1. 厭氧培養(yǎng)箱應(yīng)安放在溫差較小、操作方便的位置,應(yīng)避免陽(yáng)光直曬和遠(yuǎn)離采暖設(shè)備,放置平穩(wěn);
2. 將混合氣瓶、氮?dú)馄堪卜牌椒(wěn),并分別裝好減壓閥(含壓力表),安置在適當(dāng)位置;
3. 接上氣路并檢查氣路,為防止漏氣,必要時(shí)可在各接管處用密封膠粘合;
使用
(一)操作室厭氧環(huán)境形成:
1. 按使用要求放置好必要的附件和器具,并向操作室內(nèi)放入二個(gè)無(wú)毒塑料袋;
2. 通電源開(kāi)照明燈,開(kāi)溫控儀,調(diào)節(jié)所需溫度及安全溫度;
3. 操作室內(nèi)放入1000g鈀粒(封閉)和500g干燥劑,并放入美蘭指示劑(封閉);
4. 關(guān)緊取樣室內(nèi)外門(mén),并抽真空校驗(yàn);
5. 操作室內(nèi)第一次置換(氮?dú)庵脫Q):
A. 先用橡皮管插入操作室內(nèi)進(jìn)氣口,另一頭插入塑料袋;
B. 接通氮?dú)膺M(jìn)氣路,打開(kāi)氮?dú)饪刂崎y1,使二只塑料袋充足氮?dú),關(guān)閉閥門(mén)1,然后扎緊袋口;
C. 把乳膠手套套在觀察板法蘭圈上并扎緊;
D. 把塑料袋內(nèi)氮?dú)鉂u漸放于操作室內(nèi),至全部放出。
6. 操作室第二次置換(氮?dú)庵脫Q)重復(fù)一次充氮過(guò)程,取樣室先抽真空,并注意隨時(shí)用腳踏開(kāi)關(guān)開(kāi)閉排氣。
7. 操作室第三次置換(混合氣體置換):(混合氣體配比為N2 85%、H2 10%、CO2 5%)
A. 調(diào)換氣路打開(kāi)混合氣閥3進(jìn)氣,充氣時(shí)取樣室先抽真空,并隨時(shí)用腳踏開(kāi)關(guān)開(kāi)閉排氣;
B. 混合氣充滿塑料袋后,關(guān)掉混合氣閥并打開(kāi)閥5,使混合氣經(jīng)過(guò)流量計(jì),調(diào)整流量計(jì),流量為每分鐘10ml左右;
C. 把塑料袋內(nèi)混合氣漸漸排于操作室內(nèi);
D. 通過(guò)三次換氣后,操作室內(nèi)氣體含氧量已處于極微量狀態(tài)。
8. 操作室內(nèi)打開(kāi)粑粒除氧劑,接通除氧催化器電源進(jìn)行催化除氧,一小時(shí)后開(kāi)美蘭指示劑(美蘭安瓶)觀察其變色情況,不變色為操作室內(nèi)達(dá)到厭氧環(huán)境;
9. 開(kāi)紫外線滅菌燈,室內(nèi)進(jìn)行滅菌處理,滅菌時(shí)間按具體實(shí)驗(yàn)自定。
(二)菌種的置入和培養(yǎng):
1. 檢查取樣室內(nèi)門(mén)并關(guān)緊之;
2. 打開(kāi)取樣室外門(mén),將菌種放入取樣室后即關(guān)上外門(mén);
3. 取樣室充氮置換三次過(guò)程:打開(kāi)真空泵,先抽真空度500ml汞柱(66kPa)以上停,然后人工打開(kāi)氮?dú)忾y2進(jìn)氣,使指針回復(fù)零位,關(guān)掉閥2。第二次重復(fù)操作一次。第三次操作時(shí),使真空度500ml汞柱(66kPa)以上停,然后打開(kāi)閥4進(jìn)混合氣,使指針回復(fù)零位,后掉閥4。取樣室充氮置換三次過(guò)程結(jié)束;
4. 如選定真空度較低就需要增加置換的次數(shù);
5. 取樣室內(nèi)外門(mén)開(kāi)啟、關(guān)緊,再抽低真空度100ml汞柱(13kPa)檢驗(yàn);
6. 厭氧培養(yǎng)箱需要長(zhǎng)期連續(xù)使用的條件:
A. 每天在操作室內(nèi)打開(kāi)美蘭指示劑觀察,如不正常就必須重新?lián)Q氣;
B. 要長(zhǎng)期連續(xù)輸入微量的混合氣體,使補(bǔ)進(jìn)的氮?dú)饽芎臀⒘康难踅Y(jié)合通過(guò)催化吸收,保證室內(nèi)厭氧狀態(tài),補(bǔ)入混合氣流量選定為每分鐘10ml左右;
C. 連續(xù)培養(yǎng)運(yùn)行一天,更換一次除氧劑和干燥劑。
7. 操作室內(nèi)培養(yǎng)室內(nèi)室溫度可任意選擇和控制。
8. 混合氣瓶、氮?dú)馄枯敵鰤毫φ{(diào)整:調(diào)節(jié)減壓閥,使輸出壓力0.1Mpa左右。
注意事項(xiàng)
1. 儀器盡可能地安裝于空氣清凈、溫度變化較小的地方;
2. 開(kāi)機(jī)前應(yīng)全面熟悉和了解各組成配套儀器、儀表的使用說(shuō)明,掌握正確使用方法;
3. 培養(yǎng)物放入必須是在操作室內(nèi)達(dá)到絕對(duì)厭氧環(huán)境后放入;
4. 如發(fā)生故障(停氣等原因)操作室內(nèi)仍可保持12小時(shí)厭氧狀態(tài)(超過(guò)12小時(shí)則根據(jù)需要把培養(yǎng)物取出另作處理);
5. 經(jīng)常注意氣路有無(wú)漏氣現(xiàn)象;
6. 調(diào)換氣瓶時(shí),注意要扎緊氣管,避免流入含氧氣體;
7. 真空泵按要求使用,定期檢查加油。