實(shí)驗(yàn)動(dòng)物等級(jí)及其飼育環(huán)境的技術(shù)指標(biāo)

 

      按照《GB 14925-2001實(shí)驗(yàn)動(dòng)物 環(huán)境及設(shè)施國家標(biāo)準(zhǔn)》規(guī)定，實(shí)驗(yàn)動(dòng)物是指經(jīng)人工飼育，對(duì)其攜帶微生物實(shí)行控制，遺傳背景明確或者來源清楚的用于科學(xué)研究、教學(xué)、生產(chǎn)、檢定以及其他科學(xué)實(shí)驗(yàn)的動(dòng)物。在微生物控制方面，實(shí)驗(yàn)動(dòng)物分為四個(gè)等級(jí)：

      一級(jí) 普通動(dòng)物(conventional animal: CV)

      普通動(dòng)物不攜帶所規(guī)定的人獸共患病病原和動(dòng)物烈性傳染病的病原。

      二級(jí) 清潔動(dòng)物(clean animal: CL)

      清潔動(dòng)物除要求必須不帶有人獸共患病原和烈性傳染病病原及常見傳染病病原之外，還要求排除對(duì)科學(xué)實(shí)驗(yàn)研究干擾大的病原體的動(dòng)物。清潔級(jí)動(dòng)物已是我國目前主要使用的質(zhì)量控制等級(jí)的動(dòng)物，已被廣泛地應(yīng)用于生命科學(xué)研究、新藥研制和安全評(píng)價(jià)等領(lǐng)域的動(dòng)物實(shí)驗(yàn)之中，發(fā)揮了清潔級(jí)動(dòng)物，易于質(zhì)量控制，非實(shí)驗(yàn)因素干擾少，有較好的敏感性和可重復(fù)性的優(yōu)點(diǎn)。

      無特定病原體動(dòng)物是指機(jī)體內(nèi)無特定的微生物和寄生蟲存在的動(dòng)物，但非特定的微生物和寄生蟲是容許存在的。故實(shí)際上是指無傳染病的健康動(dòng)物。這類動(dòng)物是目前國外使用最廣泛的實(shí)驗(yàn)動(dòng)物，它的來源，既可來自無菌動(dòng)物繁育的后裔，亦可經(jīng)剖胎取后，在隔離屏障設(shè)施的環(huán)境中，由SPF親代動(dòng)物撫育。它不帶有對(duì)人或動(dòng)物本身致病的微生物，但不能排除可經(jīng)胎盤屏障垂直傳播的微生物。

      無菌動(dòng)物是指除清潔動(dòng)物應(yīng)排除的病原外，不攜帶主要潛在感染或條件致病和對(duì)科學(xué)實(shí)驗(yàn)干擾大的病原。無菌動(dòng)物是在無菌屏障系統(tǒng)中，剖腹取出胎兒，飼養(yǎng)繁育在無菌隔離器中，飼料、飲水經(jīng)過消毒，定期檢驗(yàn)，證明動(dòng)物體內(nèi)外均無一切微生物和寄生蟲（包括大部分病毒）的動(dòng)物。無菌動(dòng)物的“菌”主要是指細(xì)菌，而嚴(yán)格來說，還包括真菌、立克次氏體、支原體和病毒等微生物及各種寄生蟲。而所謂“無”卻不是絕對(duì)的，不過是根據(jù)現(xiàn)有的科學(xué)知識(shí)和檢查方法在一定時(shí)期內(nèi)不能檢出已知的微生物和寄生蟲而已。隨著科學(xué)技術(shù)的發(fā)展，現(xiàn)在認(rèn)為是無菌的動(dòng)物或許將來可以檢出微生物和寄生蟲而不是無菌動(dòng)物，因?yàn)檫@個(gè)“無”是相對(duì)而言的。到目前為至，尚未確立無菌動(dòng)物的微生物檢定法，因此，研究者的檢定方法各式各樣，其中病毒和立克氏體的檢查尚有相當(dāng)多的問題。例如，在無菌動(dòng)物中供實(shí)驗(yàn)室使用最多的無菌小鼠，用電子顯微鏡檢查證明，胸腺細(xì)胞中仍有存在白血病病毒的例子，因而，現(xiàn)在的所謂無菌動(dòng)物，指動(dòng)物體內(nèi)外未能檢出細(xì)菌、真菌、原蟲、內(nèi)外寄生蟲的動(dòng)物較妥當(dāng)。悉生動(dòng)物也稱已知菌動(dòng)物或已知菌叢動(dòng)物（Anima with Known Bacterial Flora），是指用與無菌動(dòng)物相同的方法取得飼養(yǎng)（剖腹取胎，在隔離器內(nèi)飼養(yǎng)）、但明確的物體內(nèi)所給予的已知微生物的動(dòng)物，即凡含有已知的單菌（Monoxenie）、雙菌（Dixenie）、三菌（Trixenie）或多菌（Polyxenie）的動(dòng)物。由于悉生動(dòng)物和無菌動(dòng)物一樣是放在無菌隔離器內(nèi)飼養(yǎng)的，因此選用此種動(dòng)物作實(shí)驗(yàn)準(zhǔn)確性是很高的，可排除動(dòng)物體內(nèi)帶有的各種不明確的微生物對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果的干擾，常用于研究微生物和宿主動(dòng)物之間的關(guān)系，并可按研究目的來選擇某種微生物。

