高效液相色譜儀應用舉例

例1.稠環(huán)芳烴分析(環(huán)境氣體分析)

樣 品：含六苯并苯等8種稠環(huán)芳烴的混合物

色譜儀：“南京科捷LC600”液相色譜儀，配有色譜工作站

檢測器：UV紫外檢測器，340nm

色譜柱：C18鍵合相(ODS-224),5μm，柱長25cm，柱徑4.6mm

流動相：甲醇-二氯甲烷(8:2)混合溶劑

流 速：1mL/min

進 樣：20μL

結 果：所有組分在25min之內全部流出，各組分完全分離，組分出峰順序為：六苯并苯，二苯二萘嵌苯，三苯二萘嵌苯，苯萘并二萘嵌苯，四苯二萘嵌苯，萘六苯并苯，二苯萘并二萘嵌苯，苯菲并五苯。

例2.磺胺分析(藥物分析)

樣 品：磺胺、磺胺嘧啶、磺胺甲基異噁唑和甲氧芐氨嘧啶的混合物

色譜儀：“南京科捷LC600”液相色譜儀，740色譜數(shù)據(jù)處理機

檢測器：UV 481型紫外檢測器，波長240nm

色譜柱：μ-Bondapak C18 , 5μm，柱長25 cm，柱徑4.6 mm

流動相：由KH2PO4(0.05mol/L)和Na2HPO4(0.05 mol/L)以及MeOH所組成，其用量比例為200:10:165，

流 速：1mL/min

進 樣：10μL

結 果：所有組分在6min之內全部流出，各組分完全分離，組分出峰順序為：磺胺保留時間為2.60 min, 磺胺嘧啶保留時間為3.18 min、磺胺甲基異噁唑保留時間為4.33 min,甲氧芐氨嘧啶保留時間為5.19min。

例3.銀杏內酯分析(藥物分析)

樣 品：含銀杏苦內酯等4種物質的混合物

色譜儀：“南京科捷LC600”液相色譜儀

配有570自動進樣器，Rheadyane 77251進樣閥，HP化學工作站

檢測器：500型ELSD Alltech 蒸發(fā)光散射檢測器

漂移管溫度為91℃，氮氣流速為2.75L/min

色譜柱：Platinum OPS，5μm，柱長25cm，柱徑4.6mm

流動相：水:甲醇:四氫呋喃 = 75:20:10

流 速：1mL/min

進 樣：10μL

結 果：所有組分在15min之內全部流出，各組分完全分離，組分流出順序為：峰1為銀杏苦內酯C, 峰2為白果內酯, 峰3銀杏苦內酯A, 峰4為銀杏苦內酯B。

例4.脂肪酸甲酯分析(藥物分析)

樣 品：含5種脂肪酸甲酯的混合物

色譜儀：“南京科捷LC600”液相色譜儀，配有色譜工作站

檢測器：500型ELSD Alltech 蒸發(fā)光散射檢測器

漂移管溫度為45℃，氮氣流速為1.5L/min

色譜柱：Silver Impregnated Ion-Exchange ,柱長25cm，柱徑4.6mm

流動相：乙腈:甲醇 = 2:98

流 速：0.75mL/min

進 樣：10μL

結 果：所有組分在10min之內全部流出，各組分完全分離，組分流出順序為：峰1為C18：0脂肪酸甲酯，峰為C18：1脂肪酸甲酯，峰3為C18：2脂肪酸甲酯，峰4為C18：3脂肪酸甲酯，峰1為C20：4脂肪酸甲酯。

例5.茶堿分析(茶葉)

樣 品：含茶堿等三種物質的混合物

色譜儀：“南京科捷LC600”液相色譜儀，配有色譜工作站

檢測器：UV紫外檢測器，280nm

色譜柱：Micro μBondapak C18 ，8μm，柱長25 cm，柱徑4.6 mm

流動相：二甲基二酰胺:甲醇:醋酸:水 = 23.5:1:0.5:75(v/v)

