真假魚翅分析解決方案—RephiLe

2013年1月8日，CCTV央視新聞播出了記者臥底暗訪假魚翅真相的報(bào)道，其中曝光了不少飯店所售魚翅實(shí)為明膠制作的“贗品”，這些所謂的魚翅不過是用“魚翅精”調(diào)制而成的。

 

魚翅作為中國傳統(tǒng)的名貴食材之一，廣泛為東亞各國所接收。魚翅以鯊魚的鰭制成，有機(jī)成分主要有多種蛋白如軟骨粘蛋白、膠原和軟骨硬蛋白等。魚翅軟骨含膠原較多，干品含蛋白質(zhì)高達(dá)83.5%，但缺少色氨酸，屬不完全蛋白質(zhì)。烹調(diào)中魚翅必須要加配料以賦味，一般禽畜肉和蝦、蟹等，都含有較多色氨酸，與魚翅相配既賦予鮮美之味，又可彌補(bǔ)缺少色氨酸的缺憾。

 

魚翅價(jià)格不菲，一些黑心商戶，盯著其中高額的利潤空間，打起了黑算盤，以至于饕餮盛宴中彰顯尊貴的魚翅也中槍了。調(diào)查指出，目前國內(nèi)市場(chǎng)上人工合成的魚翅主要是用明膠、海藻酸鈉，及少許氯化鈣合成，其營養(yǎng)價(jià)值為零。不少假魚翅還人工添加有硫酸軟骨素，以混淆食用時(shí)的口感，讓人難辨真?zhèn)�。為�?yàn)證真假魚翅的味覺差異，浙江省消保委與杭城某酒店共同完成了一次魚翅消費(fèi)實(shí)驗(yàn)。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，添加高湯以后，人工合成魚翅和真魚翅不僅沒有多少味覺差異，形狀也難以辨識(shí)。

 

其實(shí)，真假魚翅是可以區(qū)分的，最權(quán)威的方法就是檢測(cè)魚翅中的鯊魚源DNA。 RephiLe 的技術(shù)人員查找了相關(guān)文獻(xiàn)，整理出魚翅鯊魚源DNA檢測(cè)方法，供相關(guān)人員參考。方法如下：

1.    樣品DNA提取

將0.1g魚翅研磨成粉，使用動(dòng)物基因組DNA提取試劑盒提取樣品DNA，用核酸含量測(cè)定儀測(cè)定DNA濃度，-20℃保存。

2.    PCR擴(kuò)增

采用巢式PCR反應(yīng)。

第一輪PCR：

1×PCR buffer，Mg²⁺，2.5mmol/L； taq酶，1U；dNTPs，200μmol/L；引物（5’-TCTGCCCTATCAACTTTCGATGGTA-3’與5’-AATTTGCGCGCCTGCTGCCTTCCTT-3’），100nmol/L；DNA模版，50-100ng；反應(yīng)體系 25μL。

反應(yīng)條件：94℃變性3min；94℃ 20s，54℃ 40s，72℃ 40s，40個(gè)循環(huán)。

第二輪PCR：

12.5μL SYBR Green Pre Mix，1μL引物1（5’-CACCTTTAGGCAAACCAGCAC-3’）(5μM)，1μL引物2（5’-GGGCCAGGGTCGAATCTCT -3’） (5μM)，8.5μL無菌超純水，2μL DNA模版，反應(yīng)體系 25μL。

反應(yīng)條件：95℃變性10min；95℃ 30s，64℃ 40s，72℃ 45s，35個(gè)循環(huán)。95℃ 15s，64℃ 30s，99℃，15s。

3.    PCR結(jié)果檢測(cè)

將PCR產(chǎn)物通過瓊脂糖凝膠電泳檢測(cè)，真正的魚翅的產(chǎn)物會(huì)出現(xiàn)在180 bp的位置。

圖1 鯊魚DNA特異性檢測(cè)電泳圖

注：M為DL2000,1為陽性對(duì)照，2為陰性對(duì)照，3為魚翅樣品，4為空白對(duì)照

該P(yáng)CR方法同樣適用于Realtime PCR，可以更好地確定鯊魚源DNA的含量。

4.    結(jié)果分析

如果180 bp處未出現(xiàn)相應(yīng)條帶，則視為陰性結(jié)果，即魚翅中不含鯊魚源DNA。

為了防止或假陰性結(jié)果的出現(xiàn)，我們特別地在樣本中加入對(duì)照。如果依然出現(xiàn)陰性結(jié)果，建議重新進(jìn)行樣本的DNA提取及PCR擴(kuò)增。

