選擇液相色譜柱簡單思路

1. 確定分離目的      

確定你的應(yīng)用是否要求高分離度、短分析時(shí)間、高靈敏度、長柱壽命，低的操作成本等等。

2. 評(píng)估分析物的化學(xué)性質(zhì)      

評(píng)估分析物的化學(xué)性質(zhì)，諸如化學(xué)結(jié)構(gòu)、溶解性、穩(wěn)定性等等。

3. 選擇合適的色譜柱      

了解色譜填料的物理和化學(xué)性質(zhì)。

A填料基質(zhì)

硅膠基質(zhì)：純度高成本低，強(qiáng)度大，化學(xué)修飾容易， 但pH值范圍有限。大多硅膠基質(zhì)填料在pH2-8之間穩(wěn)定，但經(jīng)過特殊修飾的硅膠鍵合相可以穩(wěn)定在pH1.5-10。
聚合物基質(zhì)：應(yīng)用pH值范圍寬，溫度穩(wěn)定（高溫可以達(dá)到80度以上），機(jī)械強(qiáng)度小。

B顆粒形狀

大多現(xiàn)代HPLC填料都是球形顆粒，但有時(shí)是不規(guī)則的顆粒。球形顆粒提供較低的柱壓、較高的柱效和穩(wěn)定性以及較長的柱壽命在使用高粘度的流動(dòng)相時(shí)；不規(guī)則顆粒有較大比表面積和相對(duì)低廉的價(jià)格。

C顆粒粒徑

粒徑越小柱效越高、分離度越高，但同時(shí)會(huì)導(dǎo)致較高柱壓降。選擇1.5-3µm的填料以解決一些復(fù)雜樣品,UPLC可以使用1.5µm的填料；另外10µm或更大粒徑的填料用作半制備或制備柱。

D 含碳量

含碳量指的是硅膠表面鍵合相的比例，與比表面積和鍵合覆蓋度等有關(guān)。高含碳量提高柱容量、分辨率及分析時(shí)間，用于要求高分離度的復(fù)雜樣品；低含碳量分析時(shí)間短、展現(xiàn)不同的選擇性，用于快速分析簡單樣品及需要高含水流動(dòng)相條件的樣品。一般C18的含碳量在7-19%不等。

E孔徑和比表面積   

HPLC吸附介質(zhì)是多孔的顆粒，絕大多數(shù)的反應(yīng)表面于孔內(nèi)。因此，分子必須進(jìn)入孔內(nèi)才能被吸附和分離。
孔徑和比表面積是相輔相成的兩個(gè)概念。孔徑小比表面積大，反之亦然。比表面積大，增加樣品與鍵合相之間的反應(yīng)，增加保留,上樣量和復(fù)雜成分的分離度；比表面積小，平衡時(shí)間快，適合梯度分析。

F孔容和機(jī)械強(qiáng)度

孔容，又稱“孔體積”。 指單位顆粒的空隙體積大小。它能很好的反應(yīng)填料的機(jī)械強(qiáng)度�？左w積大的填料相對(duì)孔體積小的填料機(jī)械強(qiáng)度要略弱�？左w積為1.5mL/g  或更小的填料大多用于HPLC分離，而孔體積大于1.5mL/g  的填料使用于尺寸排阻色譜和低壓色譜。

G封端封端

封端能夠降低極性堿性化合物因?yàn)榕c裸露的硅醇基相互作用而產(chǎn)生的拖尾峰。不封端鍵合相相對(duì)封端鍵合相會(huì)產(chǎn)生不同的選擇性，尤其是極性樣品。

色譜填料分類（鍵合相）

1 s硅膠柱適用于能溶于有機(jī)溶劑的低分子量化合物的分離。硅膠柱上的分離與樣品中化合物的官能團(tuán)方
位、類型和數(shù)量有關(guān)。在制備色譜技術(shù)中，正相色譜技術(shù)有很大優(yōu)勢，因?yàn)榧兓�以后的樣品只需要蒸發(fā)掉溶劑即
可得到純凈化合物，不象反相色譜那樣需要費(fèi)時(shí)的冷凍干燥。

2 ODS/C8/C4等反相柱

ODS使用單官能團(tuán)鍵合劑在優(yōu)化的條件下達(dá)到高密度鍵合覆蓋率的一種十八烷基鍵合相硅膠吸附劑，耐用的小分子HPLC柱，，C18柱常和水/甲醇或者水/乙腈流動(dòng)相結(jié)合使用，對(duì)于疏水性不同的小分子，蛋白質(zhì)和肽類等，具有出色的分離能力 。C8與C18色譜柱相同，也是靠疏水性相互作用的機(jī)理分離樣品，但是保留能力減弱。當(dāng)樣品極性太強(qiáng)或者疏水性太強(qiáng)而無法在C18柱上進(jìn)行色譜分析時(shí)，C8柱是一個(gè)很好的選擇。一些極性化合物在C8柱上能有更好的表現(xiàn)，由于C8鍵合相良好的表面覆蓋率，像維生素、抗生素和堿性藥物通常在C8柱上的分離要比C18柱好，而且峰形更加對(duì)稱。

3NH2是一種氨丙基鍵合硅膠吸附相，既能用于正相分析，又能用于反相分析。氨基固定相的選擇性與
C18相比，有很大差別，使得它對(duì)那些極難分析的極性化合可以達(dá)到理想的分析結(jié)果。另外，氨基柱與離子凝
膠柱相比，對(duì)糖類化合物表現(xiàn)出更高的分離效率。此類應(yīng)用中的典型流動(dòng)相是乙腈/水。在正相模式下的分離
類似于未鍵合的硅膠，但是梯度平衡的時(shí)間更短，壽命更長。

4 二苯基

適用于含有雙鍵和芳香基團(tuán)的化合物。與C18和苯基已烷鍵合相相比，不是依靠疏水保留機(jī)理，二苯基鍵合相主要是依靠化合物的π-電子結(jié)構(gòu)的不同來獲得分離。如果您需要在分析中提高芳香族和雙鍵化合物的選擇性，提高分離度以及提高樣品通量。

5氰基柱

氰丙基鍵合硅膠吸附相，它的獨(dú)特之處在于能同時(shí)用于正相和反相分離模式。當(dāng)使用含水的有機(jī)流動(dòng)相時(shí)，分析物的洗脫順序和反相模式一致：極性化合物洗脫快，非極性化合物則被更多的保留。因此氰基柱可以分析那些對(duì)C18柱來說疏水性太強(qiáng)而且在有機(jī)溶劑中溶解性不好的化合物。氰基柱作為正相柱使用時(shí)，分離化合物的原理是基于極性相互作用。
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