實時熒光定量PCR技術(shù)及在我國衛(wèi)生應(yīng)急中的應(yīng)用

實時熒光定量PCR技術(shù)（Real-time quantitative Polymerase Chain Reaction簡稱Real Time PCR，如果用于RNA檢測，這被稱為逆轉(zhuǎn)錄實時PCR即Real-time RT-PCR）是實時PCR法，它是指對DNA或經(jīng)過反轉(zhuǎn)入（RT-PCR）的RNA通過聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)并實時監(jiān)測DNA的放大過程，在擴(kuò)增的指數(shù)增長期就測量擴(kuò)增產(chǎn)物，因為擴(kuò)增指數(shù)增長期測量值與特異DNA（RNA）起始量存在相關(guān)性，從而實現(xiàn)定量檢測。

Real Time PCR的基本目標(biāo)是精確測量和鑒別非常微量的特異性核酸，從而可通過監(jiān)測CT值而實現(xiàn)對原始目標(biāo)基因的含量定量。目前被普遍使用的多種常規(guī)PCR方法如各種凝膠電泳PCR法，終點熒光定量法或PCR-ELISA法叫做終點PCR法。實時熒光定量PCR法最大的優(yōu)點是克服了終點PCR法進(jìn)入平臺期或叫飽和期后定量的較大誤差，實現(xiàn)DNA/RNA的精確定量。

普通PCR技術(shù)發(fā)明于1983年，而實時熒光定量PCR技術(shù)發(fā)明于上世紀(jì)九十年代并于1996年生產(chǎn)出了世界上第一臺實時熒光定量PCR儀，實時熒光定量PCR技術(shù)得以實現(xiàn)的技術(shù)要素主要有熒光定量PCR試劑盒和實時熒光定量PCR儀，我國熒光定量PCR試劑盒研發(fā)實力強(qiáng)大，生產(chǎn)廠家較多，臨床診斷的品種如HBV/HCV及禽流感診斷試劑盒性能優(yōu)良、供應(yīng)充足，基本實現(xiàn)國產(chǎn)化。在豬流感病毒RNA核酸序列明確的情況下，利用現(xiàn)有的試劑研發(fā)平臺，人感染豬流感實時熒光定量PCR診斷試劑盒很快就會面世。實時熒光定量PCR儀由于技術(shù)含量高，只有少數(shù)幾家中國企業(yè)有能力生產(chǎn)如西安天隆科技有限公司生產(chǎn)的TL-988系列儀器不但取得了發(fā)明專利、國家科學(xué)技術(shù)獎、國家重點新產(chǎn)品證書、醫(yī)療器械注冊證，而且被國家發(fā)改委確立為國家高技術(shù)產(chǎn)業(yè)化示范工程2008年生物醫(yī)學(xué)工程專項，產(chǎn)品性能達(dá)到國際先進(jìn)水平，在乳品檢測行業(yè)市場占有率比進(jìn)口儀器還高[1-3]。實時熒光定量PCR儀應(yīng)用廣泛，1999年開始，西方發(fā)達(dá)國家嘗試將PCR應(yīng)用于臨床傳染病診斷、食品安全檢測以及血液篩查，目前已相當(dāng)普及。2008年12月13日中國衛(wèi)生部下發(fā)《衛(wèi)生應(yīng)急隊伍裝備參考目錄》（衛(wèi)辦應(yīng)急發(fā)[2008]207號），其中要求縣級以上衛(wèi)生應(yīng)急隊伍建設(shè)中必須配備PCR儀和實時熒光定量PCR儀作為傳染病控制類裝備。