常規(guī)基因敲除小鼠模型建立

建立常規(guī)基因敲除（knockout，簡(jiǎn)稱(chēng)KO）小鼠模型，使您感興趣的靶基因功能在小鼠所有細(xì)胞以及整個(gè)生命過(guò)程中永久缺失。

通過(guò)CRISPR基因編輯技術(shù)，構(gòu)建一個(gè)常規(guī)基因敲除小鼠模型一般需要4-6個(gè)月。

根據(jù)基因序列設(shè)計(jì)合成sgRNA與Cas9 mRNA共同注射到小鼠受精卵，Cas9核酸酶、 sgRNA、基因組靶序列結(jié)合并切割雙鏈DNA ，通過(guò)非同源性末端接合(NHEJ)修復(fù)途徑造成靶基因的移碼突變或片段敲除，從而實(shí)現(xiàn)基因敲除。NHEJ修復(fù)是隨機(jī)的，可能在同一小鼠體內(nèi)不同細(xì)胞造成的修復(fù)結(jié)果不同，F(xiàn)0小鼠需要繁殖一代，獲得穩(wěn)定遺傳的敲除雜合子小鼠。

通過(guò)ES細(xì)胞打靶技術(shù)，構(gòu)建一個(gè)常規(guī)基因敲除小鼠模型一般需要7-12個(gè)月。

構(gòu)建以篩選基因新霉素（Neo）取代靶基因的一個(gè)或多個(gè)外顯子的重組載體，轉(zhuǎn)入ES細(xì)胞，獲得正確發(fā)生同源重組的ES克隆。ES細(xì)胞進(jìn)行囊胚注射，獲得部分ES來(lái)源的嵌合鼠，嵌合鼠與野生型小鼠交配，最終獲得來(lái)源于重組ES細(xì)胞的雜合子小鼠。雜合子小鼠一條染色體上的靶基因指定外顯子被Neo基因所取代，雜合子交配獲得靶基因失活的純合子小鼠。