外用溫經(jīng)通絡(luò)散對(duì)奧沙利鉑所致周圍神經(jīng)毒性大鼠坐骨神經(jīng)的作用

摘要 

目的：觀察外用溫經(jīng)通絡(luò)散對(duì)奧沙利鉑所致周圍神經(jīng)毒性大鼠坐骨神經(jīng)的作用。

方法：30 只 wistar 大鼠， 隨機(jī)分為正常組、模型組、中藥組。 模型組和中藥組腹腔注射奧沙利鉑 3mg/kg，隔天 1 次，共 16 次。 從造模 d1起給予中藥組溫經(jīng)通絡(luò)散浸泡大鼠四肢及尾部；觀察機(jī)械和溫度刺激下大鼠行為學(xué)變化及坐骨神經(jīng)纖維變化， 測(cè)坐骨神經(jīng)傳導(dǎo)速度變化。 結(jié)果：中藥組和模型組出現(xiàn)機(jī)械過(guò)敏和超敏反應(yīng)，冷刺激縮足次數(shù)增多；坐骨神經(jīng)傳 導(dǎo)速度減慢，中藥組較模型組顯著好轉(zhuǎn)（P<0.01）；模型組坐骨神經(jīng)纖維出現(xiàn)脫髓鞘，甚至空泡變性，中藥組較模 型組減輕。 

結(jié)論：溫經(jīng)通絡(luò)散能夠明顯緩解周圍神經(jīng)毒疼痛，加快坐骨神經(jīng)傳導(dǎo)速度，有效降低奧沙利鉑對(duì)坐骨神經(jīng)的損傷。

材料與方法

動(dòng)物造模及分組處理雌性 Wistar 大鼠 30 只 （華阜康動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中心提供），SPF（specific pathogen free condition）級(jí)，體重 200±20g，實(shí)驗(yàn)前大鼠適應(yīng)新環(huán)境 1 周。 根據(jù)體重隨機(jī)分為正常對(duì)照組、模型組、中藥組，每組10 只。 實(shí)驗(yàn)參照 Cavaletti[1]方法中的第 4 組造模

方法造模， 模型組和各中藥組腹腔注射奧沙利鉑3mg/kg，隔天 1 次，共 16 次；正常對(duì)照組腹腔注射 等體積 5%葡萄糖。 從造模 d1 起，中藥組用濃度 為 0.2g/ml 中藥室溫浸泡四肢和尾巴，60min/d，模型組室溫去離子水浸泡四肢和尾巴對(duì)照。

藥品及實(shí)驗(yàn)儀器

中藥復(fù)方（溫經(jīng)通絡(luò)散）：淫羊藿、老鸛草、川烏、川芎、紅花，由中日友好醫(yī)院藥學(xué)部制作成特 定濃度（每 20g 生藥煎出 100ml 藥液）的水煎劑。 奧沙利鉑（進(jìn)口）：50mg 溶解于 5%葡萄糖溶液，終濃度 lmg/ml。 Von Frey 纖維絲： 美國(guó) Stoelting 公司。 智能冷熱板儀：北京眾實(shí)迪創(chuàng)科技有限公司。

BME-410C 型全自動(dòng)熱痛刺激儀： 中國(guó)醫(yī)學(xué)科學(xué) 院 生 物 醫(yī) 學(xué) 工 程 研 究 所 。 電 子 天 平 （AD-VENTUER OHAVS AR0604）。 生命信號(hào)采集系 統(tǒng)：北京中醫(yī)藥大學(xué)基礎(chǔ)實(shí)驗(yàn)室。

