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采用UPLC/Xevo G2 QTof對(duì)1μM維拉帕米進(jìn)行快速而靈敏的體外代謝物鑒定

瀏覽次數(shù):2971 發(fā)布日期:2011-5-5  來源:本站 僅供參考,謝絕轉(zhuǎn)載,否則責(zé)任自負(fù)
目的
使用ACQUITY UPLC®/Xevo™ G2 QTof質(zhì)譜系統(tǒng)及MetaboLynx™ XS應(yīng)用管理軟件,鑒定通過人肝微粒體體外孵育而獲取的1 μM維拉帕米的代謝物。
 
背景
近年來,隨著越來越多的一線藥品因存在安全性顧慮而退出市場(chǎng),人們對(duì)藥品研發(fā)過程中的藥物代謝和毒性研究給予了更多的關(guān)注。如今,在藥物發(fā)現(xiàn)和研制階段提早進(jìn)行藥物代謝研究的趨勢(shì)已比較明顯。普遍的做法是對(duì)母體藥物進(jìn)行體外代謝物研究,以便在藥品開發(fā)早期迅速確定其弱點(diǎn)。
 
在藥物發(fā)現(xiàn)階段進(jìn)行代謝物鑒定的一項(xiàng)挑戰(zhàn)是:需要提供快速而通用的方法,并且該方法應(yīng)足夠靈敏,以使體外孵育研究可在低μM濃度水平下進(jìn)行,從而使其更接近于化合物的體內(nèi)作用情況。
 
一項(xiàng)典型的體外代謝研究還包括分析母體藥物的代謝速率和途徑。此類研究的理想分析方案需提供在模擬體內(nèi)條件的底物濃度下對(duì)代謝物進(jìn)行檢測(cè)的分析速度和靈敏度。
 
利用與UPLC/MSE聯(lián)用的Xevo G2 QTof質(zhì)譜系統(tǒng),體外代謝物研究可在低μM水平下進(jìn)行,同時(shí)具有較好的速度、靈敏度和選擇性。


圖1.
人肝微粒體維拉帕米(1μM)的孵育結(jié)果顯示在MetaboLynx瀏覽器中。

解決方案
將濃度為1 μM的維拉帕米與人肝微粒體在37°C下進(jìn)行孵育,并分別在 0、15、30、60、120和 240分鐘時(shí)加入等體積的冷乙腈終止反應(yīng)。對(duì)樣品進(jìn)行離心,并取上清液直接進(jìn)樣。
 
采用沃特世ACQUITY UPLC®系統(tǒng),ACQUITY UPLC HSS T3色譜柱(1.7 μm、2.1 x 100 mm),進(jìn)行色譜分離。流動(dòng)相由0.1%甲酸水溶液(A)和乙腈(B)組成,進(jìn)樣量為5.0 μL。在ESI正離子模式下,使用Xevo G2 QTof質(zhì)譜儀采用UPLC/MSE技術(shù)進(jìn)行數(shù)據(jù)采集,這樣一次進(jìn)樣即可同時(shí)獲取母離子和產(chǎn)物離子的數(shù)據(jù)。
 
MetaboLynx XS應(yīng)用管理軟件用于進(jìn)行數(shù)據(jù)挖掘,結(jié)果顯示在MetaboLynx瀏覽器中(如圖1所示)。產(chǎn)物離子信息同時(shí)進(jìn)行處理,并顯示在MetaboLynx瀏覽器中的碎片分析窗口內(nèi)(圖2)。通過對(duì)多個(gè)孵育時(shí)間點(diǎn)的樣品進(jìn)樣分析,母體藥物的清除曲線和代謝物的形成曲線可在同一次試驗(yàn)中同時(shí)獲。ㄈ鐖D3所示)。


圖2. 碎片分析窗口中所顯示的MS/MS信息。

 
圖3. 維拉帕米的清除曲線(3A)及其代謝物的形成曲線(3B)。
 
通過采用UPLC/MSE 數(shù)據(jù)采集策略,再加上具有化學(xué)智能的MetaboLynx XS數(shù)據(jù)處理工作流程,只需進(jìn)行一次液相色譜進(jìn)樣即可快速完成所有代謝物的鑒定工作。通過在多個(gè)時(shí)間點(diǎn)進(jìn)樣,可比較容易地獲取低濃度(μM)孵育水平下目標(biāo)藥物的代謝速率和途徑。因此,產(chǎn)能最大化的目標(biāo)即可輕松實(shí)現(xiàn)。
 
總結(jié)
這個(gè)應(yīng)用表明:通過使用配備UPLC/MSE 和MetaboLynx XS工作流程的Xevo G2 QTof質(zhì)譜系統(tǒng),體外代謝物研究可在低濃度(μM)水平下進(jìn)行,同時(shí)具有較好的速度、靈敏度和選擇性。
 
Xevo G2 QTof系統(tǒng)及其創(chuàng)新型QuanTof™和Engineered Simplicity™技術(shù),與ACQUITY UPLC系統(tǒng)實(shí)現(xiàn)了完美結(jié)合。它是目前最靈敏的臺(tái)式oaTOF儀器,擁有1 ppm的準(zhǔn)確質(zhì)量測(cè)定能力,數(shù)據(jù)采集速度高達(dá)每秒20張光譜圖。
來源:沃特世科技(上海)有限公司
聯(lián)系電話:800(400)8202676 (免費(fèi)電話支持專線)
E-mail:Jackie_qian@waters.com

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