流 速：1mL/min

進 樣：10μL

結 果：所有組分8min之內全部流出，各組分完全分離，組分流出順序為：峰1為可可堿，峰2為茶堿，峰3為咖啡堿。

例6.脂肪酸直接分析

樣 品：未經衍生處理的亞麻酸等6組分的混合物

色譜儀：“南京科捷LC600”液相色譜儀，四元梯度泵，色譜工作站

檢測器：500型ELSD Alltech 蒸發(fā)光散射檢測器

漂移管溫度為65℃，氮氣流速為2.0L/min

色譜柱：AlltimaTM C18 ，5μm，柱長25cm，柱徑2.1mm

流動相：A為水，B為乙腈

梯 度 時間 0min 10min 15min 20min

A 13% 20% 20% 5%

B 77% 80% 80% 95%

流 速：0.4mL/min

進 樣：20μL

結 果：所有組分20min之內全部流出，各組分完全分離，組分流出順序為：峰1為亞麻酸，峰2為肉豆蔻酸，峰3為亞油酸，峰4為棕櫚酸，峰5為油酸，峰6為硬脂酸。

例7：氨基酸衍生物分析(食品分析)

樣 品：22種氨基酸的苯基乙酰硫脲混合物

色譜儀：“南京科捷LC600”液相色譜儀，梯度洗脫裝置，色譜工作站

檢測器：UV紫外檢測器，波長254nm

色譜柱：柱長25cm，柱徑0.46cm Zorbax ODS柱(Dupont)

流動相：A液為0.01mol/L的NaAc, pH =4.5

B液為CH3CN

梯 度：0min～6min B/A = 24/76～42/58(v/v)

6min～14min B/A = 42/58(v/v)

14min～20min B/A = 24/76(v/v)

流 速：1mL/min

進 樣：自動進樣器進樣10μL

結 果：所有組分在20min之內全部流出，各組分完全分離，組分出峰順序為：峰1為ASP，峰2為GLU，峰3為ASN，峰4為SER，峰5為GLN，峰6為THR，峰7為GLY，峰8為MET·SO2 ,峰9為HYP, 峰10為ALA，峰11為TYR，峰12為HIS，峰13為CYS(CH2)，峰14為VAL，峰15為MET，峰16為PRO，峰17為TRP，峰18為LYS，峰19為PHE，峰20為ILE，峰21為LEU，峰22為ARG。

例8.氨基酸直接分析

樣 品：12種未衍生氨基酸混合物溶液(1mMol/L)

色譜儀：“南京科捷LC600”液相色譜儀，四元梯度泵

配有二極管陣列檢測器、蒸發(fā)光散射檢測器和化學工作站

檢測器：500型ELSD蒸發(fā)光散射檢測器

漂移管溫度為95℃，氮氣流速2.5L/min

色譜柱：Alltima C18 , 5μm，柱長25cm，柱徑4.6mm

流動相：A為含0.1% TFA的水

B為含0.1% TFA的乙腈

梯 度: 時間 0min 5min 20min

A液 100% 100% 60%

B液 0% 0% 40%

流 速：0.6mL/min

進 樣：20μL

結 果：所有組分在25min之內全部流出，各組分完全分離，組分流出順序為：峰1為絲氨酸，峰2為賴氨酸，峰3為谷氨酸，峰4為精氨酸，峰5為脯氨酸，峰6為纈氨酸，峰7為甲硫氨酸，峰8為酪氨酸，峰9為異亮氨酸，峰10為亮氨酸，峰11為苯丙氨酸，峰12為組氨酸。

例9.糖類分析(食品分析)

樣 品：含果糖等6種糖類物質的混合物

色譜儀：“南京科捷LC600”液相色譜儀，四元梯度泵，色譜工作站

檢測器：Mark ⅡA型ELSD Alltech 蒸發(fā)光散射檢測器

漂移管溫度為100℃，氮氣流速為2.2L/min。

色譜柱：Absorbosphere, NH2 ，柱長25cm，柱徑4.6mm

流動相：A為乙腈，B為水

梯 度：時間 0min 20min

A 85% 75%

B 15% 25%

流 速：1.5mL/min

進 樣：20μL

結 果：所有組分在24min之內全部流出，各組分完全分離，組分流出順序依次為：峰1為果糖，峰2為葡萄糖，峰3為蔗糖，峰4為麥芽糖，峰5為乳糖，峰6為棉籽糖。

例10.嘌呤分析(藥物分析)

樣 品：取1mL血漿加入200μL的1.98mol/L的高氯酸(GR)，再加入600μL蒸餾水和200μL的1.47mol/L的別嘌呤醇(內標)，用旋轉混合器振搖10s于1200g離心10min，取上層清液備分析用。

