Leica全自動染色封片工作站的使用體會
隨著病理學(xué)技術(shù)的迅速發(fā)展，全自動染色封片一體化工作站以其卓越的性能和良好的處理效果，特別是其穩(wěn)定、高效的染色過程，逐漸被各大醫(yī)院和相關(guān)實驗室接受并使用，并逐步替代目前的人工染色。自將工作站應(yīng)用于常規(guī)HE染色以來，經(jīng)過近10萬例的實際應(yīng)用，切片染色效率明顯提高，染色效果穩(wěn)定，染色質(zhì)量顯著改觀 。
1 材料與方法
1.1 儀器設(shè)備
德國Leica全自動染色封片工作站，包括全自動染色機（ST5020）、封片機（CV5030）、染色架8個（每個染色架可裝30張玻片）。
1.2 試劑
二甲苯，無水乙醇，95%乙醇，80%乙醇，75%乙醇，Harris蘇木素，0.5%水溶性伊紅，1%鹽酸乙醇，1%氨水，苯酚二甲苯混合液，中性樹膠。
1.3 處理過程
各種組織經(jīng)固定、脫水、透明、石蠟包埋后制成3μm切片，按病理編號依次插入染色架，70℃烤箱烤片10 min左右，即可上機染色，具體染色步驟見表1。染色完成后，染色架由機械臂自動轉(zhuǎn)入封片機中，使用國產(chǎn)玻璃蓋玻片（24 mm×50 mm），中性快干膠封片。
2 結(jié)果
石蠟切片HE染色均勻、色彩鮮艷，紅藍分明，胞質(zhì)、胞核結(jié)構(gòu)對比清晰；無氣泡、無溢膠現(xiàn)象。
3 討論
傳統(tǒng)手工染色操作繁瑣，勞動強度大，溫度、時間、試劑、環(huán)境、個體差異等因素皆可影響染色效果，不適合大批量標(biāo)本的染色處理。而全自動組織切片染色機因其獨特的以人為本的智能化設(shè)計理念、周到而完善的處理程序，不但極大地保證了切片染色質(zhì)量的高效性、穩(wěn)定性，還可以減輕工作強度和改善工作環(huán)境。
1 材料與方法
1.1 儀器設(shè)備
德國Leica全自動染色封片工作站，包括全自動染色機（ST5020）、封片機（CV5030）、染色架8個（每個染色架可裝30張玻片）。
1.2 試劑
二甲苯，無水乙醇，95%乙醇，80%乙醇，75%乙醇，Harris蘇木素，0.5%水溶性伊紅，1%鹽酸乙醇，1%氨水，苯酚二甲苯混合液，中性樹膠。
1.3 處理過程
各種組織經(jīng)固定、脫水、透明、石蠟包埋后制成3μm切片，按病理編號依次插入染色架，70℃烤箱烤片10 min左右，即可上機染色，具體染色步驟見表1。染色完成后，染色架由機械臂自動轉(zhuǎn)入封片機中，使用國產(chǎn)玻璃蓋玻片（24 mm×50 mm），中性快干膠封片。
2 結(jié)果
石蠟切片HE染色均勻、色彩鮮艷，紅藍分明，胞質(zhì)、胞核結(jié)構(gòu)對比清晰；無氣泡、無溢膠現(xiàn)象。
3 討論
傳統(tǒng)手工染色操作繁瑣，勞動強度大，溫度、時間、試劑、環(huán)境、個體差異等因素皆可影響染色效果，不適合大批量標(biāo)本的染色處理。而全自動組織切片染色機因其獨特的以人為本的智能化設(shè)計理念、周到而完善的處理程序，不但極大地保證了切片染色質(zhì)量的高效性、穩(wěn)定性，還可以減輕工作強度和改善工作環(huán)境。
3.1 優(yōu)點
3.1.1 效率高 可進行批量標(biāo)本的染色，最多12個染色架同時染色，每個染色架裝30張切片，并可同時運行多個程序，尤其適用于標(biāo)本量大的單位。與傳統(tǒng)手工染色相比，染色同時工作人員可進行其他工作（如切片），工作時間統(tǒng)籌化，整體工作效率得以提高。
