神經(jīng)科疾病動(dòng)物模型的制作經(jīng)驗(yàn)方法

腦缺血模型的制作：

制作腦缺血?jiǎng)游锬Ｐ偷姆椒ê芏�，但常用方法主要有結(jié)扎法和栓塞法兩種，結(jié)扎法是運(yùn)用外科手段結(jié)扎腦的供血?jiǎng)用}，中止腦的血氧供應(yīng)，它可以進(jìn)一步分為顱內(nèi)結(jié)扎和顱外結(jié)扎。顱外結(jié)扎主要是用于制作全腦缺血模型，可進(jìn)一步分為：①4血管結(jié)扎，即結(jié)扎頸總動(dòng)脈/頸內(nèi)動(dòng)脈和椎動(dòng)脈； ②2血管結(jié)扎，即結(jié)扎兩側(cè)頸總/頸內(nèi)動(dòng)脈，同時(shí)抽取動(dòng)物一定量的血液，使血壓降低到50mmHg以下，達(dá)到造成全腦缺血的目的。

這種方法因?yàn)樾枰�監(jiān)視和控制血壓，實(shí)驗(yàn)條件要求嚴(yán)格，且因椎動(dòng)脈未予結(jié)扎，往往造成的腦缺血是不完全的。另一種兩血管結(jié)扎法是用沙土鼠（Gerbil）進(jìn)行，利用沙土鼠腦底Willis動(dòng)脈環(huán)發(fā)育不全后交通動(dòng)脈缺如的特點(diǎn)，結(jié)扎兩側(cè)的頸總或頸內(nèi)動(dòng)脈造成前腦缺血。栓塞法是用自體血凝塊、塑料或玻璃微球來(lái)栓塞實(shí)驗(yàn)動(dòng)物頸動(dòng)脈、腦內(nèi)大動(dòng)脈或微動(dòng)脈，造成腦組織缺血模型，該法簡(jiǎn)便易行，但可控性、可重復(fù)性差，且不能再灌流。

1. 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物

實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的選擇對(duì)腦缺血模型是非常重要的，理論上兔、貓、狗和靈長(zhǎng)類都可被用來(lái)制作腦缺血模型，但更多的人傾向于選擇使用鼠作實(shí)驗(yàn)。這主要是基于如下認(rèn)識(shí)：因?yàn)槭笫切��?dòng)物，價(jià)格便宜，軀體小，消耗藥品試劑較少；鼠的腦血管解剖和生理與高級(jí)動(dòng)物無(wú)明顯差異；一些在體的實(shí)驗(yàn)操作更容易進(jìn)行，甚至在倫理學(xué)更容易接受等等。

2. 儀器和設(shè)備

制作腦缺血?jiǎng)游锬Ｐ偷膬x器設(shè)備分為二類：一類是為動(dòng)物手術(shù)服務(wù)，包括一套手術(shù)器械，手術(shù)顯微鏡，顱鉆，腦立體定位儀，溫度控制裝置（控溫儀、紅外線燈和加熱墊），呼吸機(jī)；另一類是用于監(jiān)測(cè)和分析的儀器，包括腦電記錄裝置，血壓記錄裝置，多譜勒血流記錄儀，血?dú)庋�糖分析儀。

3. 四血管結(jié)扎腦缺血模型的制作

這是一個(gè)廣泛應(yīng)用的腦缺血模型。最常用的為Pulsinelli的改良方法。該模型選用Wistar大鼠，可以在清醒和自由運(yùn)動(dòng)狀態(tài)下制作嚴(yán)重的腦缺血和恒定的病理學(xué)改變。該模型分二個(gè)階段制作，第一階段：將動(dòng)物麻醉，按置在腦立體定位儀上，調(diào)節(jié)耳桿和門齒高度使鼠頭前傾約30度，同時(shí)用橡皮栓住鼠尾給以輕度的牽拉力，使頸椎伸直，翼孔呈水平位，便于觀察。枕骨下第一頸椎水平正中切口，仔細(xì)分離兩側(cè)第一頸椎橫突，暴露第一頸椎橫突上的翼孔，翼孔下有兩則椎動(dòng)脈通過(guò)，用小的單極或雙極電凝器插入翼孔燒灼閉塞雙側(cè)椎動(dòng)脈。然后動(dòng)物取背位，頸部正中切口，分離頸動(dòng)脈鞘，注意不要損傷迷走神經(jīng)和頸動(dòng)脈鞘后方的頸交感干。用外科縫線套住兩側(cè)頸總動(dòng)脈（不要結(jié)扎），將線頭藏于皮下，簡(jiǎn)單關(guān)閉切口；第二階段：待動(dòng)物麻醉清醒后自由飲水，但禁食12～24小時(shí)后，將動(dòng)物于清醒狀態(tài)下，取背位，分別用繩子固定四肢和門齒，以控制動(dòng)物掙扎。小心分離頸前部的切口，辯認(rèn)套在頸總動(dòng)脈上的縫線，輕輕牽起，將線套收緊或者用微血管夾夾閉雙側(cè)頸總動(dòng)脈。此時(shí)在2～3秒鐘內(nèi)大鼠將昏迷并喪失對(duì)光反射。缺血后2～3分鐘可出現(xiàn)異常腦電圖，并持續(xù)到缺血結(jié)束。頸總動(dòng)脈的關(guān)閉時(shí)間根據(jù)實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)而定，通常取10～20分鐘�；杳院头瓷湎�失是缺血是否成功的標(biāo)志。據(jù)統(tǒng)計(jì)約有四分之三的大鼠經(jīng)上述二階段處理可導(dǎo)致缺血成功。缺血期間自主呼吸和角膜反射的存在提示腦干血液供應(yīng)的存在，這是因?yàn)榧顾枨皠?dòng)脈供血的原因。缺血結(jié)束后松開(kāi)頸總動(dòng)脈，動(dòng)物通常很快清醒。但在24～72小時(shí)內(nèi)將有一部分動(dòng)物出現(xiàn)缺血性抽搐，如果缺血持續(xù)30分鐘，在24小時(shí)內(nèi)將有20%、72小時(shí)有40%的鼠發(fā)生缺血性抽搐，這些發(fā)生抽搐的鼠在結(jié)果分析時(shí)應(yīng)被排除。

約有四分之一的鼠缺血不成功，其中2/3是昏迷不完全，另外1/3死于呼吸衰竭。該模型的制作的關(guān)鍵是燒灼椎動(dòng)脈，由于椎動(dòng)脈不能直接看到，這就需要操作者具有一定的經(jīng)驗(yàn)，適當(dāng)?shù)恼莆諢�灼的時(shí)間和電極與翼孔的角度，同時(shí)要避免損傷腦干
 
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