色譜儀：“南京科捷LC600”液相色譜儀，配有色譜工作站

檢測器：UV紫外檢測器，254nm

色譜柱：μBondapsk C18 ，10μm，柱長30cm，柱徑3.9mm

流動相：0.02mol/L的磷酸二氫鉀，pH = 2.2

流 速：2.0mL/min

進 樣：10μL

結 果：所有組分在12min之內全部流出，各組分分離完全，保留時間依次為：尿嘌呤為3.18min(峰1)，腺嘌呤為3.21 min(峰2)，次黃嘌呤為3.90 min(峰3)，5-羥基吡嗪酸為4.75min(峰4)，5-羥基吡嗪胺為5.31 min(峰5)，黃嘌呤為5.90 min(峰6)，吡嗪酸為7.35min(峰7)，內標別嘌呤醇為8.53min(峰8)，吡嗪胺為9.57min(峰9)。

例11.植物甾醇分析(生物制藥)

樣 品：含β-谷甾醇、豆甾醇、菜油甾醇、菜籽甾醇和膽固醇的混合物

色譜儀：“南京科捷LC600”液相色譜儀，配有色譜工作站

檢測器：Alltech 2000型 ELSD蒸發(fā)光散射檢測器

漂移管溫度為70℃，氮氣流速1.6L/min

色譜柱：Supecol Discouery C18 , 5μm，柱長25cm ，柱徑4.6mm

流動相：甲醇

流 速：1mL/min

進 樣：10μL

結 果：所有組分在19min之內全部流出，各組分完全分離，組分流出順序為：峰1為菜籽甾醇保留時間13.70min，峰2為膽固醇保留時間14.62 min，峰3為豆甾醇保留時間15.45min，峰4為菜油甾醇保留時間15.97min，峰5為β-谷甾醇保留時間17.05min。

例12.甾族化合物分析

樣 品：含孕酮等4種物質的混合物

色譜儀：“南京科捷LC600”液相色譜儀，四元梯度泵，色譜工作站

檢測器：Mark ⅡA型ELSD Alltech 蒸發(fā)光散射檢測器

漂移管溫度為135℃，氮氣流速為1.2L/min。

色譜柱：Hyperil C18 ,5μm，柱長25cm，柱徑4.6mm

流動相：甲醇:水 = 70:30

流 速：1.2mL/min

進 樣：20μL

結 果：所有組分在12min之內全部流出，各組分完全分離，組分流出順序為：峰1為氫化可的松，峰2 為強的松，峰3為睪酮，峰4為孕酮。

例13.皮質醇分析

樣 品：含皮質醇等5種物質的混合物

色譜儀：“南京科捷LC600”液相色譜儀，配有色譜工作站

檢測器：熒光檢測器，流動池30μL

激發(fā)波長370nm ,檢測波長480nm，狹縫均為20nm

色譜柱：Finepak C18 ，10μm，柱長25cm，柱徑4.6mm

流動相：甲醇:水 = 50:100(v/v)

流 速：0.8 mL/min

進 樣：20μL

結 果：所有組分70min之內全部流出，各組分完全分離，組分流出順序為：峰1為皮質醇保留時間15.8min，峰2為β-Methasone保留時間20.0min，峰3為四氫皮質酮保留時間22.5min，峰4為四反皮質醇保留時間32.5 min，峰5為四氫-11-脫氧皮質醇保留時間65.8min。

例14.膽固醇分析

樣 品：含膽固醇等6組分的混合物

色譜儀：“南京科捷LC600”液相色譜儀，配有色譜工作站

檢測器：ELSD美國Alltech MKⅢ蒸發(fā)激光散射檢測器

漂移管溫度為65℃，氮氣流速為2.0L/min。

色譜柱：Allsphere Silica ，3μm，柱長10cm，柱徑4.6mm

流動相：A為離子對試劑，B為正己烷，C為水

梯 度：時間 0min 7min 15min

A 58% 52% 52%

B 40% 40% 40%

C 2% 8% 8%

流 速：1.25mL/min

進 樣：20μL

結 果：所有組分在13min之內全部流出，各組分完全分離，組分流出順序為：峰1為膽固醇，峰2為棕櫚酸，峰3為磷脂酰乙醇胺，峰4為磷脂酰絲氨酸，峰5為磷脂酰膽堿，峰6為神經鞘磷脂。

例15.磷脂分析(生物)