3.1.2 穩(wěn)定性好 染色封片工作站的各步驟均由單片機控制，時間控制精準(zhǔn)、嚴(yán)密。在程序設(shè)定合理的前提下，染色效果更穩(wěn)定[3]。有報道，室溫低于15℃時染色效果不佳，應(yīng)適當(dāng)提高室溫[2]。我科室日常工作中室溫始終保持在23℃左右，染色效果穩(wěn)定，無明顯差異�？稍O(shè)置數(shù)個精確步驟（如蘇木素、分化），當(dāng)相鄰染色架出現(xiàn)時間沖突時，優(yōu)先確保精確步驟染色。
3.1.3 保障 具有斷電記憶功能，斷電重新啟動后，可以繼續(xù)染色流程，不必從頭重復(fù)染色。可選配UPS電源，在主電源缺乏時持續(xù)供電，保障染色工作繼續(xù)完成。
3.1.4 安全 工作站在相對密閉的空間中進行染色封片，大大減少了有毒揮發(fā)性試劑（尤其是二甲苯）對工作環(huán)境及工作人員的危害。我科室將染色工作站放于通風(fēng)櫥中，更加有利于對環(huán)境和人員的保護。
3.1.5 便于質(zhì)控 自動染色機調(diào)整好各步驟時間，可產(chǎn)生精確而連貫的染色、分化、脫水等過程，與傳統(tǒng)染色相比，受人為因素影響較��；同時可以限定各染色切片的數(shù)量，到達使用期限，機器會自動報警提示，對常規(guī)染色的質(zhì)量控制提供了可靠平臺。
3.2日常使用時的注意事項
3.2.1 染缸的排列 染缸中的液體盡量按照染色步驟依次排列，所有需要沖水的步驟都應(yīng)靠近水缸，并使機械臂行進的路線時間最短化；機械臂前進時有一定的回轉(zhuǎn)，合理設(shè)計避免玻片上的試劑滴入其他染缸造成污染；透明用二甲苯靠近染色機出口位置，便于將玻片快速轉(zhuǎn)入封片機進行封片。
3.2.2 試劑的使用與更換 根據(jù)實際工作情況，我科使用成品Harris蘇木素染液（珠海貝索），染片約2500張；使用0.5%水溶性伊紅，滴加1～2滴冰醋酸促染，染片約2500張；其他脫蠟二甲苯、脫水梯度酒精、透明二甲苯、分化1%鹽酸乙醇及返藍用1%氨水，染片600張左右。保證每缸液體量在最低限度以上，染色時間可根據(jù)具體情況適當(dāng)調(diào)整。
3.2.3 蓋片機使用注意 每日工作前，檢查滴加中性樹膠的管道及噴嘴是否通暢，出膠量是否合適；蓋片機的浴槽中保持一定量的二甲苯，保證封片時玻片的濕潤；添加蓋玻片時最好帶手套操作，防止水汽進入玻片中間，保持蓋玻片的干燥，方便吸取，避免出現(xiàn)重疊、碎片現(xiàn)象；切片全部蓋完后，染色架自動送入右側(cè)滑道，當(dāng)≥2個染色架累積于滑道時，機器出現(xiàn)報警聲，所以應(yīng)及時取出空染色架；每個輸出架能裝30張切片，封片機最多連續(xù)封片60張，染色蓋片完成后，及時將切片取出，保證輸出架有足夠的空槽接收新的玻片。
3.2.4 機器的維護保養(yǎng) 染片機水槽底部有數(shù)個漏孔，為流水沖洗時的進水孔，每天染色結(jié)束后將水排凈，防止生霉，注意定時清洗，避免被水垢、染料等堵塞；染色缸每周更換試劑時及時用紗布擦拭及清洗，各種試劑用專門的染色缸，避免交叉使用，影響染色效果；必要時和廠家服務(wù)人員聯(lián)系進行專業(yè)維護和保養(yǎng)。
綜上所述，全自動染色封片工作站操作簡單方便，染色效率高效果好，改善工作環(huán)境。除應(yīng)用于常規(guī)HE染色外，在部分特殊染色和快速冰凍切片染色中也得到較好應(yīng)用，充分發(fā)揮其優(yōu)勢，更好促進病理技術(shù)的發(fā)展。
3.1.1 效率高 可進行批量標(biāo)本的染色，最多12個染色架同時染色，每個染色架裝30張切片，并可同時運行多個程序，尤其適用于標(biāo)本量大的單位。與傳統(tǒng)手工染色相比，染色同時工作人員可進行其他工作（如切片），工作時間統(tǒng)籌化，整體工作效率得以提高。
