微生物實驗冰凍切片的方法及注意事項
微生物實驗冰凍切片的方法及注意事項！
一、實驗前準備
⒈清理實驗臺及儀器
⒉開啟冷凍切片機并將冷凍切片機預降至所需溫度（- 15~-20 ℃*）
⒊準備好處理好的載玻片、刀片、膠水以及藥品
二、取材
解剖之后迅速取出所需的新鮮組織，用干紗布或濾紙擦干后不需固定直接取材（24×24×2mm*）,以防形成冰晶造成切片中形成形狀不一的空泡,使細胞內結構移位。
注：取材中目的標本既要明確也要確保其結構的完整性，應避免不必要的脂肪及壞死組織附著;要盡量剔除毛發(fā)、硬骨或鈣化物;保乳手術切緣由于脂肪組織較多,取材厚度最好不要超過 3mm，厚者冰凍費時，大者難以切完整。甲狀腺及淋巴結組織要帶全組織被膜并除去多余的脂肪組織。
三、冷凍切片
⒈取出組織支承器，放平擺好組織，周邊滴上包埋劑，速放于冷凍臺上冰凍，用吸熱器壓住組織，至包埋劑與組織凍結成白色冰體即可切片（1~3分種）。
⒉將冷凍好的組織塊，夾緊于切片機持承器上，啟動粗進退鍵，轉動旋鈕，將組織修平。
⒊調好欲切的厚度，根據不同的組織而定，原則上是細胞密集的薄切，纖維多細胞稀的可稍為厚切，一般在5～10μm間。
⒋調好防卷板。制作冰凍切片，關鍵在于防卷板的調節(jié)上，這就要求操作者要細心，準確地將其調較好，調校至適當的位置。切片時，以切出完整、平滑的切片為準。切好的組織在干凈的玻片上黏附時順著一個方向稍微用力輕輕一帶 ,可避免組織攤片過程中皺折 ,保證組織結構的完整及切片的美觀。
注：①包埋劑的選用：包埋劑是對冷凍切片質量一重要影響因素，包埋劑用量要適宜，過多或過少都會影響標本冷凍質量。常用的有三種包埋劑OCT劑、B超藕合劑以及普通膠水。B超藕合劑適用于細胞豐富質地較嫩的組織,普通膠水或 OCT劑適用于纖維豐富質地偏硬組織。（OCT包埋劑驟冷時固化，其冷凍速度和軟硬韌度與組織相近，其還具有水溶性，不影響染色等優(yōu)點。）
②組織塊過�。合葘⑸倭磕z擠在托架上預先放在冰凍機中冷凍,約30秒鐘左右待膠凝固時將小組織放上,組織周圍再加一些膠,再次置于冷凍機中冷凍,這樣組織被墊高,就能快速切出高質量的切片。
③冷凍箱及冷凍頭的溫度高低，要根據不同的組織而定。溫度過低會導致組織塊過硬,切片碎裂,出現梯田狀薄厚不均或空洞;反之,溫度過高,組織塊硬度不夠 ,切片不易成形或成皺褶。數據圖1供參考。
④當切片時，如果發(fā)現冰凍過度時，可將冰凍的組織連同支承器取出來，在室溫停留片刻，再行切片，或者用口中哈氣，或者用大拇指按壓組織塊，以此來軟化組織，再行切片。另者，調高冰凍點。
⑤用于附貼切片的載玻片，不能存放于冷凍處，于室溫存放即可。因為當附貼切片時，從室溫中取出的載玻片與冷凍箱中的切片有一種溫度差，當溫度較高的載玻片附貼上溫度較低的切片時，由于兩種物質間溫度的差別，當它們碰撞在一起時，分子彼此間發(fā)生轉移而產生了一種吸附力，使切片與載玻片牢固地附貼在一起。如果使用冷藏的載玻片來附貼切片，由于溫度相同，沒有發(fā)生上述的現象。
北京百歐博偉生物技術有限公司擁有Biolog微生物鑒定系統(tǒng)，超低溫冰箱，生物安全柜等儀器設備可進行對微生物分離、鑒定等常規(guī)的分子實驗研究。對我國生命科學研究、生物技術創(chuàng)新和產業(yè)發(fā)展的需求進行積極的面對社會乃至國外收集保藏提供微生物菌種資源。在保證生物安全和保護知識產權的前提下，為工農業(yè)生產、衛(wèi)生健康、環(huán)境保護、科研教育提供微生物物種資源、基因資源、信息資源和專業(yè)技術服務。
http://www.biobw.com/