1、行為學(xué)測(cè)試 機(jī)械痛覺(jué)敏感度測(cè)試：大鼠置于金屬網(wǎng)上，蓋以透明的有機(jī)玻璃罩，先適應(yīng)環(huán)境 15min，待梳理 和探究活動(dòng)基本消失后， 用 4g 和 15g 纖維絲（Von -Frey hairs，VFH） 輕輕地刺激大鼠后肢足 底，每側(cè)足底 5 次，2 次刺激間隔 6s，大鼠在刺激 時(shí)間內(nèi)或在移開(kāi)纖維時(shí)立即出現(xiàn)快速的抬足反 應(yīng)，記為陽(yáng)性反應(yīng)，而身體活動(dòng)所引起的抬足反應(yīng) 不記為陽(yáng)性反應(yīng)，測(cè)試完成記錄雙后肢抬足次數(shù)， 算出陽(yáng)性反應(yīng)概率 （陽(yáng)性反應(yīng)次數(shù)/10×100%）[2]。VFH 4g 刺激大鼠足底出現(xiàn)抬足反應(yīng)即機(jī)械刺激感覺(jué)超敏反應(yīng)；VFH 15g 刺激大鼠足底出現(xiàn)抬足 反應(yīng)即機(jī)械刺激感覺(jué)過(guò)敏反應(yīng)。

冷溫度覺(jué)敏感性測(cè)試：打開(kāi)冷板儀開(kāi)關(guān)，將溫 度設(shè)定在 4℃， 待溫度恒定達(dá)到設(shè)定溫度時(shí)將大 鼠放在冷板上， 罩上透明有機(jī)玻璃罩， 讓其適應(yīng)1min 后開(kāi)始記錄大鼠 5min 內(nèi)抬足或舔足次數(shù) ，身體活動(dòng)或變換體位所引起的抬足反應(yīng)不記為陽(yáng)性反應(yīng)。實(shí)驗(yàn)開(kāi)始時(shí)測(cè)定行為學(xué)指標(biāo)，各組之間無(wú)差異。

電生理測(cè)試

骨神經(jīng)傳導(dǎo)速度測(cè)試 （the sciatic nerve conduction velocity，SNCV）：0.3%戊巴比妥鈉麻醉 大鼠，用彎剪前去大鼠左后肢的被毛，露出皮膚，沿著股骨干后緣剪開(kāi)皮膚、肌肉，小心剝離筋膜肌 肉，暴露坐骨神經(jīng)，用玻璃分針游離坐骨神經(jīng)，在游離的坐骨神經(jīng)上放置好生命信號(hào)采集系統(tǒng)的刺 激電極和記錄電極， 給予刺激后相連的電腦上用 medlab6.0 記錄神經(jīng)傳導(dǎo)信號(hào)，2 個(gè)記錄電極記錄 到的時(shí)間之差即潛伏期之差， 神經(jīng)傳導(dǎo)速度 v 即 2 個(gè)記錄電極之間的距離 l 除以潛伏期之差 t（v=l/t）。

組織病理學(xué)觀察

實(shí)驗(yàn)結(jié)束時(shí)每組選取 6 只大鼠坐骨神經(jīng)，置于 10%的福爾馬林固定液固定。 取材后，石蠟包 埋，切片厚度 6μm，切片后脫蠟，復(fù)水，HE 染色， 二甲苯透明后樹(shù)膠封片，正置光學(xué)顯微鏡（Olym-pus）下，觀察坐骨神經(jīng)和背根神經(jīng)節(jié)形態(tài)變化。

統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

有數(shù)據(jù)采用 SPSSl9．0 軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)處理 及分析，計(jì)量資料方差齊的應(yīng)用單因素方差分析，方差不齊的應(yīng)用非參數(shù)檢驗(yàn)， 計(jì)數(shù)資料用非參數(shù) 檢驗(yàn)。

本實(shí)驗(yàn)初步證明了溫經(jīng)通絡(luò)散對(duì)奧沙利鉑所 致周圍神經(jīng)毒性大鼠模型治療的有效性， 但其中 藥起效的主要成分及對(duì)奧沙利鉑所致周圍神經(jīng)毒 性的作用靶點(diǎn)尚不清楚，仍需進(jìn)一步驗(yàn)證和研究。