高效液相色譜法測定畜禽肉中土霉素、四環(huán)素、金霉素殘留量

瀏覽次數(shù)：2010　發(fā)布日期：2010-6-17　來源：本站　僅供參考，謝絕轉(zhuǎn)載，否則責(zé)任自負(fù)

1.實驗?zāi)康?
      據(jù)標(biāo)準(zhǔn)GB/T 14931.1-94測定畜禽肉中土霉素、四環(huán)素、金霉素殘留量。最低檢出濃度為：0.15，0.20，0.65mg/kg。
2.試驗原理
　　樣品經(jīng)提取，微孔濾膜過濾后直接進樣，用反相色譜分離，紫外檢測器檢測，與標(biāo)準(zhǔn)比較定量，出峰順序為土霉素、四環(huán)素、金霉素。標(biāo)準(zhǔn)加法定量。
3.試劑
3.1　乙腈(分析純)。
3.2　0.01 mol/L磷酸二氫鈉溶液：稱取1.56 g(±0.01g)磷酸二氫鈉(NaH2PH4.2H2O)溶于蒸餾水中，定容到100 mL，經(jīng)過濾器過濾（選用微孔濾膜為0.45 μm），備用。
3.3　土霉素(OTC)標(biāo)準(zhǔn)溶液：稱取土霉素0.0100g(±0.0001g)，用0.1mol/L鹽酸溶液每毫升含土霉素1mg。
3.4　四環(huán)素(TC)標(biāo)準(zhǔn)溶液：稱取四環(huán)素0.0100g(±0.001g)，用0.01 mol/L鹽酸溶液溶解并定容10.00 mL，此溶液每毫升含四環(huán)素1mg。
3.5　金霉素(CTC)標(biāo)準(zhǔn)溶液：稱取金霉素0.0100g(±0.0001g)，溶于蒸餾水并定容成10.00mL，此溶液每毫升含金霉素1mg。以上標(biāo)準(zhǔn)品均按1000單位/mg折算。3.3～3.5溶液應(yīng)于4℃以下保存，可使用1周。
3.6　混合標(biāo)準(zhǔn)溶液：取3.3、3.4標(biāo)準(zhǔn)溶液各1.00 mL，取3.5標(biāo)準(zhǔn)溶液2.00 mL，置于10mL容量瓶中，加蒸餾水至刻度。此溶液每毫升含土霉素、四環(huán)素各0.1mg，金霉素0.2mg，臨時現(xiàn)配。
3.7　5％高氯酸溶液。
4.儀器
4.1  高效液相色譜儀(HPLC)：具紫外檢測器。
4.2  振蕩器：天津市恒奧科技發(fā)展有限公司
4.3  過濾器：天津市恒奧科技發(fā)展有限公司
4.4  超聲波：天津市恒奧科技發(fā)展有限公司
5.色譜條件
5.1　柱：ODS-C18 (5 μm)　6.2mm×15 cm。
5.2　檢測波長：355 nm。
5.3　靈敏度：0.002 AUFS。
5.4　柱溫：室溫。
5.5　流速：1.0mL/min。
5.6　進樣量：10 μL。
5.7　流動相：乙腈/0.01 mol/L磷酸二氫鈉溶液(用30％(V/V)硝酸溶液調(diào)節(jié)pH2.5)，35：65(V/V)，使用前用超聲波脫氣10 min。
6.操作方法
6.1　樣品測定：稱取5.00 g(±0.01 g)切碎的肉樣(＜5 mm)，置于50 mL錐形燒瓶中，加入5％高氯酸25.0mL，于振蕩器上振蕩提取10 min，移入到離心管中，以2000 r/min離心3min，取上清液經(jīng)0.45μm濾膜過濾，取溶液10μL進樣，記錄峰高，從工作曲線上查得含量。
6.2　工作曲線：分別稱取7份切碎的肉樣，每份5.00 g(±0.01 g)，分別加入混合標(biāo)準(zhǔn)溶液0、25、50、100、150、200、250 μL(含土霉素、四環(huán)素各為0、2.5、5.0、10.0、15.0、20.0、25.0 μg，含金霉素0、5.0、10.0、20.0、30.0、40.0、50.0 μg)，按6.1方法操作，以峰高為縱坐標(biāo)，以抗生素含量為橫坐標(biāo)，繪制工作曲線。

來源：天津市恒奧科技發(fā)展有限公司
聯(lián)系電話：022-83713517;022-83713527
E-mail：halqj@126.com

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