一、實驗前準備
⒈清理實驗臺及儀器
⒉開啟冷凍切片機并將冷凍切片機預降至所需溫度（- 15~-20 ℃*）
⒊準備好處理好的載玻片、刀片、膠水以及藥品
二、取材
解剖之后迅速取出所需的新鮮組織，用干紗布或濾紙擦干后不需固定直接取材（24×24×2mm*）,以防形成冰晶造成切片中形成形狀不一的空泡,使細胞內結構移位。
注：取材中目的標本既要明確也要確保其結構的完整性，應避免不必要的脂肪及壞死組織附著;要盡量剔除毛發(fā)、硬骨或鈣化物;保乳手術切緣由于脂肪組織較多,取材厚度最好不要超過 3mm，厚者冰凍費時，大者難以切完整。甲狀腺及淋巴結組織要帶全組織被膜并除去多余的脂肪組織。
三、冷凍切片
⒈取出組織支承器，放平擺好組織，周邊滴上包埋劑，速放于冷凍臺上冰凍，用吸熱器壓住組織，至包埋劑與組織凍結成白色冰體即可切片（1~3分種）。
⒉將冷凍好的組織塊，夾緊于切片機持承器上，啟動粗進退鍵，轉動旋鈕，將組織修平。
⒊調好欲切的厚度，根據不同的組織而定，原則上是細胞密集的薄切，纖維多細胞稀的可稍為厚切，一般在5～10μm間。
⒋調好防卷板。制作冰凍切片，關鍵在于防卷板的調節(jié)上，這就要求操作者要細心，準確地將其調較好，調校至適當的位置。切片時，以切出完整、平滑的切片為準。切好的組織在干凈的玻片上黏附時順著一個方向稍微用力輕輕一帶 ,可避免組織攤片過程中皺折 ,保證組織結構的完整及切片的美觀。
注：①包埋劑的選用：包埋劑是對冷凍切片質量一重要影響因素，包埋劑用量要適宜，過多或過少都會影響標本冷凍質量。常用的有三種包埋劑OCT劑、B超藕合劑以及普通膠水。B超藕合劑適用于細胞豐富質地較嫩的組織,普通膠水或 OCT劑適用于纖維豐富質地偏硬組織。（OCT包埋劑驟冷時固化，其冷凍速度和軟硬韌度與組織相近，其還具有水溶性，不影響染色等優(yōu)點。）
②組織塊過�。合葘⑸倭磕z擠在托架上預先放在冰凍機中冷凍,約30秒鐘左右待膠凝固時將小組織放上,組織周圍再加一些膠,再次置于冷凍機中冷凍,這樣組織被墊高,就能快速切出高質量的切片。
③冷凍箱及冷凍頭的溫度高低，要根據不同的組織而定。溫度過低會導致組織塊過硬,切片碎裂,出現梯田狀薄厚不均或空洞;反之,溫度過高,組織塊硬度不夠 ,切片不易成形或成皺褶。數據圖1供參考。
④當切片時，如果發(fā)現冰凍過度時，可將冰凍的組織連同支承器取出來，在室溫停留片刻，再行切片，或者用口中哈氣，或者用大拇指按壓組織塊，以此來軟化組織，再行切片。另者，調高冰凍點。
⑤用于附貼切片的載玻片，不能存放于冷凍處，于室溫存放即可。因為當附貼切片時，從室溫中取出的載玻片與冷凍箱中的切片有一種溫度差，當溫度較高的載玻片附貼上溫度較低的切片時，由于兩種物質間溫度的差別，當它們碰撞在一起時，分子彼此間發(fā)生轉移而產生了一種吸附力，使切片與載玻片牢固地附貼在一起。如果使用冷藏的載玻片來附貼切片，由于溫度相同，沒有發(fā)生上述的現象。
北京百歐博偉生物技術有限公司擁有Biolog微生物鑒定系統(tǒng)，超低溫冰箱，生物安全柜等儀器設備可進行對微生物分離、鑒定等常規(guī)的分子實驗研究。對我國生命科學研究、生物技術創(chuàng)新和產業(yè)發(fā)展的需求進行積極的面對社會乃至國外收集保藏提供微生物菌種資源。在保證生物安全和保護知識產權的前提下，為工農業(yè)生產、衛(wèi)生健康、環(huán)境保護、科研教育提供微生物物種資源、基因資源、信息資源和專業(yè)技術服務。
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