分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)室區(qū)域的劃分

一、核酸檢測實(shí)驗(yàn)室應(yīng)劃分為五個(gè)獨(dú)立的工作區(qū)。五個(gè)工作區(qū)應(yīng)按照從清潔、半污染到污染的順序排列。各區(qū)內(nèi)的試劑和耗材不能再進(jìn)入任何“上游”區(qū)域。

（1）試劑配置和貯存區(qū)：本區(qū)的功能是實(shí)驗(yàn)相關(guān)試劑（如核算提取液、乙醇等）的配置和貯存（包括商業(yè)化的試劑，如PCR反應(yīng)緩沖液、Taq聚合酶和dNTPs等）。用于PCR擴(kuò)增的試劑建議分裝后保存。

（2）樣品制備區(qū)：本區(qū)的功能為待檢樣品的保存、核酸的提取、貯存等。進(jìn)行RNA檢測的實(shí)驗(yàn)室，在此區(qū)域內(nèi)應(yīng)辟出專門的RNA操作區(qū)，或安裝一臺Ⅱ級生物安全柜或外排風(fēng)式的排風(fēng)櫥來替代。

（3）PCR反應(yīng)配制區(qū)：本區(qū)的功能為配制、分裝PCR主反應(yīng)混合液以及加入核酸模板。對于使用巢式PCR進(jìn)行檢測的實(shí)驗(yàn)室，建議在此區(qū)安裝一臺Ⅱ級生物安全柜或外排風(fēng)式的排風(fēng)櫥，，第一輪的擴(kuò)增產(chǎn)物添加至第二輪的主反應(yīng)混合液的操作可在此區(qū)進(jìn)行。

（4）擴(kuò)增區(qū)：核酸擴(kuò)增。加了DNA或RNA等模板的反應(yīng)管應(yīng)蓋好管蓋后才拿到本區(qū)。

（5）擴(kuò)增產(chǎn)物分析區(qū)：本區(qū)的功能為擴(kuò)增片段的測定。本區(qū)是最主要的擴(kuò)增產(chǎn)物污染來源，應(yīng)注意避免通過本區(qū)的物品將擴(kuò)增產(chǎn)物帶出。對于使用定量PCR進(jìn)行檢測的實(shí)驗(yàn)室，此產(chǎn)物分析區(qū)可以省略。

二、以上各區(qū)域擁有明確的標(biāo)記。進(jìn)入各工作區(qū)域應(yīng)盡量按單一方向進(jìn)行，即試劑配制和貯存區(qū)、樣品制備區(qū)、PCR反應(yīng)配制區(qū)、擴(kuò)增區(qū)和擴(kuò)增產(chǎn)物分析區(qū)。

三、每個(gè)工作區(qū)域內(nèi)都應(yīng)有專項(xiàng)使用的設(shè)備，包括加樣設(shè)備，如移液器、吸頭等。適當(dāng)時(shí)，可以用顏色或其他方式對不同區(qū)域內(nèi)的實(shí)驗(yàn)用品加以區(qū)分，并避免不同工作區(qū)域內(nèi)的設(shè)備和實(shí)驗(yàn)用品混用。

四、適宜時(shí)，實(shí)驗(yàn)室內(nèi)可配置便攜式紫外消毒裝置，用于各工作區(qū)域內(nèi)的實(shí)驗(yàn)表面、臺面、地面等的紫外消毒。

五、定期對擴(kuò)增產(chǎn)物分析用1mol/L的鹽酸擦拭臺面，以防擴(kuò)增產(chǎn)物的污染。用過的電泳凝膠和電泳緩沖液要集中處理。