血清熱滅活的問題

血清的熱滅活是很多培養(yǎng)者感興趣的話題，價格不菲的血清中含有諸如生長因子，維生素，氨基酸等珍貴物質(zhì)，而將它們置于50℃以上的溫度長達(dá)30分鐘是完全沒有必要的。盡管如此，在大多數(shù)實(shí)驗室之中血清的熱滅活還是作為常規(guī)來執(zhí)行，多數(shù)實(shí)驗者并沒有考慮熱處理對血清中的生長因子，氨基酸等成分帶來的負(fù)面影響，在我們的技術(shù)熱線中最常被提到的就是否該對血清進(jìn)行熱滅活，下面我們就對胎牛血清的熱滅活進(jìn)行一些探討和解釋。

熱滅活目的是為了去除血清中補(bǔ)體等對熱敏感的物質(zhì)，但是在胎牛血清中對補(bǔ)體的滅活則明顯沒有必要。Triglia和Linscott［1］曾對商業(yè)胎牛血清中的補(bǔ)體成分進(jìn)行測定，他們發(fā)現(xiàn)胎牛血清中含有的C1，C6僅達(dá)成年動物血清的1-3%，而其它補(bǔ)體成分僅有成年動物的5-50％，至于補(bǔ)體的主要成分C3在胎牛血清中則幾乎不能檢出。通過補(bǔ)體固定實(shí)驗，我們也在多個不同批次的胎牛血清中獲得了相似的結(jié)果。即使是在未稀釋的血清中，也未發(fā)現(xiàn)有明顯的溶血現(xiàn)象。另外，多數(shù)實(shí)驗室在培養(yǎng)前將培養(yǎng)液進(jìn)行預(yù)熱的過程，也對熱敏的補(bǔ)體有滅活的作用。

根據(jù)調(diào)查，至少70％的研究者對血清的滅活僅僅是因為遵照常規(guī)操作，或者說認(rèn)為是理所當(dāng)然的。常規(guī)滅活建議的溫度在45℃到62℃之間,而時間則從15分鐘到60分鐘不等.其中最常用的手法是56℃熱處理30分鐘。隨著血清采集、處理、加工工藝的提高，許多早先認(rèn)為是熱滅活的原因已經(jīng)不再成立，只有少數(shù)對血清進(jìn)行熱滅活的研究者在實(shí)驗中證實(shí)了這一步驟的有效性和必要性。

Pinyopummintr等證明血清去除滅活步驟不影響牛胚胎的發(fā)育分化［2］；有研究結(jié)果［3］證實(shí)熱滅活步驟減弱了胎牛血清和小牛血清對細(xì)胞的促粘附作用，在用SV-BHK、BALB-3T3、CV－1、FS-4細(xì)胞對細(xì)胞粘附實(shí)驗中，熱滅活對胎牛血清的影響小于對小牛血清的影響。

我們調(diào)查了熱滅活對胎牛血清以及對其中不同細(xì)胞株生長能力的影響。通過比較11個不同細(xì)胞株，發(fā)現(xiàn)其中熱滅活對6 個細(xì)胞株（HBAE，MDBK，Vero，成纖維細(xì)胞，MRC-5）的生長帶來負(fù)面影響，三個細(xì)胞株（FOX-NY，MDCK和CHO-K1）不受熱滅活的影響，而只有兩個細(xì)胞株（Balb/3T3，Sp2/0Ag14 hybrid），在熱滅活之后，細(xì)胞生長有輕微的改善。所以，在正常的操作下，熱滅活通常對細(xì)胞的生長沒有明顯的促進(jìn)作用。

在對補(bǔ)體滅活以外，熱處理同時也對血清中可能存在的支原體具有滅活作用。多年以前，450納米孔徑的濾膜被用于加工血清時，血清中支原體的污染時有發(fā)生。針對這個問題，HyClone首家使用100納米三層濾膜連續(xù)濾過技術(shù)，自從采用這項技術(shù)以及后來的40納米濾過技術(shù)之后，我們的血清產(chǎn)品中沒有再發(fā)現(xiàn)有支原體的污染，也是使得熱滅活成為不必要的另外一個原因。

在正常操作下，熱滅活經(jīng)常給血清產(chǎn)品帶來負(fù)面的影響，對血清的加熱經(jīng)常導(dǎo)致血清中沉淀的產(chǎn)生，而導(dǎo)致的沉淀又常常被認(rèn)為是微生物的污染。注意到這個現(xiàn)象之后，為了驗證污染的存在，或者促進(jìn)沉淀的溶解，許多培養(yǎng)者往往將血清放置37℃溫育。這卻往往使情況變得更糟，血清中的蛋白進(jìn)一步的析出，為了確信血清未被污染，進(jìn)行的鏡檢，無菌培養(yǎng)試驗，和革蘭氏染色試驗更是浪費(fèi)了實(shí)驗者大量的時間和精力。

總之，多數(shù)細(xì)胞培養(yǎng)中血清的熱滅活并不是必要的。很多場合下，熱滅活并不會改善細(xì)胞的生長，卻降低了支持細(xì)胞生長的能力。即使在少數(shù)有促進(jìn)的情況下，其促進(jìn)的比率也是微不足道的。另外，血清的熱滅活導(dǎo)致的沉淀常常被認(rèn)為是微生物的污染，從而給用戶和供應(yīng)商都帶來不必要的麻煩。我們建議，對于那些對血清進(jìn)行滅活的用戶，需要通過試驗來證實(shí)其必要性，確定滅活的適當(dāng)條件；在滅活過程中，需要嚴(yán)格認(rèn)真監(jiān)測，并選擇一個可重復(fù)的方案進(jìn)行操作。