采用基于2D技術(shù)的ACQUITY UPLC系統(tǒng)結(jié)合平行柱再生技術(shù)提高樣品分析通量

Dan Root 和 Pete Claise

目標(biāo)
利用基于2D技術(shù)的ACQUITY UPLC^®系統(tǒng)并結(jié)合平行柱再生技術(shù)來提高樣品分析通量。

背景
典型的梯度LC分析包括以下常規(guī)步驟：
■ 取樣和進樣
■ 梯度分離
■ 再生(沖洗色譜柱)
■ 重新平衡(使色譜柱返回初始條件)

這些依次進行的操作將樣品和梯度通過特定容量的系統(tǒng)和色譜柱。執(zhí)行這些步驟所需的時間與分析所設(shè)置的流速有關(guān)。通過增加流速、使用較短的色譜柱(減小體積)和縮短重新平衡時間都能夠最大程度減少總分析時間。但是，這些參數(shù)的可調(diào)整范圍有限，尤其是后兩項參數(shù)，當(dāng)其到達一定程度時可能會影響色譜性能。平行柱再生為縮短總分析時間提供了另外一種途徑

實驗室始終面臨著在更短的時間內(nèi)分析更多樣品的挑戰(zhàn)，如今終于有一款工具可以實現(xiàn)在確保高質(zhì)量色譜結(jié)果的同時輕松提高樣品通量的目標(biāo)—基于2D技術(shù)的ACQUITY UPLC系統(tǒng)。

在平行柱再生技術(shù)中，樣品分析在兩根具有相同流路的相同色譜柱之間交替進行。在一根色譜柱上將樣品進樣、分離和再生，與此同時，將另一根色譜柱進行重新平衡，從而實現(xiàn)在給定的時間內(nèi)分析更多樣品。該方法在時間方面的優(yōu)勢如圖1所示。

解決方案
基于2D技術(shù)的AQUITY UPLC系統(tǒng)由兩個二元溶劑管理器(BSM)組成，一個是采用流通針式設(shè)計的樣品管理器，另一個則是配備兩個六通二位閥的色譜柱管理器。當(dāng)配置平行柱再生時，兩個泵的BSM必須相同。此配置的管路連接示意圖見圖2。在該配置中，α泵運行分析梯度，而β泵對色譜柱進行再生。

利用標(biāo)準(zhǔn)模式的UPLC對血漿中苯二氮卓類藥物阿普唑侖的UPLC生物分析方法進行分析，并與基于2D技術(shù)的ACQUITY UPLC系統(tǒng)的平行柱再生模式相比較。優(yōu)化分離條件，以便在盡可能短的運行時間內(nèi)有效地消除目標(biāo)分析物中與血漿蛋白沉淀相關(guān)的基質(zhì)效應(yīng)。實驗中采用了相同批號的相同色譜柱，MRM結(jié)果表明在各種條件下所得的色譜結(jié)果相似，如圖3a所示。

在無需對儀器方法作出任何調(diào)整的情況下，標(biāo)準(zhǔn)模式運行所需的5.5 min進樣間循環(huán)時間輕松縮短為4.1 min。外推到24 h進行對比，在平行柱模式下使用本方法時增加了30%的樣品分析量，如圖3b所示。該方法中實際增加的通量是方法平衡時間與下次樣品進樣和分析發(fā)生重疊的結(jié)果。但是，節(jié)省的時間量將取決于分析方法中可能的重疊程度。

總結(jié)
基于2D技術(shù)的ACQUITY UPLC系統(tǒng)結(jié)合平行柱再生技術(shù)為增加樣品通量提供了一種簡單的工具，同時還可確保高質(zhì)量的色譜結(jié)果。利用這種方式，無需對分析方法的色譜參數(shù)作任何更改，即可實現(xiàn)性能的改善。基于2D技術(shù)的ACQUITY UPLC系統(tǒng)可通過靈活的配置滿足廣泛的應(yīng)用需求，以應(yīng)對科學(xué)及商業(yè)領(lǐng)域的各種挑戰(zhàn)。