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慢病毒，腺病毒介導(dǎo)轉(zhuǎn)基因技術(shù)，RNAi/基因過(guò)表達(dá)專業(yè)服務(wù)
慢病毒，腺病毒，RNAi類，細(xì)胞生物學(xué)整體實(shí)驗(yàn)，骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞培養(yǎng)、心肌細(xì)胞培養(yǎng)，蛋白組學(xué)類（iTRAQ），裸鼠成瘤類，分子生物學(xué)類，抗體制備類，芯片類，病理類等各項(xiàng)實(shí)驗(yàn)技術(shù)服務(wù)。
服務(wù)類別：轉(zhuǎn)基因總訪問(wèn)：7546
最后更新：2024-5-17半年訪問(wèn)：114
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      我中心可以為廣大科研朋友提供慢病毒載體構(gòu)建，腺病毒載體的構(gòu)建，腺病毒的擴(kuò)增，包裝，純化。以及慢病毒的包裝和純化�；虻倪^(guò)表達(dá)，以及RNAI相關(guān)的研究。
     威斯騰生物技術(shù)服務(wù)中心是一家從事生命科學(xué)研究、產(chǎn)品開(kāi)發(fā)和實(shí)驗(yàn)技術(shù)服務(wù)的專業(yè)機(jī)構(gòu)，目前主要從事基因診斷試劑的研發(fā)以及分子生物學(xué)、細(xì)胞生物學(xué)和免疫學(xué)相關(guān)領(lǐng)域的技術(shù)服務(wù)。我們的宗旨是：加強(qiáng)學(xué)術(shù)交流，推動(dòng)科研發(fā)展，科學(xué)，嚴(yán)謹(jǐn)，求實(shí)，專業(yè)。
1、慢病毒的簡(jiǎn)介：
Lentivirus是逆轉(zhuǎn)錄病毒的一種，具有逆轉(zhuǎn)錄病毒的基本結(jié)構(gòu)和特性；能整合入宿主細(xì)胞基因組，長(zhǎng)期表達(dá)，可用于轉(zhuǎn)基因動(dòng)物制備；但也有不同于逆轉(zhuǎn)錄病毒的組分和特性；比逆轉(zhuǎn)錄病毒具有更高的滴度，不僅可以感染分裂細(xì)胞，更重要的是還能感染非分裂的細(xì)胞。利用Lentivirus構(gòu)建的shRNA表達(dá)載體，與化學(xué)合成的siRNA和基于瞬時(shí)表達(dá)載體構(gòu)建的shRNA相比，一方面可以替代后者，另一方面，Lentivirus-shRNA載體經(jīng)包裝系統(tǒng)包裝后，可用于感染依靠傳統(tǒng)轉(zhuǎn)染試劑難于轉(zhuǎn)染的細(xì)胞（如原代細(xì)胞、懸浮細(xì)胞等），并且在感染后可以整合到受感細(xì)胞的基因組，進(jìn)行長(zhǎng)時(shí)間的穩(wěn)定表達(dá)，是制備穩(wěn)定表達(dá)shRNA細(xì)胞株和進(jìn)行體內(nèi)實(shí)驗(yàn)(in vivo)的最有效手段。目前我們能夠?yàn)榭蛻籼峁⿵妮d體構(gòu)建到慢病毒包裝純化和檢測(cè)的一站式服務(wù)；同時(shí)公司還在高效慢病毒生產(chǎn)技術(shù)的基礎(chǔ)上建立并完善了慢病毒載體制備轉(zhuǎn)基因動(dòng)物的實(shí)驗(yàn)技術(shù)。
2、慢病毒載體構(gòu)建包裝實(shí)驗(yàn)流程如下：
1. 根據(jù)目的基因相關(guān)信息（序列，基因序列號(hào)等），構(gòu)建含有外源基因或序列的重組載體；
2. 對(duì)于測(cè)序正確的重組質(zhì)粒，提取和純化高質(zhì)量（不含內(nèi)毒素）的重組質(zhì)粒；
3. 使用高效重組載體和慢病毒包裝質(zhì)粒共轉(zhuǎn)染293T細(xì)胞，進(jìn)行病毒包裝并收集上清液；
4. 通過(guò)超濾和超速離心濃縮和純化病毒；
5. 用病毒液感染293T細(xì)胞，測(cè)定病毒滴度；

    用高質(zhì)量的病毒液感染靶細(xì)胞，通過(guò)定量PCR或者Westenblot檢測(cè)目的基因表達(dá)，也可以進(jìn)一步進(jìn)行穩(wěn)定細(xì)胞株的篩選用于長(zhǎng)期的功能學(xué)研究。
3、 RNAi與慢病毒載體技術(shù)服務(wù)：
近年來(lái)的研究表明，將與mRNA對(duì)應(yīng)的正義RNA和反義RNA組成的雙鏈RNA(dsRNA)導(dǎo)入細(xì)胞，可以使mRNA發(fā)生特異性的降解，導(dǎo)致其相應(yīng)的基因沉默。這種轉(zhuǎn)錄后基因沉默機(jī)制(PTGS)被稱為RNA干擾（RNAi）。通過(guò)構(gòu)建RNAi表達(dá)載體制備shRNA(發(fā)卡結(jié)構(gòu)小干擾RNA)，已成為進(jìn)行RNA干擾實(shí)驗(yàn)的常用手段之一。而目前為了感染原代細(xì)胞和難感染的細(xì)胞系或者在動(dòng)物水平進(jìn)行RNAi，研究科學(xué)家更多的選擇了慢病毒載體。在RNAi的研究中，為了感染原代細(xì)胞和難感染的細(xì)胞系，科學(xué)家開(kāi)始借助于病毒載體實(shí)現(xiàn)RNAi；由于慢病毒可以同時(shí)感染分裂和非分裂細(xì)胞、整合性以及免疫原性低等優(yōu)點(diǎn)，目前在RNAi的研究中，基于慢病毒構(gòu)建的shRNA被最廣泛的使用。
  

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