 

      不同等級(jí)的實(shí)驗(yàn)動(dòng)物需要在不同等級(jí)的環(huán)境和設(shè)施中飼育，實(shí)驗(yàn)動(dòng)物飼育環(huán)境分為三類，即普通環(huán)境、屏障環(huán)境、隔離環(huán)境。每類環(huán)境都有嚴(yán)格的技術(shù)標(biāo)準(zhǔn)，詳見表1和表2。普通環(huán)境：該環(huán)境設(shè)施符合動(dòng)物居住的基本要求，不能完全控制傳染因子，適用于飼育教學(xué)等用途的普通級(jí)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物。屏障環(huán)境：該環(huán)境設(shè)施適用于飼育CL實(shí)驗(yàn)動(dòng)物及SPF實(shí)驗(yàn)動(dòng)物。進(jìn)入屏障的人、動(dòng)物和物品必須經(jīng)過嚴(yán)格的微生物控制。空氣經(jīng)低效、中效、高效過濾器進(jìn)入屏障系統(tǒng)，結(jié)凈度達(dá)到10000級(jí)，利用空調(diào)送風(fēng)系統(tǒng)形成清潔走廊、動(dòng)物房、污染走廊、室外的靜壓差梯度，以防止空氣逆向形成的污染�？諝�、人、動(dòng)物、物品的走向采用單向流通路線。工作人員工作時(shí)要在淋浴后穿著無菌工作服、口罩、帽子以盡量減少和動(dòng)物的直接接觸。 隔離環(huán)境：該環(huán)境設(shè)施采用無菌隔離裝置以保存無菌或無外來污染動(dòng)物。隔離裝置內(nèi)的空氣、飼料、水、墊料和設(shè)備均為無菌，動(dòng)物和物料的動(dòng)態(tài)傳遞須經(jīng)特殊的傳遞系統(tǒng)，該系統(tǒng)既能保證與環(huán)境的絕對(duì)隔離，又能滿足轉(zhuǎn)運(yùn)動(dòng)物時(shí)保持內(nèi)環(huán)境一致。該環(huán)境設(shè)施適用于飼育SPF、悉生（Gnotobiotic）及無菌（germ free）實(shí)驗(yàn)動(dòng)物。工作人員只能通過隔離裝置上的橡膠手套來進(jìn)行飼養(yǎng)或?qū)嶒?yàn)。物品是通過包裝消毒后，由滅菌渡艙或傳遞窗傳入；動(dòng)物是經(jīng)由無菌剖腹產(chǎn)的方法進(jìn)入；進(jìn)入隔離裝置的空氣，應(yīng)經(jīng)高效過濾，保證隔離裝置內(nèi)空氣潔凈度達(dá)100級(jí)，無菌并維持正壓狀態(tài)。根據(jù)實(shí)驗(yàn)需要也可維持負(fù)壓狀態(tài)，但需要配置空氣排放裝置，保證空氣排放符合標(biāo)準(zhǔn)。

