如何用TL2020組織研磨破碎儀研磨內(nèi)臟及腫瘤細胞提取RNA

鼎昊源科技通過大量樣品破碎測試發(fā)現(xiàn)，動物組織樣品相比其他樣品更難破碎，特別是一些內(nèi)臟組織、結(jié)締組織、心臟肌肉組織、肺部組織，一般很難用手工或者常規(guī)組織勻漿儀徹底破碎。因為這些動物組織樣品一般韌性較大，如果使用手工研磨或者組織勻漿儀，不僅一次處理量太少、易污染且難清洗，處理后的樣品還不夠均勻細致，達不到后續(xù)提取RNA等實驗的要求。2015年3月 - 4月，北京某生物公司研發(fā)人員使用(又稱TL2020高通量組織研磨儀)研磨內(nèi)臟及腫瘤細胞，后續(xù)提取RNA，實驗順利，效果很好，以下是本次研磨實驗的主要流程，可供相關(guān)實驗人員參考：

【材料準備】

·樣品種類：人體腫瘤細胞、胰腺、前列腺、脂肪、肌肉，每個組織各研磨2個樣品，用液氮處理保存。

·研磨配件種類：鼎昊源TL2020組織研磨破碎儀2.0ml研磨管適配器（28×2.0ml）1對，6mm不銹鋼研磨珠若干顆。

【研磨實驗流程】

1. 高溫滅菌預(yù)處理6mm不銹鋼研磨珠；

2. 將滅菌處理過的研磨珠與研磨管適配器置入液氮中同時進行預(yù)冷處理；

3. 將樣品從液氮中取出，在研缽中切割成約4-5mm寬的樣品小塊。

4. 在2ml無菌圓底離心管(進口)中依次加入：預(yù)冷6mm研磨鋼珠1顆、切好的樣品塊1塊、預(yù)冷6mm研磨鋼珠1顆。

5. 確保離心管中有2顆6mm研磨鋼珠和1塊樣品塊后，快速蓋好管蓋，對稱放入預(yù)冷的2.0ml研磨管適配器孔槽中。

6. 將適配器固定在的兩個搖臂上，設(shè)置轉(zhuǎn)速1800rpm，時間120S（胰腺樣品180S），一鍵開始研磨。

8. 研磨時間結(jié)束，卸載適配器取出離心管，在管中快速加入裂解液，然后按照后續(xù)RNA提取實驗步驟操作。

【研磨效果】

·后續(xù)成功提取出RNA，且電泳圖條帶清晰可見。

本實驗中，使用一次性高速破碎56個2ml的內(nèi)臟樣品組織，不僅操作靈活方便，還能安全輕松地進行液氮冷凍研磨操作，保證了RNA提取等溫度敏感性后續(xù)實驗的順利進行。此外，用TL2020進行類似的動物樣品組織研磨，避免了樣品間的交叉污染，省去了清洗儀器的繁瑣工作，對于樣品量巨大且需要無菌操作的實驗，無疑大大提高了效率。