為什么要使用多重?zé)晒夥椒ㄟM(jìn)行western blot的檢測(cè)？

最近關(guān)于western blot數(shù)據(jù)造假的學(xué)術(shù)新聞成了科研的熱搜詞條，其數(shù)據(jù)造假包括，均存在一圖多用，用了剪切，拼接，翻轉(zhuǎn)，旋轉(zhuǎn)，調(diào)整大小，故意抹平背景等P圖手法，那我們來看看這些造假的數(shù)據(jù)。

一、一圖兩用——用同一條帶，P圖后代表不同實(shí)驗(yàn)結(jié)果。

兩個(gè)不同實(shí)驗(yàn)，同一條帶代表不同蛋白（GST-IkBa和Caspase）

《鋅指蛋白A20對(duì)氧化性低密度脂蛋白介導(dǎo)的巨噬細(xì)胞與血管平滑肌細(xì)胞增殖和凋亡的影響及其分子機(jī)制的研究》，2005年6月

二、抹平背景

為了達(dá)到預(yù)期的實(shí)驗(yàn)效果，故意調(diào)整對(duì)比度，將不要的條帶抹去。

Kagami, A. et al. Acetylation regulates monopolar attachment at multiple levels during meiosis I in fission yeast. EMBO Rep. 12, 1189–1195 (2011).

三、拼圖粘貼

ABCD變成了ACBD

--Metformin inhibits cell proliferation, migration and invasion by attenuating CSC function mediated by deregulating miRNAs in pancreatic cancer cells.Cancer Prevention Research (2012）

四、一組對(duì)照多次使用

像GAPDH、β-actin這些基本都是陽性的結(jié)果，所以有時(shí)候有些小伙伴就圖省事兒，做一次GAPDH、β-actin的WB圖，可以用一陣子，發(fā)幾篇文章了，有時(shí)候調(diào)調(diào)亮度，有時(shí)候增加以下對(duì)比度，有的時(shí)候鏡像反轉(zhuǎn)一下。

--Increased Ras GTPase activity is regulated by miRNAs that can be attenuated by CDF treatment in pancreatic cancer cells.Cancer Letters (2012)

那么我們?nèi)绾味糁七@樣造假數(shù)據(jù)的發(fā)生的，最好的辦法是選擇合適合理的檢測(cè)方法和提供真實(shí)的圖片信息。

A、z驗(yàn)人員應(yīng)該采用現(xiàn)在動(dòng)態(tài)范圍更寬的多重?zé)晒鈝estern blot檢測(cè)方法來進(jìn)行western blot檢測(cè)，多重?zé)晒鈾z測(cè)二抗使用熒光基團(tuán)標(biāo)記，膜上的靶標(biāo)蛋白濃度與熒光信號(hào)強(qiáng)度呈線性關(guān)系，實(shí)現(xiàn)真正的定量要求，無需玻剝離膜和二次孵育，進(jìn)行上樣質(zhì)控，目標(biāo)蛋白和內(nèi)參蛋白在同一張膜上，就不會(huì)發(fā)生上面數(shù)據(jù)造假的情況發(fā)生。

• 成像儀器要提供給客戶真實(shí)的原始的tiff圖片，而不是經(jīng)過軟件自行修改，編輯的看著好看的圖片，例如插值圖片，插值圖像灰度值有明顯的不連續(xù)性，圖像質(zhì)量損失較大，會(huì)產(chǎn)生明顯的馬賽克和鋸齒現(xiàn)象。自動(dòng)優(yōu)化圖片，軟件類似PS的手法，在形成圖像時(shí)進(jìn)行自動(dòng)優(yōu)化，消除背景等方法，這樣會(huì)使圖片丟失大量信息，影響數(shù)據(jù)的真實(shí)性。
• Azure公司秉承實(shí)事求是，尊重科研的態(tài)度，我們提供給客戶最原始的16bit的tiff圖片，tiff是最復(fù)雜的一種位圖文件格式。tiff是基于標(biāo)記的文件格式，它廣泛地應(yīng)用于對(duì)圖像質(zhì)量要求較高的圖像的存儲(chǔ)與轉(zhuǎn)換。由于它的結(jié)構(gòu)靈活和包容性大，它已成為圖像文件格式的一種標(biāo)準(zhǔn)。信息量大，真實(shí)反映實(shí)驗(yàn)結(jié)果。

綜上所述，要選擇合適的western blot檢測(cè)方法、好的成像檢測(cè)器和一顆端正的學(xué)術(shù)心，才能做好科研，不會(huì)有類似的事件發(fā)生。

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