利用CORTECS 2.7 µm色譜柱進行奧美拉唑的強制降解分析
利用CORTECS 2.7 µm色譜柱進行奧美拉唑的強制降解分析
Kenneth D. Berthelette, Thomas Swann 和 Kenneth J. Fountain
沃特世公司(美國馬薩諸塞州米爾福德)
簡介：
對于藥物化合物生產(chǎn)而言，化學(xué)穩(wěn)定性試驗至關(guān)重要�？诜苿┯葹槿绱恕Ｎ改c道消化會改變活性藥物成分(API)，產(chǎn)生具有潛在危害性的副產(chǎn)物。因此在開發(fā)過程中，能否對這些副產(chǎn)物進行檢測和定性無疑非常重要。要對一種化合物進行定性，必須將所有降解產(chǎn)物與主要化合物分離開來。CORTECS 2.7 µm色譜柱為復(fù)雜樣品的分析提供了優(yōu)異的峰形與分離度。這款色譜柱填充了2.7 µm的實心顆粒填料，能獲得比全多孔色譜柱更高的分離度以及更低的背壓。一般來說，由于150 mm亞3 µm色譜柱會在HPLC系統(tǒng)上產(chǎn)生高反壓，致使其使用受到限制。而CORTECS 2.7 µm色譜柱的低反壓特性使得150 mm色譜柱成功用于HPLC系統(tǒng)，不僅能在系統(tǒng)的壓力限值內(nèi)運行(<5000 psi)，還能實現(xiàn)極高的分離度。本應(yīng)用紀要將以奧美拉唑的強制降解為例，在配有紫外檢測器和質(zhì)譜檢測器的Alliance HPLC系統(tǒng)上使用CORTECSC18+，2.7 µm, 150 mm色譜柱進行分析。
奧美拉唑是一種堿性化合物，通常作為質(zhì)子泵抑制劑，用于胃酸反流和胃灼熱的治療。這種API在低pH環(huán)境下不穩(wěn)定，因此，需要對其成品在酸性條件下強制降解，并定性鑒別在該條件下形成的副產(chǎn)物。對于強制降解樣品之類的復(fù)雜混合物，CORTECS 2.7 µm色譜柱可實現(xiàn)出色的高分離度。利用沃特世ACQUITY QDa質(zhì)譜檢測器能夠通過質(zhì)譜對色譜峰進行快速鑒定。ACQUITY QDa質(zhì)譜檢測器使用簡單，僅需簡單培訓(xùn)，操作人員即可開展高效率的工作，獲得快速可靠的質(zhì)譜數(shù)據(jù)。與傳統(tǒng)的質(zhì)譜儀不同，ACQUITY QDa檢測器不需要定期調(diào)試或校準。這就為經(jīng)驗不足的分析人員提供了極大的易用性。通過使用最新的顆粒技術(shù)與檢測技術(shù)，分析人員能夠快速可靠地分離復(fù)雜混合物并輕松獲取色譜峰的質(zhì)譜數(shù)據(jù)。這將有利于在方法開發(fā)中更快作出決策，從而有效縮短總的開發(fā)周期。
樣品制備：
用研缽將兩片奧美拉唑(20 mg)分別進行研磨，然后轉(zhuǎn)移至兩個100 mL容量瓶中。向其中一個容量瓶(A)中加入25 mL 0.1 N的鹽酸溶液，在室溫下靜置1.5小時。然后向溶液中加入25 mL 0.1 N的NaOH溶液進行中和。向容量瓶中加入甲醇，定容至100 mL。另一組溶液(B)用50:50的甲醇/水溶液稀釋并定容至100 mL。使用0.2 μm的過濾器對兩種溶液進行過濾。取0.66 mL的A溶液與0.34 mL的B溶液，在LCMS認證最大回收樣品瓶(部件號600000749CV)中進行混合，從而完成進樣樣品的制備。
結(jié)果與討論：
將樣品注入配有2998 PDA檢測器和ACQUITY QDa質(zhì)譜檢測器的Alliancee2695 HPLC系統(tǒng)中。在文獻記錄和美國藥典標準品參考文獻中查到，奧美拉唑至少有八種已知降解化合物2,3,4。表1列出了這些化合物及對應(yīng)的質(zhì)量數(shù)。此分離中存在兩組同分異構(gòu)體。相關(guān)化合物F和G的質(zhì)量數(shù)相同(m/z 312.36)，奧美拉唑N-氧化物與奧美拉唑砜的質(zhì)量數(shù)相同(362.42)。圖1給出了酸性降解樣品在CORTECSC18+, 2.7 μm, 4.6 x150 mm色譜柱上的分離結(jié)果。
如上面的色譜圖所示，所有洗脫峰都分離完全且峰形極好。由于CORTECS 2.7 μm色譜柱的反壓低于相同填料尺寸的全多孔色譜柱，因此可以使用150 mm長的色譜柱以獲得最高分離度，這對于此次分離中的兩組異構(gòu)體來說非常重要。而且，使用ACQUITY QDa質(zhì)譜檢測器可為表1中的各成分匹配UV峰，即便單位質(zhì)量數(shù)分辨率無法分辨出同分異構(gòu)體5/6和7/8，也可以通過進樣這些化合物的純凈標準品來確認它們的洗脫順序。
提取離子色譜圖(EIC)用于確認峰識別。圖2顯示了以奧美拉唑和2-巰基-5-甲氧基苯并咪唑為例的EIC。ACQUITY QDa檢測器還能夠針對指定峰生成相應(yīng)的質(zhì)譜圖。圖3顯示了奧美拉唑與烏非拉唑的紫外質(zhì)譜圖。紫外質(zhì)譜圖譜分析通常用于確認色譜峰識別以及檢測其它化合物的共洗脫。
基于CORTECS 2.7 μm, 150 mm色譜柱帶來的出色分離，加上ACQUITY QDa質(zhì)譜檢測器得到的質(zhì)譜數(shù)據(jù)，可以實現(xiàn)降解物的鑒定。通過使用CORTECS 2.7 μm色譜柱實現(xiàn)了強制降解樣品中八種不同化合物的分離。此類色譜柱的高柱效和低反壓使得HPLC系統(tǒng)能夠獲得最大分離成為可能。
結(jié)論：
本實驗采用配有PDA和QDa質(zhì)譜檢測器的Alliance HPLC系統(tǒng)，利用CORTECSC18+, 2.7 μm, 4.6 x 150 mm色譜柱對奧美拉唑進行了強制降解研究。如上文所示，此色譜柱展現(xiàn)出對兩組關(guān)鍵的同分異構(gòu)體降解物的高分離度，以及其反壓與傳統(tǒng)HPLC完全兼容(<5000 psi)。使用 CORTECSC18+ 色譜柱分析奧美拉唑(一種弱堿性化合物)及其降解物能獲得清晰且對稱的峰形，即使是使用低pH，低離子強度pH改性劑(比如甲酸)，也絲毫無損分離度。CORTECS 2.7 μm色譜柱加上PDA和QDa質(zhì)譜檢測器，實現(xiàn)了復(fù)雜樣品混合物中相近洗脫化合物的快速分離和鑒定。在HPLC系統(tǒng)上，可在不超出壓力限值的適當(dāng)流速下使用150 mm長的CORTECS2.7 μm色譜柱，從而使得HPLC 分離潛能最大化。
參考文獻：
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