M65 ® ELISA試劑盒檢測(cè)CK-18在檢測(cè)病患肝細(xì)胞凋亡狀況中的應(yīng)用

《非酒精性脂肪性肝病防治指南》2018已更新，持續(xù)增高的NAFLD 患者建議檢測(cè)CK-18

非酒精性脂肪性肝病簡(jiǎn)介

非酒精性脂肪性肝病（Nonalcoholic fatty liver disease, NAFLD）是一種與胰島素抵抗（Insulin resistance, IR）和遺傳易感密切相關(guān)的代謝應(yīng)激性肝損傷，疾病譜包括非酒精性肝脂肪變、非酒精性脂肪性肝炎（Non-alcoholic steatohepatitis, NASH）、肝硬化和肝細(xì)胞癌（Hepatocellular carcinoma, HCC）。NAFLD不僅可以導(dǎo)致肝病殘疾和死亡，還與代謝綜合征（Metabolic syndrome, MetS）、２型糖尿�。═ype 2 diabetes mellitus, T2DM）、動(dòng)脈硬化性心血管疾病以及結(jié)直腸腫瘤等的高發(fā)密切相關(guān)。隨著肥胖和MetS的流行，NAFLD已成為我國(guó)第一大慢性肝病和健康體檢肝生物化學(xué)指標(biāo)異常的首要原因。并且，越來越多的HBV慢性感染者合并NAFLD，嚴(yán)重危害人民生命健康。

《非酒精性脂肪性肝病診療指南》的修訂

為了規(guī)范NAFLD的診斷、治療、篩查和隨訪，中華醫(yī)學(xué)會(huì)肝病學(xué)分會(huì)脂肪肝和酒精性肝病學(xué)組于2006年組織國(guó)內(nèi)有關(guān)專家制訂了《非酒精性脂肪性肝病診療指南》（第１版）。近８年來，國(guó)內(nèi)外有關(guān)NAFLD診療和管理的臨床研究取得了很大進(jìn)展，為此，中華醫(yī)學(xué)會(huì)肝病學(xué)分會(huì)脂肪肝和酒精性肝病學(xué)組聯(lián)合中國(guó)醫(yī)師協(xié)會(huì)脂肪性肝病專家委員會(huì)對(duì)本指南再次修訂。

《非酒精性脂肪性肝病防治指南（2018更新版）》旨在幫助臨床醫(yī)生在NAFLD診斷、治療、篩查和隨訪中做出合理決策。

角蛋白18簡(jiǎn)介
《指南》中提到的CK-18是指角蛋白18（K18, cytokeratin 18 或CK-18）。CK-18是在多種上皮細(xì)胞中高表達(dá)的胞內(nèi)蛋白。大多數(shù)CK-18蛋白在胞內(nèi)是不可溶性的，并在細(xì)胞死亡期間隨著細(xì)胞的破裂被釋放到細(xì)胞外。CK-18在細(xì)胞凋亡期間被caspase催化發(fā)生水解，為caspase所切割的片段釋放到細(xì)胞外。因此細(xì)胞外的 caspase-cleaved CK-18 （ccK-18）濃度反映了細(xì)胞凋亡的數(shù)量。同時(shí)檢測(cè)CK-18和ccK-18，可知道總細(xì)胞死亡中細(xì)胞凋亡的比例。

細(xì)胞凋亡與NAFLD
細(xì)胞死亡，包括壞死和凋亡。其中細(xì)胞壞死是非正常原因造成的細(xì)胞死亡。
與壞死不同，細(xì)胞凋亡是由體內(nèi)外因素觸發(fā)細(xì)胞內(nèi)預(yù)存的死亡程序而導(dǎo)致的細(xì)胞主動(dòng)性死亡方式，是保持肝細(xì)胞穩(wěn)定的一種新陳代謝過程。但是當(dāng)細(xì)胞凋亡失衡時(shí)會(huì)對(duì)肝細(xì)胞造成潛在的損傷作用。
　　越來越多的研究認(rèn)為在NAFLD進(jìn)展過程中，隨著肝細(xì)胞變性、壞死增多，細(xì)胞凋亡的比例也在增加。Feldstein等對(duì)NASH患者肝活組織標(biāo)本應(yīng)用TUNEL方法檢測(cè)肝細(xì)胞凋亡，發(fā)現(xiàn)凋亡明顯增加，并且細(xì)胞凋亡隨肝纖維化和脂肪性肝炎炎癥病變程度增加而增加。在NASH中，肝細(xì)胞凋亡在由單純性脂肪肝轉(zhuǎn)變?yōu)橹�肪性肝炎、肝纖維化過程中起重要作用。肝細(xì)胞凋亡不僅在脂肪肝發(fā)生肝炎反應(yīng)的活動(dòng)中發(fā)揮促進(jìn)作用。而且也是肝纖維化過程中促發(fā)肝星狀細(xì)胞活化與增殖的關(guān)鍵環(huán)節(jié)。肝細(xì)胞的凋亡，促進(jìn)了肝損傷，直接加重了炎癥反應(yīng)和肝纖維化程度。
 
CK-18的ELISA檢測(cè)方法
PEVIVA品牌的M65 ^® ELISA試劑盒（產(chǎn)品編號(hào)：10020）以夾心法定量CK-18，一塊預(yù)包被了CK-18鼠源單抗的96孔板，以HRP偶聯(lián)M65抗體作為一抗，可用以評(píng)估人血清或則血漿中上皮細(xì)胞死亡情況。M30 Apoptosense^® ELISA 試劑盒（產(chǎn)品編號(hào)10011）則特異性檢測(cè)在凋亡時(shí)caspase-cleavaged CK-18在Asp396形成的新表位（又稱為K18Asp396-NE 或者M(jìn)30 neo-epitope），以此反映上皮細(xì)胞的凋亡情況。兩種檢測(cè)試劑盒的單位根據(jù)同一標(biāo)準(zhǔn)校對(duì)，可以計(jì)算caspase-cleaved和總CK-18（“M30:M65比”）。M30:M65 比值代表了細(xì)胞死亡總數(shù)中細(xì)胞凋亡細(xì)胞所占的比例。細(xì)胞凋亡導(dǎo)致caspase-cleaved CK-18釋放，M30:M65比值較高；然而如果細(xì)胞只是發(fā)生壞死，只有CK-18的水平是升高的，所以M30:M65比值較低。

總結(jié)
目前雖然肝臟活檢被認(rèn)為是評(píng)估患病情況的標(biāo)準(zhǔn)方法，但是這種侵入式的技術(shù)會(huì)給患者帶來創(chuàng)傷，且有一定風(fēng)險(xiǎn)，不適合疾病監(jiān)測(cè)及相關(guān)機(jī)制的研究�！吨改稀芳霸絹碓蕉嗟奈墨I(xiàn)支持以基于血液學(xué)的方法來對(duì)NAFLD進(jìn)行研究和評(píng)估，這種方式既減少了病患痛苦，又降低了研究人員采樣的難度。PEVIVA細(xì)胞死亡系列試劑盒采用血液作為樣本，是檢測(cè)病患肝細(xì)胞凋亡狀況的非入侵式方法，是實(shí)驗(yàn)研究的理想選擇。
 

品牌	產(chǎn)品編號(hào)	產(chǎn)品名稱	規(guī)格
Peviva	10020	M65 ELISA 細(xì)胞死亡M65 ELISA試劑盒	96 wells
Peviva	10011	M30 Apoptosense ELISA 細(xì)胞凋亡M30 ApoptosenseELISA試劑盒	96 wells