超靈敏納米流式分析儀A50 Micro在巧選細胞囊泡最佳參考材料中的應用

伯齊推出納米流式巧選胞外囊泡最佳參考材料解決方案

胞外囊泡做為細胞間通訊的重要媒介，在細胞生理穩(wěn)態(tài)的維持方面和病理發(fā)生發(fā)展的過程中發(fā)揮著重要的作用，正漸漸成為基礎科學和臨床研究的一個主要研究對象。然而針對胞外囊泡的研究，在世界范圍內(nèi)一直缺乏相對統(tǒng)一的研究標準或大小評估參考材料。在以往的研究報道中，曾有文獻提出使用自然存在的，具有生物特性的參考材材料（如病毒顆粒和脂質(zhì)體）作為胞外囊泡研究的參考材料。然而，這些材料的各種理化特性與胞外囊泡的生物特性還相距甚遠。
 
近日，芬蘭科學家Valkonen S和其合作者的研究工作，為胞外囊泡參考材料的發(fā)掘工作提供了新的思路。研究人員，通過查取文獻和調(diào)查問卷（圖1），以及實驗測試，成功找到一種名為Nanoerythrosomes (Nano E)的胞外囊泡參考材料。其中，Nano E是研究人員利用特殊方法破裂紅細胞過程中產(chǎn)生的囊泡。這種Nano E擁有更加接近細胞源性胞外囊泡（如紅細胞自然產(chǎn)生的胞外囊泡eryEVs）的折射率（RI=1.37），更加適合做囊泡大小評估的尺寸(Nano E的大小尺寸絕大多數(shù)分布在200nm左右)（圖2），更加適合做熒光標記的特性等特點（圖3）。這項創(chuàng)新性的研究工作，為加快胞外囊泡研究領(lǐng)域建立統(tǒng)一研究體系，促進該領(lǐng)域研究成果的可借鑒性以及臨床應用轉(zhuǎn)化的進程，奠定了堅實的基礎。

在該項研究成果中，其中一項引人注目的工作是：研究人員利用胞外囊泡分析最常用的流式分析法，借助英國Apogee超靈敏納米流式分析儀A50 Micro，成功完成對Nano E各參數(shù)的分析（如在分析熒光標記的過程中，同時監(jiān)測各Nano E的大�。�。這些工作的順利完成，主要歸功于A50-Micro超高的散射光靈敏度（最小檢測80nm的材料）和精細的分辨率（10nm）-克服了傳統(tǒng)流式散射光檢測的限制（檢測下限為500nm，在分析占有絕大部分比例500nm以下囊泡時會面臨極大挑戰(zhàn)）。這種技術(shù)優(yōu)勢，使Apogee A50 Micro不僅是只借助散射光就可精確分析胞外囊泡（100-1000nm）以及相應的參考材料，同時還可為熒光標記檢測提供必不可少的參考信息。因此，Apogee A50 Micro 已被歐洲國家計量研究協(xié)會評定為檢測胞外囊泡的最靈敏分析系統(tǒng)。由于傳統(tǒng)流式檢測法，通常借助熒光標記來對進行信息表征屬，同時所分析樣品中難免會有對熒光標記產(chǎn)生非特異干擾的細胞碎片或膜脂類物質(zhì)，因此，利用熒光標記技術(shù)檢測囊泡，如果想獲得精確的實驗數(shù)據(jù)，借助散射光信息來排除非特異性干擾物質(zhì)，將變得格外重要。此外，囊泡表面抗原表達豐度和抗原抗體結(jié)合效率也會限制胞外囊泡的熒光標記檢測，這也將在很大程度上限制傳統(tǒng)流式的囊泡檢測應用。由此可見，在分析胞外囊泡及相應參考材料的研究體系中，Apogee超靈敏納米流式A50-Micro顯然已經(jīng)成為最理想的流式分析系統(tǒng)。

圖1，A:研究人員針對各參考微球所做的權(quán)重分析統(tǒng)計，其中參考材料的生化組成成分為最受關(guān)注 因素。B:最理想的生物參考材料物理生化特性。

圖 2，參考Apogee標準混合微球，用Apogee A50 Micro分析無熒光標記的eryEVs和Nano E。其中縱坐標代表綠色熒光標記強度，橫坐標代表 A50 Micro大角度散射光強度（用于評估樣本的大�。�。

圖 3，與eryEVs相比，Nano E更適合做CD235a抗體標記。其中縱坐標代表綠色熒光標記強度，橫坐標代表 A50 Micro收集的大角度散射光強度。

更多詳情請參考：
Valkonen S, Van d P E, B?ing A, et al. Biological reference materials for extracellular vesicle studies. [J]. European Journal of Pharmaceutical Sciences, 2016.

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