光譜移液器與光纖分光光度計(jì)用于DNA/RNA定量檢測(cè)

在紫外光及可見光光源下，用光譜移液器（WPI-SPT-2）在光纖分光光度計(jì)（TIDAS-1）中測(cè)量溶液中DNA的濃度（31µg/mL和144µg/mL）。由于只有1厘米光程，借助光譜移液器的使用不需要在此濃度范圍內(nèi)進(jìn)行測(cè)量前的稀釋，因此可以消除潛在的誤差。由于光譜移液器設(shè)計(jì)小巧，可以在標(biāo)準(zhǔn)的200µL的PCR小管內(nèi)對(duì)10µL的樣本進(jìn)行常規(guī)檢測(cè)，甚至如果在PCR小管中對(duì)電極的尖端位置足夠小心，像5µL 這樣小的樣本都可以重復(fù)測(cè)量。

 

DNA的標(biāo)準(zhǔn)溶液（Sigma D1626）通過(guò)重力方法應(yīng)用18.2MΩ/cm超純水作為溶劑來(lái)制備，標(biāo)準(zhǔn)溶液的濃度在0.0µg/mL和143.9µg/mL 之間。應(yīng)用光譜移液器對(duì)一式三份溶液進(jìn)行測(cè)量，并將光譜移液器連接到裝配紫外及可見光光源的光纖分光光度計(jì)上。數(shù)據(jù)在儀器全波段范圍內(nèi)（190nm-720nm）每增加1nm收集一次，儀器必須對(duì)產(chǎn)生總量80%吸光度的溶液進(jìn)行測(cè)量，所有測(cè)量使用18.2 MΩ/cm超純水作為參考溶液。

結(jié)果

 

實(shí)驗(yàn)結(jié)果如下表

DNA [µg/mL]	260 nm吸光度 [AU]
0.00	-0.0061 ± 0.0001
30.83	0.5745 ± 0.0011
56.59	1.0309 ± 0.0020
85.49	1.4497 ± 0.0016
115.66	1.7170± 0.0025
143.94	1.8280 ± 0.0006