國(guó)際疫苗企業(yè)質(zhì)量控制中的創(chuàng)新技術(shù)

自我們的祖先發(fā)明人痘、琴納(Jenner)發(fā)明牛痘到今天，在這兩百多年的歷史進(jìn)程中，疫苗的發(fā)展經(jīng)歷了多次革命，每次都有相應(yīng)的研究成果被應(yīng)用于抵御和治療疾病，保衛(wèi)人類健康。今天，疫苗的應(yīng)用不僅使某些烈性傳染病得到有效的控制或消滅，而且還廣泛地應(yīng)用于計(jì)劃生育及腫瘤、自身免疫病、免疫缺陷、超敏反應(yīng)等疾病的預(yù)防和治療。無可辯駁地證明疫苗對(duì)人類健康保障、生活質(zhì)量改善和社會(huì)發(fā)展做出了巨大貢獻(xiàn)。

疫苗根據(jù)工藝可被分為：活疫苗（減毒疫苗）；滅活疫苗；亞單位疫苗；基因工程疫苗等

因?yàn)橐呙缃Y(jié)構(gòu)復(fù)雜，工藝難度大，因此質(zhì)量控制尤顯重要。

質(zhì)量控制至少保證：

1.安全性

  a) 制品自身：如減毒疫苗的神經(jīng)毒性

  b)工藝引進(jìn)：如流感疫苗的裂解劑，抗生素

  c)工藝殘留：制品殘留，外部污染

  d)后期添加：防腐劑，穩(wěn)定劑，佐劑等

2.有效性

  a)有效成分確認(rèn)

  b)含量測(cè)定

  c)效力測(cè)定

3.穩(wěn)定性：制劑保存后的各項(xiàng)指標(biāo)

4.一致性：批次間差異

因多種因素，國(guó)內(nèi)多數(shù)廠家依然采用傳統(tǒng)手工操作為主的方法進(jìn)行質(zhì)量控制，易因過多手工操作引入誤差。另方法學(xué)落后，對(duì)于新興的基因工程重組疫苗，傳統(tǒng)的方法可能無法準(zhǔn)確闡述重組疫苗的質(zhì)量屬性。現(xiàn)綜述一些國(guó)外疫苗企業(yè)采用的先進(jìn)的質(zhì)量控制方法，供參考。

1. 免疫學(xué)鑒別

免疫學(xué)鑒別，是有效成分檢測(cè)非常重要的手段。EIA，ELISA，蛋白膠廣泛用于現(xiàn)行質(zhì)量控制。EIA，ELISA的方法，因?yàn)闆]有分子量信息，不能完全闡述蛋白質(zhì)完整性等。蛋白膠，因?yàn)檫^多手工操作，極易引入過多誤差。

Merck疫苗大量研究使用ProteinSimple Simple western系統(tǒng)進(jìn)行疫苗的免疫學(xué)鑒別。

Simple western 重復(fù)性 

四價(jià)艱難梭菌疫苗免疫學(xué)鑒別

Applications of an Automated and Quantitative CE-Based Size and Charge Western Blot for Therapeutic Proteins and Vaccines，Capillary Electrophoresis of Proteins and Peptides: Methods and Protocols, Methods in Molecular Biology, vol. 1466,2016

15價(jià)肺炎鏈球菌疫苗免疫學(xué)鑒別

參考文獻(xiàn)：Automated capillary Western dot blot method for the identity  of a 15-valent pneumococcal conjugate vaccine，Anal. Biochem.  (2015)

2.疫苗等電點(diǎn)檢測(cè)    

等電點(diǎn)對(duì)于疫苗工藝開發(fā)非常重要，比如純化使用離子交換色譜（IEX）是基于產(chǎn)品和污染物電荷差異，制劑緩沖液選擇及產(chǎn)品沉淀發(fā)生都與等電點(diǎn)相關(guān)。

等電點(diǎn)檢測(cè)舉例：

脊髓灰質(zhì)炎活病毒等電點(diǎn)檢測(cè)

病毒樣顆粒等電點(diǎn)檢測(cè)

結(jié)合疫苗載體蛋白檢測(cè)

3. 穩(wěn)定性檢測(cè)

1）疫苗穩(wěn)定性考察中，分子量變化檢測(cè)，提示蛋白降解或蛋白聚集

下圖：Merck四價(jià)艱難梭菌疫苗穩(wěn)定性研究，大分子量抗原TcdA和TcdB 37℃ 14天發(fā)生聚集。

2）不同buffer穩(wěn)定性考察，等電點(diǎn)反映穩(wěn)定性變化。如下圖，重組HBsAg三種buffer中，反復(fù)凍融，bufferA中產(chǎn)品穩(wěn)定。