3.1.2 穩(wěn)定性好 染色封片工作站的各步驟均由單片機控制，時間控制精準(zhǔn)、嚴(yán)密。在程序設(shè)定合理的前提下，染色效果更穩(wěn)定[3]。有報道，室溫低于15℃時染色效果不佳，應(yīng)適當(dāng)提高室溫[2]。我科室日常工作中室溫始終保持在23℃左右，染色效果穩(wěn)定，無明顯差異�？稍O(shè)置數(shù)個精確步驟（如蘇木素、分化），當(dāng)相鄰染色架出現(xiàn)時間沖突時，優(yōu)先確保精確步驟染色。
3.1.3 保障 具有斷電記憶功能，斷電重新啟動后，可以繼續(xù)染色流程，不必從頭重復(fù)染色。可選配UPS電源，在主電源缺乏時持續(xù)供電，保障染色工作繼續(xù)完成。
3.1.4 安全 工作站在相對密閉的空間中進行染色封片，大大減少了有毒揮發(fā)性試劑（尤其是二甲苯）對工作環(huán)境及工作人員的危害。我科室將染色工作站放于通風(fēng)櫥中，更加有利于對環(huán)境和人員的保護。
3.1.5 便于質(zhì)控 自動染色機調(diào)整好各步驟時間，可產(chǎn)生精確而連貫的染色、分化、脫水等過程，與傳統(tǒng)染色相比，受人為因素影響較��；同時可以限定各染色切片的數(shù)量，到達使用期限，機器會自動報警提示，對常規(guī)染色的質(zhì)量控制提供了可靠平臺。
3.2日常使用時的注意事項
3.2.1 染缸的排列 染缸中的液體盡量按照染色步驟依次排列，所有需要沖水的步驟都應(yīng)靠近水缸，并使機械臂行進的路線時間最短化；機械臂前進時有一定的回轉(zhuǎn)，合理設(shè)計避免玻片上的試劑滴入其他染缸造成污染；透明用二甲苯靠近染色機出口位置，便于將玻片快速轉(zhuǎn)入封片機進行封片。
3.2.2 試劑的使用與更換 根據(jù)實際工作情況，我科使用成品Harris蘇木素染液（珠海貝索），染片約2500張；使用0.5%水溶性伊紅，滴加1～2滴冰醋酸促染，染片約2500張；其他脫蠟二甲苯、脫水梯度酒精、透明二甲苯、分化1%鹽酸乙醇及返藍用1%氨水，染片600張左右。保證每缸液體量在最低限度以上，染色時間可根據(jù)具體情況適當(dāng)調(diào)整。
3.2.3 蓋片機使用注意 每日工作前，檢查滴加中性樹膠的管道及噴嘴是否通暢，出膠量是否合適；蓋片機的浴槽中保持一定量的二甲苯，保證封片時玻片的濕潤；添加蓋玻片時最好帶手套操作，防止水汽進入玻片中間，保持蓋玻片的干燥，方便吸取，避免出現(xiàn)重疊、碎片現(xiàn)象；切片全部蓋完后，染色架自動送入右側(cè)滑道，當(dāng)≥2個染色架累積于滑道時，機器出現(xiàn)報警聲，所以應(yīng)及時取出空染色架；每個輸出架能裝30張切片，封片機最多連續(xù)封片60張，染色蓋片完成后，及時將切片取出，保證輸出架有足夠的空槽接收新的玻片。
3.2.4 機器的維護保養(yǎng) 染片機水槽底部有數(shù)個漏孔，為流水沖洗時的進水孔，每天染色結(jié)束后將水排凈，防止生霉，注意定時清洗，避免被水垢、染料等堵塞；染色缸每周更換試劑時及時用紗布擦拭及清洗，各種試劑用專門的染色缸，避免交叉使用，影響染色效果；必要時和廠家服務(wù)人員聯(lián)系進行專業(yè)維護和保養(yǎng)。
綜上所述，全自動染色封片工作站操作簡單方便，染色效率高效果好，改善工作環(huán)境。除應(yīng)用于常規(guī)HE染色外，在部分特殊染色和快速冰凍切片染色中也得到較好應(yīng)用，充分發(fā)揮其優(yōu)勢，更好促進病理技術(shù)的發(fā)展。
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徠卡染色|組織切片機
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