Real Time PCR—Cycleave PCR法原理

瀏覽次數(shù)：6996　發(fā)布日期：2009-1-21　來(lái)源：本站　僅供參考，謝絕轉(zhuǎn)載，否則責(zé)任自負(fù)

■ CycleavePCR法原理

CycleavePCR法是由RNA和DNA構(gòu)成的雜合Cycling 探針與RNase H組合使用的高靈敏度檢測(cè)方法，能夠高效率地檢出目的基因。Cycling 探針內(nèi)部夾有RNA部分，5′端標(biāo)記熒光物質(zhì)，3′端標(biāo)記淬滅物質(zhì)，當(dāng)探針處于完整狀態(tài)時(shí)，由于熒光淬滅作用抑制熒光物質(zhì)發(fā)出熒光，但當(dāng)探針與擴(kuò)增產(chǎn)物中的互補(bǔ)序列雜交后，RNase H在RNA部分將探針切斷，淬滅抑制作用解除，熒光物質(zhì)發(fā)出熒光，通過(guò)測(cè)定熒光強(qiáng)度，能夠?qū)崟r(shí)監(jiān)測(cè)擴(kuò)增產(chǎn)物量。如果探針的RNA部分或與RNA部分相鄰的2 ~ 3個(gè)堿基與模板不互補(bǔ)，RNase H就不能在RNA部分將探針切斷，所以該檢出方法是一種即使一堿基不同也能識(shí)別的高特異性檢出方法，特別適合于SNP解析。
Cycling 探針堿基數(shù)少，一般為十二個(gè)堿基左右，熒光報(bào)告基團(tuán)和淬滅基團(tuán)的距離近，淬滅效果好，熒光背景低，信噪比高。具體原理詳見(jiàn)圖1：

圖1 Cycling 探針?lè)ㄔ?

■ 利用CycleavePCR法的SNP解析原理

CycleavePCR法在SNP分型解析方面具有強(qiáng)大的優(yōu)勢(shì)。使用CycleavePCR法進(jìn)行SNP解析，在設(shè)計(jì)探針時(shí)，把多型位點(diǎn)或與其相鄰的第2 ~ 3個(gè)堿基設(shè)計(jì)成RNA，使用不同的熒光物質(zhì)分別標(biāo)記野生型和突變型探針，通過(guò)對(duì)兩種不同熒光物質(zhì)進(jìn)行雙通道同步檢測(cè)，實(shí)現(xiàn)對(duì)每個(gè)檢測(cè)樣品的SNP位點(diǎn)的基因型判定。

標(biāo)簽： Real Time PCR Cycleave PCR 說(shuō)明原理

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