jié)合蛋白的特異性。在競(jìng)爭(zhēng)的特異和非特異片段的存在下,依據(jù)復(fù)合物的特點(diǎn)和強(qiáng)度來確定特異結(jié)合。

主要儀器:

高速組織搗碎機(jī): SWISS KINEMATIC Ltd. Co(型號(hào):PT1600E)

電泳儀:北京六一儀器廠(型號(hào):DYY-8C)

電泳槽:北京六一儀器廠(型號(hào):DYCZ-24D)

轉(zhuǎn)印槽:北京六一儀器廠(型號(hào):DYCZ-40D)

低溫高速離心機(jī):湖南湘儀公司(型號(hào):H2050R)

超低溫冰箱:美國(guó)FORMA公司(型號(hào):702)

分光光度計(jì):上海分析儀器總廠(型號(hào):721)

脫色搖床:上海琪特分析儀器有限公司(型號(hào):STS-2)

 

主要試劑:

蛋白質(zhì)預(yù)染分子量marker(118,90,48,36,27,20kd):Fermentas

NC膜:Millipore公司(型號(hào):0.45um)

化學(xué)發(fā)光底物:PIERCE公司

電泳類生化試劑均為美國(guó)amresco公司產(chǎn)品

其他生化試劑為國(guó)藥集團(tuán)上海化學(xué)試劑公司產(chǎn)品

總蛋白測(cè)定試劑盒:南京建成生物工程研究所

NF-KB探針:由Invitrogen公司合成與標(biāo)記

成像系統(tǒng):富士FLA-5000全功能激光影像成像系統(tǒng)

EMSA實(shí)驗(yàn)步驟:

1.探針的標(biāo)記:

2、探針的純化:

3、EMSA 膠的配制:

4、EMSA結(jié)合反應(yīng):

5、電泳分析:

客戶需知:

方法:     生物素/熒光素標(biāo)記/進(jìn)行檢測(cè)。

技術(shù)要點(diǎn): 實(shí)驗(yàn)過程包括核蛋白的提取,同位素標(biāo)記/生物素/熒光素標(biāo)記/與純化,凝膠電泳,膠片暴光等。在EMSA操作中會(huì)用到同位素,要注意實(shí)驗(yàn)室環(huán)境和實(shí)驗(yàn)員的保護(hù)。

客戶提供:細(xì)胞。玻担停痰募(xì)胞瓶培養(yǎng)的細(xì)胞!〗M織。玻埃癿g-400mg

探針 自備探針! 完成時(shí)間: 。常磦(gè)星期。

結(jié)果交付:  詳細(xì)實(shí)驗(yàn)步驟,和實(shí)驗(yàn)圖片。

【本平臺(tái)合作項(xiàng)目】

分子診斷、病理診斷、藥效學(xué)評(píng)價(jià)、毒理學(xué)實(shí)驗(yàn)、細(xì)胞藥篩、動(dòng)物建模、PDX模型、CRISPR/Cas9基因編輯、病理檢測(cè)、基因芯片、蛋白組學(xué)、代謝組學(xué)、高通量測(cè)序、ChIP、CO-IP、生物信息學(xué)分析、知識(shí)產(chǎn)權(quán)服務(wù)!

【全國(guó)免費(fèi)熱線】:400-675-6758

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【郵箱】 china-western@163.com

【官網(wǎng)網(wǎng)址】www.cqwestern.com

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