 

特別指出，生命科學(xué)實(shí)驗(yàn)中有多處需要使用純水。在核酸提取過程中需要使用去除熱原的無菌超純水，防止核酸酶降解核酸以及微生物的代謝物產(chǎn)生污染。實(shí)驗(yàn)室二級(jí)純水可以很好地滿足緩沖液的要求。同時(shí)，PCR對(duì)于水的要求非常嚴(yán)格，水中的金屬離子如Fe、Cd、Zn會(huì)干擾酶，有機(jī)分子會(huì)與DNA締合或與Mg²⁺絡(luò)合影響反應(yīng)，細(xì)菌及熱原的影響也要避免。電泳用水最重要的要求是生物活性物質(zhì)諸如內(nèi)毒素(通常小于0.005 IU/ml)、核糖核酸酶和蛋白酶（不可測(cè)定）的去除；最好用電阻率18.2 MΩ·cm，TOC 小于 10 ppb，超濾以及細(xì)菌含量低于1 CFU/ml的超純水作為供水。

 

RephiLe為用戶特別推薦Direct-Pure EDI + PURIST UV組合型純水處理系統(tǒng)，可以同時(shí)提供二級(jí)純水及超純水，全方位滿足生命科學(xué)實(shí)驗(yàn)室用水需求。Direct-Pure EDI二級(jí)純水系統(tǒng)選用Siemens公司的EDI，以自來水為進(jìn)水，提供穩(wěn)定優(yōu)質(zhì)的高純水，產(chǎn)品達(dá)到同類產(chǎn)品先進(jìn)水平。設(shè)計(jì)簡潔的PURIST系列超純水系統(tǒng)以純水為進(jìn)水，生產(chǎn)超純水，水質(zhì)超過或達(dá)到GB以及ASTM、CAP、CLSI的一級(jí)水標(biāo)準(zhǔn)。終端配置超濾器，可以控制細(xì)菌 < 0.1 cfu/ml，熱原 < 0.001 Eu/ml，滿足生命科學(xué)的特別要求。該組合套裝，可以保證用戶在使用中用水無憂，讓用戶在使用高品質(zhì)產(chǎn)品的同時(shí)，享受到專業(yè)周到的服務(wù)。另外，RephiLe還可提供Direct-Pure UP超純水加RO水一體機(jī)，該純水儀以自來水為進(jìn)水，同時(shí)制備反滲透RO水和高品質(zhì)的超純水，一機(jī)兩水，以供不同需求客戶的選擇。

 

魚翅在中國飲食文化里代表奢華，用魚翅款待客人象征正身份和地位，殊不知，由于鯊魚的體形大，處于食物鏈的頂端，重金屬元素──水銀會(huì)在其體內(nèi)富集。野生救援發(fā)布的調(diào)查報(bào)告就顯示，在鯊魚魚翅湯內(nèi)含有高濃度的水銀，魚翅被水銀污染的程度高達(dá)70%，含有可被人體吸收的水銀比率觸目驚心, 已超出正常允許含量的42倍！ 由于人類的過度捕撈，科學(xué)家指出，至少有17%的已知鯊魚物種瀕臨滅絕。為了我們自身的安全，也為了保護(hù)野生海洋動(dòng)物，維護(hù)海洋食物鏈的完整性，Rephile 提醒廣大用戶積極響應(yīng)環(huán)保組織提出的拒食魚翅的號(hào)召，為保護(hù)環(huán)境做出自己的一份貢獻(xiàn)！

 

沒有買賣就沒有殺戮！

　

RephiLe　祝廣大用戶用水無憂！健康無憂！　

更多純化，分析產(chǎn)品，請(qǐng)查詢RephiLe　官方網(wǎng)站：www. rephile. com