測(cè)定水中苯并(a)芘的濃度：乙�；癁V紙層析熒光分光光度法

4.5 立式離心機(jī)，轉(zhuǎn)速為4000r／min。

4.6 分液漏斗，1L、3L、100mL�；钊�上禁用油性潤(rùn)滑劑，活塞直接用水或有機(jī)溶劑潤(rùn)滑即可。

4.7 錐形瓶，250mL。具磨口玻璃塞。

4.8 恒溫水浴鍋。

4.9 層析缸。

4.10 具磨口塞刻度離心管，5mL。

4.11 點(diǎn)樣用玻璃毛細(xì)管(自制)。

4.12 分析天平、感量0.01mg。

5 樣品保存

水樣應(yīng)貯于玻璃瓶中并避光，當(dāng)日(24h內(nèi))用環(huán)己烷萃取，環(huán)已烷萃取液放入冰箱中保存。

6 步驟

6.1 樣品和標(biāo)樣的預(yù)處理

6.1.1 清潔水和地面水萃取

取充分混勻的清潔水樣2000mL放入3000mL分液漏斗中，用環(huán)己烷萃取兩次，每次用50mL，在康氏振蕩器上每次振蕩3min，取下放氣，靜置半小時(shí)，待分層后，將兩次環(huán)已烷萃取液收集于具塞錐形瓶中，棄去水相部分。

6.1.2 工業(yè)廢水的萃取

取混勻的工業(yè)廢水樣1000mL，放入1000mL分液漏斗中，每次用50mL環(huán)已烷萃取兩次，在康氏振蕩器上每次振蕩3min，取下放氣，靜置半小時(shí)，待分層后，將兩次環(huán)已烷萃取液收集于具塞錐形瓶中，棄去水相部分。

6.1.3 脫水、濃縮

在(上述)環(huán)已烷萃取液中加入無(wú)水硫酸鈉(約20～50g)，靜置至完全脫水(約1～2h)，至具塞錐形瓶底部無(wú)水為止。如果環(huán)已烷萃取液顏色比較深，則將脫水后環(huán)已烷定容至100mL，分取其一定體積濃縮；如果顏色不深則全部濃縮。在溫度為70～75C用KD濃縮器減壓濃縮至近干，用苯洗滌濃縮管壁三次，每次用3滴，再濃縮至0.05mL，以備紙層析用。

6.1.4 紙層析分離

在乙酰化濾紙30cm長(zhǎng)的下端3cm處，用鉛筆畫(huà)一橫線(xiàn)，橫線(xiàn)兩端各留出1.5cm，以2.4cm的間隔將標(biāo)準(zhǔn)B(a)P與樣品濃縮液用玻璃毛細(xì)管交叉點(diǎn)樣。點(diǎn)樣斑點(diǎn)直徑不超過(guò)3～4mm。點(diǎn)樣過(guò)程中用冷風(fēng)吹干。每支濃縮管洗兩次，每次用一滴苯，全部點(diǎn)在紙上。將點(diǎn)過(guò)樣的層析濾紙掛在層析缸內(nèi)架子上，加入展開(kāi)劑[甲醇＋乙醚＋蒸餾水＝4＋4＋1(體積比)]，直到濾紙下端浸入展開(kāi)劑1cm為止。加蓋用透明膠紙密封。于暗室中展開(kāi)2～4h。取出層析濾紙，在紫外分析儀照射下用鉛筆圈出標(biāo)樣B(a)P斑點(diǎn)以及樣品中與其高度(Rf值)相同的紫藍(lán)色斑點(diǎn)范圍。

剪下用鉛筆圈出的斑點(diǎn)，剪成小條，分別放入5mL具塞離心管中。在105～110℃烘箱中烘10min(亦可在干燥器中或干凈空氣中晾干)。在干燥器內(nèi)冷卻后、加入丙酮至標(biāo)線(xiàn)。用手振蕩1min后，以3000r／min的速度離心2min。上清液留待測(cè)量用。

6.2 測(cè)定

將標(biāo)準(zhǔn)B(a)P斑點(diǎn)和樣品斑點(diǎn)的丙酮洗脫液分別注入10mm的石英比色皿中，在激發(fā)、發(fā)射狹縫分別為10nm、2nm，激發(fā)波長(zhǎng)為367nm處，測(cè)其發(fā)射波長(zhǎng)402nm、405nm、408nm處的熒光強(qiáng)度F。

7 結(jié)果的表示

用窄基線(xiàn)法按下列公式計(jì)算出標(biāo)準(zhǔn)B(a)P和樣品B(a)P的相對(duì)熒光強(qiáng)度，再計(jì)算出B(a)P的含量C(用相對(duì)比較計(jì)算法)。

式中：C——水樣B(a)P含量，μg／L；

M——標(biāo)準(zhǔn)B(a)P點(diǎn)樣量，μg；

F標(biāo)準(zhǔn)——標(biāo)準(zhǔn)B(a)P的相對(duì)熒光強(qiáng)度；

F樣品——樣品斑點(diǎn)的相對(duì)熒光強(qiáng)度；

V——水樣體積，L；

R——環(huán)己烷提取液總體積與濃縮時(shí)所取的環(huán)己烷提取液的體積之比值。

8 精密度與準(zhǔn)確度

8.1 精密度

五個(gè)實(shí)驗(yàn)室自行配制的含有B(a)P近似O.2μg／L的焦化廢水的精密度見(jiàn)表1。

表1 精密度

8.2 準(zhǔn)確度

兩種工業(yè)廢水的加標(biāo)回收率見(jiàn)表2、表3。

表2 焦化廢水加標(biāo)回收結(jié)果

表3 瀝青廢水加標(biāo)回收結(jié)果

附錄A 對(duì)除去B(a)P干擾物的說(shuō)明

(補(bǔ)充件)

A1 石油、含油廢水按下面操作進(jìn)行 將上述(6.1.2)100mL環(huán)己烷萃取液定容后取出20mL，放入100mL分液漏斗。用DMSO萃取2次，每次5mL，用手振蕩2min，注意放氣，靜置半小時(shí)。待分層后收集兩次萃取的DMso液于另一個(gè)100mL分液漏斗中，棄去環(huán)己烷液。于盛有10mLDMSo液的分液漏斗中加入事先用冰冷卻過(guò)的1：1HCl15mL，冷卻至室溫，再用環(huán)己烷反萃取兩次，每次5ml，用手振蕩2min，注意放氣。合并兩次環(huán)己烷萃取液10mL于另一個(gè)100mL分液漏斗中，加5mL15％NaOH溶液洗一次，振蕩兩分鐘，棄去NaOH液層。再用蒸餾水洗2—3次，每次15mL，直至洗滌后的蒸餾水pH＝7，棄去水相，將環(huán)己烷萃取液加無(wú)水流酸鈉脫水后，在KD濃縮器上濃縮。以下步驟包括乙�；癁V紙層析分離，熒光分光光度計(jì)測(cè)量，計(jì)算與(7)相同。

A2 測(cè)量后的B(a)P丙酮洗脫液切勿隨意丟棄，可放入通風(fēng)柜中專(zhuān)用大燒杯中，統(tǒng)一處理。

A5 本實(shí)驗(yàn)均應(yīng)在避免陽(yáng)光直接照射下進(jìn)行。

A4 所用玻璃器皿必須用洗液浸泡4h以后洗滌。