項(xiàng) 目		指 標(biāo)
		小鼠、大鼠、豚鼠、地鼠			犬、猴、貓、兔、小型豬			雞
		普通環(huán)境	屏障環(huán)境	隔離環(huán)境	普通環(huán)境	屏障環(huán)境	隔離環(huán)境	屏障環(huán)境
溫度，℃		18～29	20～26		16-28	20-26		16-28
日溫差，℃≤		-	4		-	4		4
相對(duì)溫度，%		40-70
換氣次數(shù)，次/h		8-10	10-201	20-50*	8-10	10-201	20-501	10-202
氣流速度，m/s		0.1-0.2
壓強(qiáng)梯度，Pa		-	20-502	100-150	-	20-502	100-150	20-502
空氣潔凈度，級(jí)		-	10000	100	-	10000	100	10000
菌數(shù)，個(gè)/皿≤		30	3	無檢出	30	3	無檢出	3
氨濃度 mg/m3 ≤		14
噪聲dB ≤		60
照度，lx	工作照度	150-300
	動(dòng)物照度	15-20			100-200			5-10
晝夜明暗交替時(shí)間，h		12/12或10/14
注：表中氨濃度指標(biāo)為動(dòng)態(tài)指標(biāo)。 1一般采用全新風(fēng)，保證動(dòng)物室有足夠的新鮮空氣。如果先期去除了粉塵顆粒物和有毒有害氣體，不排除使用循環(huán)空氣的可能，但再循環(huán)空氣僅限于同一單元，新鮮空氣不得少于50%。并保證供風(fēng)的溫、濕度參數(shù)。 2單走廊設(shè)施必須保證飼育室、實(shí)驗(yàn)室壓強(qiáng)最高。

 

項(xiàng) 目		指 標(biāo)
		小鼠、大鼠、豚鼠、地鼠			犬、猴、貓、兔、小型豬			雞
		普通環(huán)境	屏障環(huán)境	隔離環(huán)境	普通環(huán)境	屏障環(huán)境	隔離環(huán)境	屏障環(huán)境
溫度，℃		19-26	20-25		16-26	18-22		16-26
日溫差，℃ ≤		4	3		4	3		3
相對(duì)濕度，%		40-70
換氣次數(shù)，次/h		8-10	10-201	20-501	8-10	10-201	20-501	20-501
氣流速度，m/s		0.1-0.2
壓強(qiáng)梯度，Pa		-	20-502	100-150	-	20-502	100-1502	100-150
空氣潔凈度，級(jí)		-	10000	100	-	10000	100	100
落下菌數(shù)，個(gè)/皿 ≤		30	3	無檢出	30	3	無檢出	無檢出
氨濃度 mg/m3 ≤		14
噪聲 dB ≤		60
照度，lx	工作照度	150-300
	動(dòng)物照度	15-20			100-200			5-10
晝夜明暗交替時(shí)間，h		12/12或10/14
注：表中氨濃度指標(biāo)為動(dòng)態(tài)指標(biāo)。 1一般采用全新風(fēng)，保證動(dòng)物房有足夠的新鮮空氣。如果先期去除了粉塵顆粒物和有毒有害氣體，不排除使用循環(huán)空氣的可能，但再循環(huán)空氣應(yīng)取自于無污染區(qū)域或同一單元，新鮮空氣不得少于50%，并保證供風(fēng)的溫、濕度參數(shù)。 2單走廊設(shè)施必須保證飼育室、實(shí)驗(yàn)室壓強(qiáng)最高。 3此處動(dòng)物實(shí)驗(yàn)設(shè)備系指動(dòng)物飼養(yǎng)和實(shí)驗(yàn)時(shí)，保障動(dòng)物所處的局部環(huán)境應(yīng)達(dá)到本環(huán)境指標(biāo)的設(shè)備。

 

參考文獻(xiàn)

1、中華人民共和國國家標(biāo)準(zhǔn) GB 14925-2001實(shí)驗(yàn)動(dòng)物 環(huán)境及設(shè)施