樣 品：含磷脂酰肌醇等4種物質混合物

色譜儀：“南京科捷LC600”液相色譜儀，四元梯度泵，色譜工作站

檢測器：500型ELSD Alltech 蒸發(fā)光散射檢測器

漂移管溫度為120℃，氮氣流速為2.7L/min。

色譜柱：Rosil NH2 ，5μm，柱長15cm，柱徑4.6mm

流動相：A為無水乙醇，B為0.2mol/L的草酸溶液

梯 度：時間 0min 15min 30min 30.1min 35.1min

A 95% 85% 85% 95% 95%

B 5% 15% 15% 5% 5%

流 速：1.5mL/min

進 樣：10μL

結 果：所有組分在35min之內全部流出，各組分完全分離，組分流出順序為：峰1為磷脂酰乙醇胺, 峰2為磷脂酰絲氨酸, 峰3為磷脂酰膽堿, 峰4為磷脂酰肌醇。

例16.多肽分析(生物)

樣 品：含G-Y等3種多肽物質的混合物

色譜儀：“南京科捷LC600”液相色譜儀，配有色譜工作站

檢測器：ELSD美國Alltech MKⅢ蒸發(fā)激光散射檢測器

漂移管溫度為110℃，氮氣流速為2.19L/min

色譜柱：AlltimaTM C18 ，5μm，柱長25cm，柱徑4.6mm

流動相：0.05%TFA水溶液:乙腈 = 65:35

流 速：0.6mL/min

進 樣：20μL

結 果：所有組分在5min之內全部流出，各組分完全分離，組分流出順序為：峰1為G-Y，峰2為G-L-Y，峰3為K-D。

例17.維生素分析(食品分析)

樣 品：含維生素A等5種物質的混合物

色譜儀：“南京科捷LC600”液相色譜儀，配有工作站

檢測器：500型ELSD Alltech 蒸發(fā)光散射檢測器

漂移管溫度為70℃，氮氣流速為2.0L/min

色譜柱：Adsorbosphere C18 ，5μm，柱長25cm，柱徑4.6mm

流動相：甲醇:乙醇 = 97:3

流 速：1mL/min

進 樣：20μL

結 果：所有組分在21 min之內全部流出，各組分完全分離，組分流出順序為：峰1為維生素A，峰2為維生素D2，峰3為維生素D3，峰4為維生素E，峰5為維生素K1 。

例18.抗菌素分析(藥物)

樣 品：含有紅霉素等5種抗菌素的混合物

色譜儀：“南京科捷LC600”液相色譜儀

配有570自動進樣器，Rheadyane 77251進樣閥，HP化學工作站

檢測器：2000型ELSD Alltech 蒸發(fā)光散射檢測器

漂移管溫度為95℃，氮氣流速為2.0L/min

色譜柱：AlltimaTM C18 ,5μm，柱長15cm，柱徑4.6mm

流動相：A為0.2% 五氟丙酸, B為甲醇

梯 度：時間 0min 5min

A/B 55%/45% 35%/65%

流 速：1mL/ min

進 樣：10μL

結 果：所有組分在6min之內全部流出，各組分完全分離，組分流出順序為：峰1為紅霉素，峰2為鏈霉素，峰3為托布霉素，峰4為阿米卡星，峰5為新霉素。

例19.無活菌素分析(生物制藥)

樣 品：含無活菌素等5種物質的混合物

色譜儀：“南京科捷LC600”液相色譜儀

配有570自動進樣器，Rheadyane 77251進樣閥，HP化學工作站

檢測器：2000型ELSD Alltech 蒸發(fā)光散射檢測器

漂移管溫度為96℃，氮氣流速為2.9L/min

色譜柱：AlltimaTM C18 ,5μm，柱長25cm，柱徑4.6mm

流動相：THF:水 = 60:40

流 速：1mL/min

進 樣：20μL

結 果：所有組分在20min之內全部流出，各組分完全分離，組分流出順序為：峰1為無活菌素，峰2為單活菌素，峰3為二活菌素，峰4為三活菌素，峰5為四活菌素。

例20.非離子型去垢劑分析(化學化工)

樣 品：3種非離子型去垢劑物質的混合物

色譜儀：“南京科捷LC600”液相色譜儀，配有色譜工作站

檢測器：2000型ELSD Alltech 蒸發(fā)光散射檢測器

漂移管溫度為65℃，氮氣流速為1.9L/min

色譜柱：Alltech EconosphereTM C18 ,5μm，柱長15cm，柱徑4.6mm

流動相：甲醇:水 = 90:10

流 速：0.8mL/min

進 樣：20μL

結 果：所有組分在5 min之內全部流出，各組分完全分離，組分流出順序為：峰1為n-葵基-β-D-吡喃葡萄糖甙，峰2為n-十二烷基-β-D-吡喃葡萄糖甙，峰3為n-辛葵基-β-D-吡喃葡萄糖甙。